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中华放射医学与防护杂志 2012年第2期32卷 166-169页

作者：雷宇金问森陈先平汪志吴珊孙国平安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科合肥230022 安徽医科大学基础医学院核医学教研室

目的探讨丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用的机制。方法采取四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,测定丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制率。分为细胞对照组、单纯加药组、单纯照射组和药物联合照射组。通过克隆形成实验,观察丹皮... 详细信息

目的探讨丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞放射增敏作用的机制。方法采取四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）,测定丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制率。分为细胞对照组、单纯加药组、单纯照射组和药物联合照射组。通过克隆形成实验,观察丹皮酚对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响。采用TUNEL染色与流式细胞仪,检测肿瘤细胞凋亡率,Western blot法观察细胞内Survivin蛋白的表达变化。结果随着丹皮酚浓度的增加,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞的抑制作用相应地增加,IC50为（25.2±2.1） mg/L。经克隆形成实验证实,丹皮酚对人肺腺癌A549细胞有明显的增敏效果,放射增敏比（SER）可达1.29。药物联合照射组的细胞凋亡较单纯照射组明显增加,呈现剂量-时间依赖效应（t＝4.95、3.03、3.78、4.59、2.88、3.70和5.54,P＜0.05）。同时,Western blot法检测出丹皮酚能够明显下调细胞内Survivin蛋白的表达,单纯给予不同浓度丹皮酚24 h后Survivin蛋白表达下调22.6%~56.7%（t=4.15、7.30和13.47,P＜0.05）;用丹皮酚预处理细胞再经6 Gy X射线照射后24 h,细胞内Survivin蛋白下调可达22.2％~69.4%（t=4.30、8.36和16.34,P＜0.05）。结论丹皮酚在体外对人肺腺癌A549细胞有放射增敏作用,其机制可能是下调肿瘤细胞内Survivin蛋白的表达。

关键词：放射增敏丹皮酚细胞凋亡 A549 Survivin蛋白

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氯喹抑制阿司匹林诱导的自噬增强其体外抗肝细胞癌作用

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1179-1183页

作者：王梦琳杨慧金娟安徽医科大学基础医学院药理教研室

目的研究阿司匹林对人肝细胞癌HepG2、SMMC-7721细胞的作用及其与自噬相关机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察阿司匹林及联合自噬抑制剂氯喹(CQ)对HepG2、SMMC-7721细胞增殖活力的影响;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;We... 详细信息

目的研究阿司匹林对人肝细胞癌HepG2、SMMC-7721细胞的作用及其与自噬相关机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察阿司匹林及联合自噬抑制剂氯喹(CQ)对HepG2、SMMC-7721细胞增殖活力的影响;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Western blot法检测给药处理后两种细胞中C9orf72、雷帕霉素的蛋白激酶受体(mTOR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)及微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达。结果 1.25、2.5 mmol/L阿司匹林对细胞增殖无明显作用,随浓度增加抑制作用增加。1.25、2.5、5 mmol/L阿司匹林降低细胞克隆形成率;mTOR表达降低,AMPK、C9orf72表达增加,LC3II/I比值增加。联合CQ后细胞活性明显下降,克隆形成率进一步降低, AMPK表达降低、mTOR表达增加,LC3II/I比值增加。结论联合氯喹可以通过抑制自噬而增加阿司匹林体外抗肝细胞癌作用。

关键词：阿司匹林自噬氯喹 C9orf72

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WT1高表达及CD34^+和Auer^+与急性髓细胞性白血病患者预后的关系

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中国实验血液学杂志 2016年第6期24卷 1670-1674页

作者：胡忠利黄保军潘少君安徽医科大学基础医学院免疫学教研室安徽合肥230000 蚌埠医学院检验系安徽蚌埠233000

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34^+和Auer^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT... 详细信息

