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解剖学报 2022年第5期53卷 551-556页

作者：唐小露邓聪聪汪佩陈明辉田楷苏彦艳马惠吴雪艳沈玉先安徽医科大学基础医学院人体解剖学教研室合肥230032 安徽医科大学第二临床医学院合肥230032 安徽医科大学第一临床医学院合肥230032 安徽医科大学生物药物研究所合肥230032 安徽医科大学基础医学院合肥230032

目的探讨中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)在人、大鼠和小鼠脑中的表达分布。方法使用免疫组织化学染色方法,在5例人脑标本、6只小鼠及6只大鼠中检测MANF在人、大鼠和小鼠脑中的表达分布情况并比较物种间差异性。结果MANF在人、... 详细信息

目的探讨中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)在人、大鼠和小鼠脑中的表达分布。方法使用免疫组织化学染色方法,在5例人脑标本、6只小鼠及6只大鼠中检测MANF在人、大鼠和小鼠脑中的表达分布情况并比较物种间差异性。结果MANF在人、大鼠及小鼠脑中的表达水平具有脑区差异性。在人脑中,MANF在大脑皮层的表达水平最高,在皮层下区域,脑干和小脑的表达水平稍弱。MANF在大鼠和小鼠脑内的表达分布与人脑略有不同,但总体一致。结论MANF在人、大鼠和小鼠脑中的表达情况大致相同,但在物种内部,MANF在不同脑区中表达水平存在差异。

关键词：中脑星形胶质细胞源性神经营养因子脑区分布免疫组织化学人大鼠小鼠

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CDKN3在肿瘤中的表达及预后相关性分析

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安徽医科大学学报 2024年第11期59卷 1944-1957,1966页

作者：陈邦捷王欣仪杨祎品李海文邵伟顾康生安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院肿瘤放疗科合肥230022 安徽医科大学第三附属医院消化内科合肥230061 安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)在不同肿瘤中的表达变化及其对肿瘤分期预后和免疫治疗的影响。方法使用TCGA、CCLE、ICGC和GTEx数据库评估CDKN3在不同肿瘤中的表达特征;采用GEPIA2平台和Kaplan-Meier法分别评估CDKN3... 详细信息

目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)在不同肿瘤中的表达变化及其对肿瘤分期预后和免疫治疗的影响。方法使用TCGA、CCLE、ICGC和GTEx数据库评估CDKN3在不同肿瘤中的表达特征;采用GEPIA2平台和Kaplan-Meier法分别评估CDKN3对肿瘤病理分期和生存预后的影响;采用TIMER平台评估CDKN3对肿瘤免疫微环境和免疫治疗的影响,并利用生物信息学方法进一步探讨CDKN3对免疫检查点和免疫治疗关键预测指标的影响。GeneMANIA构建CDKN3的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络。京都基因和基因组百科全书(KEGG)以及基因本体(GO)数据库富集分析CDKN3相关的生物学过程和信号通路。通过转染CDKN3 siRNA验证CDKN3对HepG2细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。结果CDKN3在肿瘤中普遍高表达。CDKN3的高表达通常与较晚的病理分期和不良的生存预后相关。CDKN3表达水平与绝大部分免疫检查点呈负相关,与肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定(MSI)和碱基配对修复(MMR)基因呈正相关。CDKN3与细胞周期、细胞衰老和p53信号通路等相关。此外,EdU染色、JC-1染色、Transwell和Wound Healing实验证实CDKN3促进HCC细胞的增殖、侵袭和迁移,抑制其凋亡。结论CDKN3的异常表达与肿瘤的分期预后和免疫微环境特征密切相关,是一种潜在的肿瘤预后标志物和免疫治疗辅助靶点。

关键词： CDKN3 肿瘤泛癌分析预后评估免疫治疗生物标志物肝细胞癌

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TRIM32在皮肤黑色素瘤中的表达及预后相关性分析

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1551-1556页

作者：赵丹阳曹东升徐结苟谢娟安徽医科大学第二附属医院整形外科合肥230601 安徽医科大学基础医学院免疫学教研室合肥230032

目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组... 详细信息

目的探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值。方法应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组化方法检测TRIM32在CMM患者癌组织和癌旁组织中的表达,统计患者的临床资料,分析TRIM32表达与临床特征的相关性,采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型进行预后分析。结果与HACAT正常皮肤细胞相比,TRIM32 mRNA表达水平在A375黑色素瘤细胞中明显升高(P<0.001),在MV3黑色素瘤细胞中无明显差异(P>0.05)。CMM癌组织中TRIM32蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。CMM患者中TRIM32的表达水平与肿瘤Breslow厚度(r=0.771,P<0.001)、Clark分级呈显著的正相关(r=0.635,P<0.001),与患者的性别、有无溃疡、年龄、肿瘤原发部位均无明显相关性(P>0.05)。TRIM32表达水平、肿瘤Breslow厚度、Clark分级与CMM患者生存时间相关(P<0.01),建立COX回归模型,TRIM32表达水平与CMM患者预后关联显著(P<0.05)。结论TRIM32在A375黑色素瘤细胞和CMM患者癌组织中呈高表达。TRIM32表达水平是影响CMM患者预后的独立风险因素,TRIM32可作为CMM预后判断的参考指标。

