检索结果-内蒙古大学图书馆

HIF-1α过表达慢病毒载体的构建及对心肌细胞Notch配体Jagged1表达的影响

临床与实验病理学杂志 2016年第4期32卷 416-420页

作者：王振良丁然然哈艳平雷洪王可可申志华姜汉国揭伟广东医科大学病理学系湛江524023 广东医科大学基础医学院病理生理学教研室湛江524023

目的构建低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢... 详细信息

目的构建低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×108TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。

关键词：质粒构建慢病毒包装心肌细胞 Notch信号低氧诱导因子1α

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重金属污染物镉通过EMT机制加强结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为

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世界华人消化杂志 2016年第30期24卷 4185-4192页

作者：钱燕陈丹蕾任海风王仕清于丹丹汪思应安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室安徽省合肥市230032 安庆医药高等专科学校生理病理教研室安徽省安庆市246052

目的探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、T... 详细信息

目的探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、Tran swell细胞迁移和侵袭实验等,观察HCT-116细胞的恶性生物学行为的变化;蛋白免疫印迹法检测E-cadherin、Vimentin、E-盒结合锌指蛋白1、MMP-3、MMP-9等上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果与对照组相比,Cd诱导组细胞的恶性生物学行为增强(P<0.05),且转化后的细胞间呈间充质样链接;相较于对照组,Cd诱导24 h后,间质样标志物Vimentin蛋白的相对表达量明显增加(2.20±0.11 vs 1.03±0.08,P<0.01)、MMP-3(5.76±0.20 vs 1.00±0.09,P<0.01)、MMP-9(3-46±0.05 vs 0.99±0.04,P<0.01)的蛋白相对表达量也上升,而上皮样标志物E-cadherin蛋白的相对表达显著下降(0.30±0.03 vs 1.0l±0.05,P<0.01),且他们均呈现时司依赖性结论形态学和分子生物学都提示HCT-116细胞在慢性低剂量Cd暴露后会引起EMT机制.

关键词：镉结直肠癌上皮-间质转化钙黏附蛋白E 波形蛋白

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TRPV4-SK_(Ca)在老年大鼠气管平滑肌中改变及对其收缩的影响

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安徽医科大学学报 2016年第6期51卷 765-768页

作者：申永刚尹胜蒋森丁圣刚吕正梅沈兵杜鹃安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院儿科合肥230022

目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时... 详细信息

目的阐明瞬时受体电位离子通道家族(TRP)中香草素受体亚家族(TRPV)成员TRPV4和小电导钙激活钾通道3(SK3)复合物对老年大鼠气管平滑肌收缩的影响。方法运用离体气管张力实验,观察高钾、卡巴胆碱对年轻、老年大鼠气管收缩的影响,以及瞬时受体电位离子通道TRPV4特异性激动剂和抑制剂对卡巴胆碱引起的气管收缩的影响;运用Western blot法检测TRPV4和SK3在年轻、老年大鼠气管平滑肌上表达量的变化。结果与年轻大鼠比较,老年大鼠高钾引起的气管收缩没有显著改变,但卡巴胆碱引起的收缩显著增强,且TRPV4激动剂GSK引起的舒张反应显著降低;两组大鼠用TRPV4阻断剂HC或RN1734预处理后,GSK引起的舒张反应均被显著阻断;Western blot结果显示,与年轻大鼠比较,老年大鼠气管平滑肌组织TRPV4表达显著升高,SK3表达却显著降低。结论 TRPV4-SK3信号复合物在老年大鼠气管平滑肌表达改变可能与老年大鼠气管舒张效应减弱有密切关系。

关键词：瞬时受体电位离子通道香草素受体4 小电导钙激活钾通道老年大鼠气管平滑肌

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下调MDA-MB-231乳腺癌细胞骨硬化蛋白(SOST)可增加间接共培养的MG-63成骨细胞的成骨作用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第11期32卷 1481-1485页

