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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1737-1742页

作者：杜宏梅崔杨凤陈明安徽医科大学基础医学院药理学教研室合肥230032

目的研究急性睡眠剥夺(SD)对小鼠焦虑和抑郁样行为的影响,并探讨其可能的分子机制。方法随机将33只雄性8周龄C57BL/6小鼠分为环境对照(EC)组和SD组。采用旷场实验和十字高架实验评估小鼠自主行为和焦虑行为;采用强迫游泳实验和悬尾实验... 详细信息

目的研究急性睡眠剥夺(SD)对小鼠焦虑和抑郁样行为的影响,并探讨其可能的分子机制。方法随机将33只雄性8周龄C57BL/6小鼠分为环境对照(EC)组和SD组。采用旷场实验和十字高架实验评估小鼠自主行为和焦虑行为;采用强迫游泳实验和悬尾实验检测小鼠抑郁行为。Western blot法检测小鼠海马区神经炎症蛋白和自噬相关蛋白水平的表达。结果与EC组比较,在旷场实验中SD组小鼠总运动距离显著增加(P<0.01),穿线次数和中央区域时间未表现出显著差异;在强迫游泳实验中SD组小鼠不动时间显著增加(P<0.01),但悬尾实验和十字高架实验中各指标均无显著差异。Western blot结果显示:与EC组比较,SD组小鼠海马区NLRP1、TNF-α、IL-1β、IL-18和自噬蛋白p62水平显著升高,Atg5、Atg7水平显著降低,AMPK磷酸化水平也显著降低。结论SD可能通过抑制小鼠海马区AMPK-自噬信号,上调神经炎症水平,导致小鼠出现抑郁样行为。

关键词：急性睡眠剥夺抑郁样行为自噬神经炎症 p-AMPK

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CHMP2B高表达促进胰腺癌发生和发展的机制

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安徽医科大学学报 2024年第9期59卷 1551-1556页

作者：曹天宇金皓东黄灿安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第一临床医学院合肥230032

目的解析带电多泡体蛋白2B(CHMP2B)在胰腺癌中高表达的临床意义,探究CHMP2B在胰腺癌中的促癌机制。方法通过GEPIA网站的转录组学分析胰腺癌中CHMP2B的表达情况,探究CHMP2B的表达与胰腺癌无疾病生存率和总生存率的关系。通过Western blo... 详细信息

目的解析带电多泡体蛋白2B(CHMP2B)在胰腺癌中高表达的临床意义,探究CHMP2B在胰腺癌中的促癌机制。方法通过GEPIA网站的转录组学分析胰腺癌中CHMP2B的表达情况,探究CHMP2B的表达与胰腺癌无疾病生存率和总生存率的关系。通过Western blot法检测HPNE细胞与BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1三种胰腺癌细胞中CHMP2B的表达。胰腺癌在MIA PaCa-2细胞中使用Lipofectamine 2000转染CHMP2B因子的过表达质粒,通过Western blot验证在MIA PaCa-2中过表达CHMP2B质粒的过表达效果。通过克隆形成实验比较过表达CHMP2B因子对MIA PaCa-2细胞成瘤能力。CCK-8实验和Transwell实验验证过表达CHMP2B因子对MIA PaCa-2细胞增殖和迁移侵袭的影响。采用免疫荧光染色检测CHMP2B因子的细胞定位,Western blot法检测CHMP2B高表达对微管关联蛋白1轻链3B(MAP1LC3B)和重组核孔蛋白62(P62)表达的影响。结果CHMP2B因子在胰腺癌组织中表达升高(P<0.01)。CHMP2B因子的过表达降低胰腺癌患者的总生存率和无疾病生存率(P<0.01)。人胰腺癌细胞系中CHMP2B表达量明显高于正常人胰腺导管上皮细胞。CHMP2B的高表达促进胰腺癌MIA PaCa-2细胞成瘤,同时与对照组相比CHMP2B高表达导致胰腺癌增殖、迁移和侵袭能力升高。免疫荧光染色可见CHMP2B在细胞核和细胞质中均有分布,并与膜泡分泌相关。CHMP2B的高表达促进了MAP1LC3B的表达,但是抑制了P62的表达。结论临床胰腺癌组织样本中CHMP2B的高表达与体外胰腺癌细胞系中的高表达相一致。CHMP2B分布在细胞核和细胞质,并且参与膜泡运输和溶酶体自噬,在胰腺癌细胞系MIA PaCa-2中,CHMP2B与自噬标志物MAP1LC3B表达呈正相关,并且抑制P62的表达。可知CHMP2B对胰腺癌恶性程度的促进与细胞自噬相关。CHMP2B通过调节膜泡运输和细胞自噬满足胰腺癌细胞高的营养代谢需求,进而促进胰腺癌的恶性生物学行为。