目的:探讨急性非M3髓细胞性白血病(AML non-M3)患者骨髓WT1表达水平的临床意义,了解CD34^+和Auer^+的AML的生物学特征及其对初次诱导缓解率和预后的影响。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测92例初诊AML(non-M3)患者骨髓WT1表达水平,分析初次诱导缓解率(CR1)与总生存率(OS)的关系。比较CD34^+和CD34^-以及Auer^+和Auer^-AM L患者在CR1和OS方面的区别。结果:初诊时WT1高表达的AML具有较低的CR1(P<0.05)。CD34^+患者的CR1较CD34^-者低(P<0.05),Auer^+的AML患者CR1较Auer^-AM L患者高(P<0.05)。WT1高表达组的OS低于低表达组,具有显著性差异(P<0.05)。CD34^+组的OS低于CD34^-组,且具有显著差异(P<0.05),Auer^+组与Auer^-组的OS没有明显差异。结论:AML患者骨髓WT1高表达及CD34^+提示患者的预后不良,Auer小体阳性仅与CR1相关,而与OS无关。

关键词：急性髓细胞性白血病 Auer小体 WT1基因 CD34 总生存率

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硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 992-998页

作者：张玉梅琼沈玉先安徽医科大学基础医学院药理学教研室生物药物研究所安徽合肥230032

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对... 详细信息

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^(-1)的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α+CK19+双阳性细胞。结果与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、AST、DBIL和TBIL水平升高;肝脏组织中ICC标志物CK7、CK19及细胞增殖标志物Ki67表达上调;免疫细胞标志分子CD68和TNF-α表达增多,肝星状细胞活化标志物α-SMA的阳性染色增多;肝组织中出现HNF4α+CK19+双表型细胞。结论TAA可用于诱导小鼠ICC模型,该模型具有炎症免疫细胞浸润、纤维化及ICC分子标志物增高等特点,这与人类的ICC非常相似,可用于评价内源性分子和外源性药物对ICC作用的研究。

关键词：硫代乙酰胺肝内胆管癌小鼠模型肝纤维化炎症

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STM2457减轻顺铂诱导的高尿酸下肾小管细胞损伤

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1540-1546页

作者：卞和格金娟安徽医科大学基础医学院药理教研室合肥230032

目的观察小鼠在高尿酸血症基础上使用顺铂诱导急性肾损伤(AKI)对于肾脏病变的影响情况以及探究甲基转移酶-3(METTL3)在其中发挥的作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成对照组、高尿酸血症组、AKI组和高尿酸血症+AKI复合模型组。通过灌胃氧... 详细信息

目的观察小鼠在高尿酸血症基础上使用顺铂诱导急性肾损伤(AKI)对于肾脏病变的影响情况以及探究甲基转移酶-3(METTL3)在其中发挥的作用。方法将C57BL/6小鼠随机分成对照组、高尿酸血症组、AKI组和高尿酸血症+AKI复合模型组。通过灌胃氧嗪酸钾+腺嘌呤21 d建立高尿酸血症模型,腹腔注射顺铂3 d建立AKI模型,检测血肌酐、尿素氮、血尿酸、HE、Masson病理染色,探究不同模型对小鼠肾脏损伤情况。Western blot检测α-平滑肌蛋白(α-SMA)、肾损伤分子-1、METTL3蛋白表达变化;qPCR检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、IL-1β等mRNA变化。m6A检测试剂盒检测小鼠总体甲基化水平。结果与单纯顺铂引起的AKI模型组相比,高尿酸血症和AKI复合模型组的血肌酐、尿素氮、血尿酸均明显升高。病理染色、Western blot和qPCR也显示复合模型组肾脏纤维化加重,METTL3表达水平升高。m6A检测结果说明实验组小鼠的总体甲基化水平升高且复合模型组明显高于单纯AKI组。体外实验中,使用METTL3特异性抑制剂STM2457则能够有效减轻肾小管上皮细胞的损伤以及降低炎症。结论顺铂能够加重高尿酸引起的肾脏炎症和纤维化;STM2457对于高尿酸基础上顺铂诱导的细胞损伤具有治疗作用,METTL3可能是治疗有关肾脏损伤的潜在靶点。