作者：程俊雄郭丹陈茜王婷黄佳祎重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学第二附属医院乳腺外科重庆400016

目的构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA(siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响。方法针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以p B2B为模板,扩增"背靠... 详细信息

目的构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA(siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响。方法针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以p B2B为模板,扩增"背靠背"排列的H1和U6启动子。两个PCR产物以Gibson DNA Assembly的方式同时连接腺病毒穿梭质粒p Ad Trace-OK,经同源重组、HEK293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒。感染MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR检测SOST mRNA的表达水平,ELISA检测SOST蛋白水平。将转染该腺病毒的MDA-MB-231细胞与MG-63成骨细胞间接共培养,实时定量PCR检测护骨因子(OPG)、骨钙蛋白(OCN)、整合素结合涎蛋白(IBSP)、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)的表达情况。结果成功获得带3个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得AdR-si SOST腺病毒。用该病毒感染MDA-MB-231细胞后,明显抑制SOST的表达。在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-si SOST腺病毒,能导致MG-63细胞的OPG、OCN、IBSP mRNA表达上升,RANKL mRNA降低。结论在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-si SOST腺病毒,能促进MG-63细胞的成骨分化,提高OPG/RANKL的比例。

关键词： SOST siRNA 腺病毒乳腺癌骨转移

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氢化肉桂基-L-缬氨酰吡咯烷对小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合质量的影响

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中华烧伤杂志 2016年第11期32卷 -页

作者：杨敏烈李跃华谭谦李建涛阙伶俐无锡市第三人民医院烧伤整形科 214041 南京医科大学基础医学院病理生理学教研室 210008 南京医科大学鼓楼临床医学院

目的观察Toll白细胞介素1受体同源区/BB环状拟似物——氢化肉桂基-L-缬氨酰吡咯烷(AS-1)对小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合质量的影响. 方法将42只成年C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假伤组、烫伤组、AS-1早期治疗组、二甲基亚砜(DMSO)早期对... 详细信息