关键词： CHMP2B 膜泡运输胰腺癌溶酶体自噬 P62 MAP1LC3B

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抗氧化转录因子Nrf2与Rad51相互作用降低BLM对细胞DNA的损伤

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安徽医科大学学报 2022年第11期57卷 1769-1774页

作者：徐倩倩张沛誉陈妮安徽医科大学基础医学院核医学教研室合肥230032

目的探究核因子E2相关因子2(Nrf2)在博莱霉素(BLM)诱导肺癌细胞DNA损伤中的作用机制。方法用活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测人肺癌细胞A549和H1299细胞内组织ROS的荧光强度。用Western blot及微核检测A549和H1299细胞在5μg/ml BLM... 详细信息

目的探究核因子E2相关因子2(Nrf2)在博莱霉素(BLM)诱导肺癌细胞DNA损伤中的作用机制。方法用活性氧(ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测人肺癌细胞A549和H1299细胞内组织ROS的荧光强度。用Western blot及微核检测A549和H1299细胞在5μg/ml BLM处理后细胞DNA损伤情况。接着分别构建Nrf2低表达瞬转siRNA及稳转细胞系shRNA的肺癌细胞来检测在BLM作用后Nrf2低表达的细胞DNA损伤情况。细胞内Nrf2和Rad51蛋白相互作用采用免疫共沉淀方法进行检测。结果研究显示,在BLM作用下,A549和H1299细胞内的ROS水平上升(P<0.01),且出现Nrf2进入细胞核发生活化的现象。在BLM作用下,白藜芦醇(Res)刺激A549和H1299细胞能使Nrf2的蛋白表达水平上调(P<0.01),然而DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的表达却下降(P<0.01)。相反,用siRNA干扰细胞内Nrf2的表达后,在BLM作用下A549和H1299细胞的γ-H2AX蛋白表达上调(P<0.01)。Western blot结果显示同源重组修复蛋白Rad51的表达与Nrf2低表达的A549细胞中Nrf2蛋白的表达出现同步下调(P<0.01)。结论肿瘤细胞内抗氧化转录因子Nrf2可与Rad51相互作用调控Rad51的表达,降低BLM诱导的细胞DNA的损伤。

关键词： Nrf2 Rad51 DNA损伤修复博莱霉素

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PKC/TRPV1通路在大鼠三叉神经痛中的病理作用

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安徽医科大学学报 2024年第5期59卷 846-851页

作者：吴贝贝沈莲王元银王烈成安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔疾病研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032

目的探究蛋白激酶C(PKC)/瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)通路在大鼠三叉神经疼痛(TN)中的病理作用。方法采用眶下神经慢性收缩术(ION-CCI)来创建大鼠TN的模型。将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、CCI组、CCI+DMSO组、CCI+GF109203X(... 详细信息