关键词：高尿酸血症高尿酸肾病急性肾损伤 m6A 表观遗传学

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日本血吸虫成虫生殖系统的激光共聚焦显微镜形态学观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第5期26卷 392-394页

作者：张薇娜黄大可张鹏任翠平王晓楠张云霞沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

BALB/c小鼠经皮感染日本血吸虫尾蚴(40±2条/只)35d后剖杀,获取成虫,经固定、染色、脱色、脱水、透明和封片等处理制成整装玻片标本,用激光共聚焦显微镜观察。显微镜下日本血吸虫的整体形态以及雄虫生殖系统中的睾丸、贮精囊和生殖... 详细信息

BALB/c小鼠经皮感染日本血吸虫尾蚴(40±2条/只)35d后剖杀,获取成虫,经固定、染色、脱色、脱水、透明和封片等处理制成整装玻片标本,用激光共聚焦显微镜观察。显微镜下日本血吸虫的整体形态以及雄虫生殖系统中的睾丸、贮精囊和生殖孔,雌虫生殖系统中的卵巢、卵黄腺、输卵管、卵黄管、受精囊、卵模、梅氏腺、子宫、雌性生殖孔以及虫卵等形态结构清晰。激光共聚焦显微镜技术可较好地观察日本血吸虫虫体各器官组织和细胞结构。

关键词：日本血吸虫生殖系统细胞学激光扫描共焦显微镜

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脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin表达及线粒体自噬形成

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中国免疫学杂志 2014年第11期30卷 1457-1461页

作者：程艳伟靳梦醒闫海黄大可黄保军张林杰安徽医科大学基础医学院免疫学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Wes... 详细信息

目的:探讨巨噬细胞在脂多糖(LPS)处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法:无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞;200 ng/ml LPS作用巨噬细胞,JC-1标记线粒体,流式细胞仪检测线粒体膜电位变化;RT-PCR检测巨噬细胞parkin mRNA水平;Western blot检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平;激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果:JC-1染色流式细胞仪检测结果显示,LPS处理后,巨噬细胞线粒体膜电位降低,并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势;parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加,但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显;parkin在巨噬细胞定位结果表明,未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布,而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集;Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大,表明巨噬细胞发生明显的自噬;激光共聚焦显微镜结果显示,巨噬细胞在LPS刺激后,parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论:巨噬细胞在LPS刺激后,parkin表达增加并介导线粒体自噬形成,参与对损伤线粒体的清除,可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。

关键词：巨噬细胞脂多糖线粒体自噬 parkin

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自然杀伤细胞分泌干扰素γ促进乙肝病毒的清除

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安徽医科大学学报 2017年第2期52卷 215-220页

作者：胡辛胡春松黄保军安徽医科大学基础医学院免疫教研室合肥230032

目的探讨自然杀伤细胞(NK)在乙型肝炎病毒(HBV)清除过程中的作用机制。方法通过对成年小鼠高压注射20μg p GEM4Z/HBV1.2质粒建立HBV急性排斥小鼠模型,采用放射免疫试剂盒定量检测不同时间点(1、2、3、4、5周)小鼠血清中HBsAg、免疫组... 详细信息