关键词： TRIM32 皮肤黑色素瘤免疫组化预后

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结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第1期39卷 75-80页

作者：汪欣然马文潇孙菀蔚宁星语黄蓉蓉刘淼安徽医科大学第二临床医学院安徽医科大学第一临床医学院安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表... 详细信息

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白,以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体,分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-30a-Rv2628重组载体,IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达,Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性,且抗体效价达1∶1093500。结论成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌休眠生存调节子 Rv2628 多克隆抗体

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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慢性感染阶段弓形虫包囊在小鼠脑组织的动态病理变化

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安徽医科大学学报 2023年第2期58卷 184-188页

作者：吴梦云蔡茹李伊凡汪学龙姚湧安徽理工大学医学院淮南232001 安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探究弓形虫慢性感染期间弓形虫包囊在感染小鼠脑部各区域的分布与病理变化对小鼠行为与神经精神的影响。方法使用弓形虫Prugniaud株灌胃小鼠,记录感染小鼠病情;分别在小鼠感染的第10、30、40、90、120、160天取感染小鼠脑组织,分离... 详细信息

目的探究弓形虫慢性感染期间弓形虫包囊在感染小鼠脑部各区域的分布与病理变化对小鼠行为与神经精神的影响。方法使用弓形虫Prugniaud株灌胃小鼠,记录感染小鼠病情;分别在小鼠感染的第10、30、40、90、120、160天取感染小鼠脑组织,分离出海马下丘脑、前额叶、纹状体和小脑区域,HE染色观察并记录各感染区域的包囊数量和神经病理变化。结果弓形虫感染小鼠出现竖毛、弓背等症状,在第40天最为显著,随后逐渐恢复,遗留偏瘫和原地打转等症状;在各时间节点,弓形虫包囊的数量均以海马下丘脑最多,前额叶和纹状体次之,小脑最少;弓形虫包囊的直径随着时间推移均呈增大趋势。慢性感染期间,在脑组织各区域均可观察到弓形虫包囊噬神经现象等特异性病理表现,上述弓形虫脑炎的病理改变在第40天达到顶峰,后逐渐恢复,至第120天增至刺激峰,随后逐渐恢复。结论弓形虫慢性感染期间的行为和神经精神症状与弓形虫包囊在感染小鼠脑部的定位分布有一定的相关性,并呈现动态变化。

关键词：弓形虫包囊脑组织病理变化 HE染色

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乳源五肽PGPIP缓解酒精性脂肪肝及其机制研究

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安徽医科大学学报 2023年第11期58卷 1813-1818页

作者：黄九九耿奇龙李安琪秦宜德戚楠安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究乳源五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法40只C57BL/6小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIP组。采用10 d Lieber-Decarli酒精饲料喂养加1次... 详细信息

目的研究乳源五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法40只C57BL/6小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIP组。采用10 d Lieber-Decarli酒精饲料喂养加1次急性酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性脂肪肝模型,造模的同时给予药物干预。根据已有的基因表达综合(GEO)数据库中RNA测序数据,采用聚类热图对肝脏内质网应激相关基因差异表达分析。肝脏苏木素-伊红(HE)染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响,油红O染色分析各处理组对小鼠肝脏脂滴积累的影响。透射电子显微镜分析酒精代谢引起的脂滴积累对肝细胞显微结构的影响并验证PGPIP的作用效果。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关信号转导蛋白表达变化。结果PGPIP组病理学检查类似正常对照组,小鼠肝脏损伤明显减轻。模型组小鼠肝脏中有明显的脂滴积累,表现为大小不同程度的混合型脂滴,PGPIP处理后明显减少酒精诱导的肝脏脂滴积累。PGPIP对PERK-eIF2α-ATF4通路有较大影响,且对转录激活因子6(ATF6)和Cleaved Caspase 3蛋白的表达有显著性的效果。结论五肽PGPIP能缓解小鼠慢性酒精性脂肪肝和肝损伤,其机制可能是通过减少肝细胞中的脂滴积累,并且减少内质网应激和肝细胞凋亡从而发挥作用。

关键词： PGPIP 酒精性脂肪肝内质网应激 ATF4 ATF6

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内质网应激在高脂诱导的代谢障碍相关脂肪变性肝病中的作用

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安徽医科大学学报 2025年 1086-1090页

作者：胡韦康周文静张军杨振白红枚王子涵齐胤良张胜权张素梅安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室安徽医科大学附属合肥医院(合肥市第二人民医院)