目的探究蛋白激酶C(PKC)/瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)通路在大鼠三叉神经疼痛(TN)中的病理作用。方法采用眶下神经慢性收缩术(ION-CCI)来创建大鼠TN的模型。将大鼠随机分为假手术组(Sham组)、CCI组、CCI+DMSO组、CCI+GF109203X(双吲哚马来酰亚胺,一种PKC抑制剂)组。使用Von Frey毛刷检测大鼠的机械痛阈。采用qRT-PCR及Western blot分别检测三叉神经节(TG)内PKC和TRPV1表达量的变化。HE染色观察TG的病理变化。结果CCI组大鼠机械痛阈降低(P<0.05),大鼠TG内的磷酸化的PKC(p-PKC)和TRPV1表达显著增加(P<0.05)。组织病理学结果显示,与Sham组相比,CCI组观察到TG出现明显的炎性细胞浸润增多、神经细胞肿胀等变化。注射GF109203X后降低了大鼠TG内PKC的磷酸化和TRPV1的表达,大鼠机械痛阈升高(P<0.05),光学显微镜下可见TG内细胞肿胀和炎症细胞有所减少。结论PKC/TRPV1通路可能参与了大鼠的三叉神经痛。

关键词： PKC TRPV1 TG 三叉神经痛机械痛阈

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干涉NFATc1表达影响细胞周期运转抑制结肠癌细胞增殖的机制

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1701-1706页

作者：徐光瑶黄灿安徽医科大学基础医学院生物化学教研室合肥230032

目的根据活化T-细胞核因子1(NFATc1)在结肠癌中的表达及预后情况,利用shRNA转染细胞干涉NFATc1表达,检测NFATc1对结肠癌细胞增殖各表型的影响,并初步分析可能的机制。方法利用TCGA数据库分析NFATc1高表达对结肠癌预后的影响,取临床结肠... 详细信息

目的根据活化T-细胞核因子1(NFATc1)在结肠癌中的表达及预后情况,利用shRNA转染细胞干涉NFATc1表达,检测NFATc1对结肠癌细胞增殖各表型的影响,并初步分析可能的机制。方法利用TCGA数据库分析NFATc1高表达对结肠癌预后的影响,取临床结肠癌患者术后样本进行免疫组化染色,比较NFATc1在结肠癌组织和癌旁组织中的表达差异。通过将shRNA转染结肠癌细胞干涉NFATc1后,利用CCK-8测定NFATc1干涉后的细胞增殖变化;利用克隆形成实验预测NFATc1干涉后结肠癌细胞成瘤潜力;利用碘化丙锭染色细胞,通过流式细胞仪分析细胞周期分布变化;利用qPCR检测NFATc1对结肠癌细胞周期相关因子转录活性的影响。结果生存曲线显示NFATc1高表达的结肠癌患者预后更差。临床结肠癌组织NFATc1的表达高于癌旁正常组织。干涉NFATc1导致结肠癌细胞的增殖速率明显降低,克隆形成能力显著减弱,细胞周期出现G0/G1期停滞。qPCR结果表明干涉NFATc1后,多个关键的细胞周期抑制因子转录活性明显上升。结论NFATc1通过抑制细胞周期调控因子转录活性促进细胞周期运转,从而促进结肠癌细胞增殖和成瘤能力。

关键词： NFATc1 结肠癌细胞周期细胞增殖

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HMGB1在三叉神经痛中的作用

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 436-441页

作者：沈莲吴贝贝王烈成王元银安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔疾病研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032

目的构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;... 详细信息

目的构造大鼠三叉神经痛(TN)模型探索三叉神经节(TG)内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达情况及HMGB1对疼痛影响的可能机制。方法采用眶下神经缩窄术构造大鼠TN模型,分为手术组(CCI组)和空白组(Sham组),机械痛阈检测鉴定模型构建是否成功;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及Western blot检测Sham组及CCI组大鼠术侧TG中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达量;连续两周每天腹腔注射50 mg/kg HMGB1抑制剂甘草酸(GL),以生理盐水(NS)作为对照,分为CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组;RT-qPCR及Western blot检测CCI组、CCI+NS组、CCI+GL组大鼠术侧TG中HMGB1,TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达量。结果大鼠术侧机械阈值持续降低(P<0.05),TN模型构造成功,大鼠眶下神经受到慢性压迫性损伤,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB mRNA及蛋白表达量升高(P<0.05);腹腔注射GL后,术侧TG中的HMGB1、TLR4、NF-κB降低(P<0.05)。结论HMGB1与TN有关,HMGB1可能通过TLR4/NF-κB通路调控TN。