目的探讨自然杀伤细胞(NK)在乙型肝炎病毒(HBV)清除过程中的作用机制。方法通过对成年小鼠高压注射20μg p GEM4Z/HBV1.2质粒建立HBV急性排斥小鼠模型,采用放射免疫试剂盒定量检测不同时间点(1、2、3、4、5周)小鼠血清中HBsAg、免疫组化检测肝脏组织中HBc Ag来评估模型的建立。流式细胞术分析对照小鼠和HBV小鼠肝脏中NK细胞比例和绝对数量变化,进一步分析两种小鼠NK细胞活化情况和分泌干扰素(IFN)-γ的能力变化。通过肝脏组织切片HE染色以及谷丙转氨酶检测判断小鼠肝脏损伤状况。最后,通过PK136抗体清除小鼠NK细胞以及IFN-γ中和抗体进一步证实NK细胞分泌的IFN-γ是否参与HBV的清除过程。结果小鼠高压注射20μg p GEM4Z/HBV1.2质粒后,第1周血清中HBsAg和肝脏组织中HBc Ag表达量都较高,但呈降低趋势,在4~5周后几乎转阴,很好地模拟了临床上急性感染HBV的病例。与对照组相比,HBV小鼠肝脏中NK细胞比例和绝对数量明显增高;进一步研究显示HBV小鼠NK细胞活化分子CD69表达也显著上升,同时IFN-γ分泌增加。与此同时,小鼠肝脏呈无损伤状态。预先清除NK细胞或阻断IFN-γ的功能能显著增加HBV小鼠中相关抗原的含量,延缓HBV的排斥。结论在HBV急性排斥模型中,NK细胞通过分泌IFN-γ促进HBV的清除。

关键词： HBV NK细胞 IFN-γ

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Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

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中国药理学通报 2018年第8期34卷 1150-1157页

作者：潘永露何淑芳韩正怡窦梦云杨婉程洁陈志武张野安徽医科大学第二附属医院麻醉科安徽合肥230601 安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032

目的评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase,ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为4组(n=3):(1)正常对照组:H9c2细胞置于DMEM/F12细胞培养液中培养;(2)H/R组:将H9c2细胞进行5 h缺氧和1 h复氧处理;(3)Fas siRNA组(H/R+Fas-siRNA):H9c2细胞转染Fas siRNA 24 h后进行H/R损伤;(4)siRNA阴性对照组(H/R+siRNA-NC):H9c2细胞转染Fas siRNA-NC 24 h后进行H/R损伤。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞活力;微量酶标法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性;AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;荧光定量RT-PCR法检测细胞Fas mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内Fas、caspase-8/3、ERK和GSK-3β蛋白表达。结果与对照组相比,H/R组细胞活力降低,LDH活性和细胞凋亡增加,Fas mRNA及蛋白水平升高,cleaved caspase-8/3、p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组相比,H/R+FassiRNA组细胞活力明显提高,LDH活性和细胞凋亡率降低,Fas mRNA及蛋白表达水平降低,cleaved caspase-8/3蛋白表达降低,p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达增高(P<0.05),而H/R+siRNA-NC组上述指标差异无统计学意义。结论 Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞H/R损伤中发挥着重要作用。

关键词： Fas caspase 细胞外信号调节激酶心肌细胞缺氧/复氧损伤凋亡

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热带性腹泻一例

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中华病理学杂志 2018年第10期47卷 802-803页

作者：郑露露鲁康洋胡乃中马维娟尹玉蔡永萍安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院消化内科

患者男，46岁。因＂反复晕倒伴进行性消瘦1年＂于2016年3月29日入院，外院多次检查提示低钾血症、大细胞性贫血、低蛋白血症，补钾治疗效果差，1年内体重下降35 kg，渐出现毛发干枯，皮肤粗糙。实验室检查：血常规：白细胞6.89×10^... 详细信息

患者男，46岁。因＂反复晕倒伴进行性消瘦1年＂于2016年3月29日入院，外院多次检查提示低钾血症、大细胞性贫血、低蛋白血症，补钾治疗效果差，1年内体重下降35 kg，渐出现毛发干枯，皮肤粗糙。实验室检查：血常规：白细胞6.89×10^9/L，中性粒细胞0.685，红细胞2.57×10^12/L，血红蛋白99 g/L，平均红细胞体积113 fL，血小板186×10^9/L；电解质：血钾3.26 mmol/L，血钙1.79 mmol/L，血磷0.94 mmol/L，血镁0.26 mmol/L，血清维生素B12浓度114 ng/L，血清叶酸浓度3.38 nmol/L；肝功能检查：血清白蛋白28.5 g/L，转氨酶及胆红素正常。

关键词：平均红细胞体积热带性血清白蛋白实验室检查腹泻大细胞性贫血维生素B12 叶酸浓度

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