目的探究内质网应激在高脂诱导的脂肪肝发生发展中的作用。方法果蝇模型及小鼠模型分为普通饲料组(对照组)、高脂饲料组(高脂组);HepG2细胞模型分为DMEM诱导组(对照组)、棕榈酸(PA)诱导组(高脂组)。拍照观察果蝇三龄幼虫脂肪体大小,H... 详细信息

目的探究内质网应激在高脂诱导的脂肪肝发生发展中的作用。方法果蝇模型及小鼠模型分为普通饲料组(对照组)、高脂饲料组(高脂组);HepG2细胞模型分为DMEM诱导组(对照组)、棕榈酸(PA)诱导组(高脂组)。拍照观察果蝇三龄幼虫脂肪体大小,HE及油红O染色观察小鼠肝脏及HepG2细胞脂肪变性情况。实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白质印迹(Western blot)分析转录激活因子6(ATF6)、重链结合蛋白(Bip)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在上述对照组与高脂组的果蝇幼虫、小鼠肝脏组织及HepG2细胞中的表达水平。结果果蝇模型中,与对照组相比,高脂组果蝇的脂肪体明显增大,脂肪储存增加;油红染色证实高脂组的小鼠肝脏及PA诱导的HepG2细胞脂滴形成以及空泡化。高脂组的果蝇幼虫、小鼠肝脏及PA诱导的HepG2细胞中均发现ATF6、Bip和CHOP表达水平较各自对照组升高(均P<0.05)。结论高脂饲料可能通过激活内质网应激诱导肝脏脂肪变性发生发展。

关键词：内质网应激高脂脂肪肝果蝇棕榈酸脂肪变性

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肺纤维化微环境中肺泡巨噬细胞的蛋白质组学分析

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生物化学与生物物理进展 2024年第10期51卷 2757-2772页

作者：伍霞艳柳迪刘禹辰汲淑慧付斌刘莹唐丽安徽医科大学基础医学院免疫学教研室合肥230032 军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心医学蛋白质组全国重点实验室北京102206

目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子... 详细信息

目的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AMs)能够处理表面活性物质来维持肺泡膨胀开放,并充当防御病原体入侵的第一道免疫防线,对肺部微环境稳态的维持至关重要。已有研究表明,肺纤维化过程中,单核来源的AMs持续释放促炎因子和趋化因子,招募更多免疫细胞到受损区域,维持并加剧炎症,从而发挥负面作用。目前,大多数研究聚焦于肺纤维化微环境AMs的基因表达水平,而在蛋白质功能和调控方面的报道较少。本研究旨在探讨正常生理条件下与肺纤维化后AMs的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),以便更全面地理解AMs在肺纤维化发展过程中的作用。方法本研究建立博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型,利用流式细胞分选技术收集来自生理盐水对照组和肺纤维化模型的AMs(每个样本2.5×105个细胞),通过无标记蛋白质组学方法获得蛋白质表达谱。结果通过将生理盐水组与已公开的生理AMs蛋白质组数据比对发现,本研究产出的蛋白质组数据质量较高,能够满足研究需求。综合分析结果显示,与对照组相比,博来霉素组AMs有778种蛋白质表达上调。此外,上调的DEPs中富集通路包括I-κB/NF-κB通路、炎症反应调节通路、吞噬调节通路、TGF-β通路和HIF-1通路,表明肺纤维化微环境中的AMs具有促炎和促纤维化功能。对DEPs的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析表明,Tlr2和Pycard之间的相互作用是AMs促炎表型的控制节点,从而导致肺纤维化进展。结论本研究探讨了AMs在肺纤维化微环境中蛋白质表达谱的变化。结果发现,AMs显著上调多条与炎症和纤维化关联的通路蛋白,并提示Tlr2和Pycard的相互作用是AMs表现出高度促炎活性的控制节点。

关键词：蛋白质组学肺泡巨噬细胞博来霉素诱导肺纤维化

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褪黑素在女性不孕相关疾病中的生殖调节研究

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中华生殖与避孕杂志 2022年第6期42卷 642-645页

作者：谢芬芬刘雅静曹云霞安徽医科大学基础医学院组织胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院妇产科合肥230022

褪黑素是一种主要由哺乳动物松果体分泌的神经胺类激素,调控机体中枢和外周系统与昼夜节律和生殖有关的机制,并具有强大的抗氧化、抗炎、抑制凋亡、抑制肿瘤、调节自噬和内分泌功能等作用。越来越多的研究表明,褪黑素在防治女性生殖系... 详细信息

褪黑素是一种主要由哺乳动物松果体分泌的神经胺类激素,调控机体中枢和外周系统与昼夜节律和生殖有关的机制,并具有强大的抗氧化、抗炎、抑制凋亡、抑制肿瘤、调节自噬和内分泌功能等作用。越来越多的研究表明,褪黑素在防治女性生殖系统疾病中发挥重要作用,从而改善由此导致的女性不孕症的结局。本文将对褪黑素的生殖调节以及在导致女性不孕的几种常见疾病中的作用研究进展进行总结。

关键词：褪黑素女性生殖不孕症

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