关键词：三叉神经痛 HMGB1 甘草酸眶下神经缩窄术 TLR4 NF-κB

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肝细胞癌中FAM134B表达及其意义

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临床与实验病理学杂志 2025年第3期41卷 317-323,333页

作者：黄山王弦卫晶晶吴正升安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥230032 安徽医科大学第二附属医院病理科合肥230601

目的探讨FAM134B在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测60例HCC组织和癌旁非肿瘤肝组织中FAM134B的表达,并分析FAM134B表达与HCC临床病理特征、预后的关系。应用Transwel... 详细信息

目的探讨FAM134B在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法检测60例HCC组织和癌旁非肿瘤肝组织中FAM134B的表达,并分析FAM134B表达与HCC临床病理特征、预后的关系。应用Transwell实验、CCK-8实验和克隆形成实验检测敲低FAM134B对HCC细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响。结果FAM134B在HCC和癌旁正常组织中高表达率分别为70.0%(42/60)和40.0%(24/60)。与癌旁正常组织相比,FAM134B在HCC中的表达显著增高(P<0.001),与患者脉管侵犯、肿瘤最大径和早期复发呈正相关(P均<0.05)。生存分析表明FAM134B的高表达是HCC患者的不良预后(P均<0.05)和高复发风险的独立预后因子(P均<0.05)。体外实验表明,敲低FAM134B可抑制HCC细胞的迁移、侵袭和增殖能力(P均<0.05)。运用TCGA数据库行GSEA分析,结果显示FAM134B的表达与AKT/mTOR通路呈正相关。结论FAM134B高表达可能是HCC高复发风险和不良预后的标志物,有望作为HCC治疗的潜在靶点。

关键词：肝肿瘤 FAM134B 预后侵袭迁移增殖

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新型R型噬菌体尾样细菌素对MRSA的抗菌活性研究

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中国药理学通报 2024年第9期40卷 1760-1765页

作者：唐伟刘颖唐震海唐颖李昕姚杰李维祖徐元宏周强安徽医科大学第二附属医院检验科安徽合肥230601 中国科学院合肥物质科学研究院强磁场科学中心安徽合肥230031 安徽医科大学科研实验中心安徽合肥230032 皖南医学院临床医学院安徽芜湖241002 安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科安徽合肥230022

目的探索阴沟肠杆菌SHAMU191747所分泌的新型R型噬菌体尾样细菌素(phage tail-like bacteriocin,PTLB)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抗菌活性。方法琼脂平板拮抗试验和肉汤微量发酵试验,检测阴沟肠杆菌SHAMU191747对MRSA的拮抗活性。超高速离心法和密度梯度离心法,制备阴沟肠杆菌SHAMU191747发酵上清液粗提物。使用透射电镜检测粗提物中有无新型R型PTLB。琼脂平板点种法,验证粗提物对MRSA的抗菌活性。采用SDS-PAGE电泳检测新型R型PTLB的分子量。结果阴沟肠杆菌SHAMU191747分泌新型R型PTLB,对MRSA具有强拮抗效应。新型R型PTLB的分子量约35 ku,能够高效杀伤MRSA;尾鞘未收缩的功能性分子的物理尺寸为(142.7±4.3)×(13.8±0.6)nm,尾鞘收缩的非功能性分子的物理尺寸为(57.7±1.2)×(20.8±1.5)nm。结论阴沟肠杆菌SHAMU191747产生的新型R型PTLB能够高效杀伤MRSA,具有开发成新型抗菌药物的潜力,临床应用前景很大。

关键词：阴沟肠杆菌细菌素噬菌体尾样细菌素金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗菌活性

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基于双五氟苄基硫醚的气相色谱-质谱法测定大鼠脑组织中的H_(2)S

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中国药理学通报 2022年第7期38卷 1114-1120页

作者：王秀汪生陈志武安徽医科大学基础医学院药理教研室安徽合肥230032 安徽医科大学科研实验中心安徽合肥230032

目的通过气相色谱-质谱(GC-MS)法测定硫化氢(H_(2)S)的衍生化产物双五氟苄基硫醚(bispentafluorobenzyl sulfide,C_(6)F_(5)CH_(2)SCH_(2)C_(6)F_(5)),建立大鼠脑组织中H_(2)S的测定方法。方法色谱条件:HP-5MS(30 m×250μm×0.25μm)色谱柱,色谱柱程序升温,进样口温度280℃。质谱条件:20 eV电子轰击离子源,离子源温度230℃,四极杆温度150℃,接口温度280℃。采用多反应检测扫描(MRM)模式,对C_(6)F_(5)CH_(2)SCH_(2)C_(6)F_(5)的离子对(m/z 394→181,m/z 181→161)进行定量、定性分析。结果脑组织样本中硫氢化钠(NaHS)在0.25~256μmol·L^(-1)范围内具有良好的线性关系,检测限为0.1μmol·L^(-1)。日内、日间精密度均小于15%,无明显的基质效应,回收率在90%以上。可选择性测定脑组织中的H_(2)S,测得大鼠脑皮质组织中基础H_(2)S浓度为(11.84±0.38)μmol·L^(-1),静脉注射NaHS后,脑组织中H_(2)S浓度呈剂量依赖性增高。结论C_(6)F_(5)CH_(2)SCH_(2)C_(6)F_(5)的GC-MS法是测定大鼠脑组织中H_(2)S的一种可靠、有效的方法,H_(2)S可透过血脑屏障进入脑组织。

关键词：硫化氢气相色谱-质谱法脑组织双五氟苄基硫醚衍生化血脑屏障

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人参皂苷Rg1通过抑制MAPK-NLRP1通路减轻2型糖尿病诱导的神经元损伤

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中国药理学通报 2023年第11期39卷 2034-2042页

作者：黄蕾汪燕燕孙冉周慧敏姬朋敏孔亮亮李卫平李维祖安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学第一附属医院药剂科安徽合肥230032

目的研究人参皂苷Rg1对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠神经元损伤的影响并探讨其潜在机制。方法雄性C57BL/6小鼠84只,随机分为7组:control组、HFD组、HFD+STZ组、Rg1(1、5、10 mg·kg^(-1))和二甲双胍治疗组。用高... 详细信息

目的研究人参皂苷Rg1对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠神经元损伤的影响并探讨其潜在机制。方法雄性C57BL/6小鼠84只,随机分为7组:control组、HFD组、HFD+STZ组、Rg1(1、5、10 mg·kg^(-1))和二甲双胍治疗组。用高脂饮食(HFD)和链脲霉素(STZ)制备T2DM小鼠模型,成功后给予8周的药物治疗。水迷宫评估小鼠学习记忆能力,HE染色、β-半乳糖苷酶(β-Gal)染色、普鲁士蓝染色评估皮质和海马受损情况,免疫荧光检测脑内NEUN和NLRP1的共定位及表达,RT-PCR检测NLRP1相关mRNA水平,Western blot检测脑内NLRP1、MAPK相关蛋白的量。结果水迷宫实验表明,经过Rg1治疗的小鼠学习记忆能力明显提高。组织学染色表明,Rg1能够使T2DM小鼠的神经元损伤、衰老以及脑血管损伤明显改善。免疫荧光检测表明,Rg1治疗减少了T2DM小鼠脑内的NLRP1在NEUN阳性神经元的表达。Western blot和RT-PCR结果显示,Rg1治疗降低了T2DM小鼠脑内NLRP1、ASC,caspase-1、IL-1β,p-ERK、p-JNK、p-P38和p-GSK-3β等蛋白表达及NLRP1,ASC,caspase-1等mRNA水平。结论人参皂苷Rg1可以相对减少T2DM小鼠的神经元受损,其机制可能与抑制MAPK-NLRP1信号通路有关。

关键词：人参皂苷Rg1 2型糖尿病 NLRP1炎症小体 MAPK信号通路认知功能障碍学习记忆

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