目的观察Toll白细胞介素1受体同源区/BB环状拟似物——氢化肉桂基-L-缬氨酰吡咯烷(AS-1)对小鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合质量的影响. 方法将42只成年C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假伤组、烫伤组、AS-1早期治疗组、二甲基亚砜(DMSO)早期对照组、AS-1晚期治疗组、DMSO晚期对照组,每组7只.假伤组小鼠模拟致假伤后不行其他处理;其余小鼠在背部造成约10％ TBSA深Ⅱ度烫伤,伤后每日以生理盐水清洁创面并更换凡士林纱布.AS-1早期治疗组、AS-1晚期治疗组小鼠分别自伤后8h、15d起,每日腹腔注射20 mg/mL AS-1 50 mg/kg;DMSO早期对照组、DMSO晚期对照组小鼠分别自伤后8h、15d起,每日腹腔注射20 mg/mL DMSO 50 mg/kg.伤后21 d,观察烫伤小鼠创面愈合大体情况,计算创面愈合率;取烫伤小鼠创面愈合组织,分别行HE、Masson染色,观察组织形态学变化、胶原纤维化情况,并计算胶原纤维化百分比;取烫伤小鼠创面愈合组织,采用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-1β、TNF-α、TGF-β1、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的蛋白表达.假伤组以与烫伤小鼠观察和取材相同区域的皮肤组织为对象,同期同前进行相关观测.对数据行单因素方差分析、Tukey检验. 结果伤后21 d,假伤组小鼠皮肤组织未见异常;AS-1早期治疗组小鼠创面完全愈合,无瘢痕形成;其余4组小鼠创面均未完全愈合,均伴有不同程度的瘢痕形成.伤后21d,AS-1早期治疗组小鼠创面愈合率为(97±4)％,与假伤组小鼠的100％相近(q=1.753,P＞0.05),均明显高于烫伤组、DMSO早期对照组、AS-1晚期治疗组、DMSO晚期对照组的(83±8)％、(87±6)％、(85±9)％、(85±7)％(q值为4.819 ～6.803,P＜0.05或P＜0.01).伤后21 d,假伤组小鼠皮肤组织形态未见明显异常;AS-1早期治疗组小鼠创面愈合组织形态与假伤组接近,表皮玻璃样变性少,新生胶原纤维较少,排列相对有序;其余4组小鼠创面愈合组织中表皮呈现带状或片状均匀一致的玻璃样变性,胶原纤维增生较为明显,排列紊乱,其中烫伤组有较多炎性细胞浸润.AS-1早期治疗组小鼠创面愈合组织胶原纤维化百分比为(30±3)％,与假伤组的(30±4)％相近(q=0.159,P＞0.05),均明显低于烫伤组、DMSO早期对照组、AS-1晚期治疗组、DMSO晚期对照组的(86±9)％、(74±5)％、(82±4)％、(82±7)％(q值为12.080～15.530,P值均小于0.01).伤后21 d,与假伤组比较,烫伤组小鼠创面愈合组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1、CTGF mRNA,DMSO早期对照组、DMSO晚期对照组小鼠创面愈合组织中TGF-β1mRNA,AS-1晚期治疗组小鼠创面愈合组织中MMP-1 mRNA表达量明显增多(q值为4.039～5.232,P值均小于0.05);烫伤组小鼠创面愈合组织中TIMP-1 mRNA表达量明显减少(q=4.921,P＜0.05).与烫伤组比较,AS-1早期治疗组小鼠创面愈合组织中IL-1β、TNF-α、TGF-β1、MMP-1、CTGFmRNA及AS-1晚期治疗组小鼠创面愈合组织中IL-1β、CTGF mRNA表达量明显减少(q值为4.418 ～6.402,P＜0.05或P＜0.01),AS-1早期治疗组和AS-1晚期治疗组小鼠创面愈合组织中TIMP-1 mRNA表达量明显增多(q值分别为3.929、8.299,P＜0.05或P＜0.01).与假伤组比较,其余各组小鼠创面愈合组织中Ⅲ型胶原mRNA及蛋白,烫伤组、DMSO早期对照组、AS-1晚期治疗组、DMSO晚期对照组小鼠创面愈合组织中Ⅰ型胶原mRNA及蛋白表达量均明显增多(q值为7.054 ～ 11.650,P值均小于0.O1).与AS-1早期治疗组比较,烫伤组、DMSO早期对照组、AS-1晚期治疗组、DMSO晚期对照组小鼠创面愈合组织中Ⅰ型胶原mRNA及蛋白表达量明显增多(q值为5.156～7.451,P＜0.05或P ＜0.01). 结论在小鼠深Ⅱ度烫伤后早期炎症反应阶段进行AS-1干预,可有效促进创面愈合并减轻纤维化程度,可能与其降低炎症反应相关因子IL-1β、TNF-α和纤维化相关因子TGF-β,、MMP-1、CTGF以及Ⅰ型胶原的表达有关.

关键词：烧伤伤口愈合纤维化瘢痕氢化肉桂基-L-缬氨酰吡咯烷炎症反应

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银杏叶提取物防治心脑血管疾病的研究进展

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中国新药杂志 2016年第1期25卷 76-81页

作者：李淑琴朱嘉宝武宇洲河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北医科大学第二医院心血管内科

银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract)是目前国际上使用最为广泛的中药提取物之一,主要活性成分是银杏黄酮和银杏内酯类化合物。心脑血管疾病是全球主要的病死原因,对其防治具有重要的意义。近年来的研究表明,银杏叶提取物对心脑血管疾... 详细信息

银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract)是目前国际上使用最为广泛的中药提取物之一,主要活性成分是银杏黄酮和银杏内酯类化合物。心脑血管疾病是全球主要的病死原因,对其防治具有重要的意义。近年来的研究表明,银杏叶提取物对心脑血管疾病的防治有多环节、多靶点、不良反应小的优势,应用前景良好。因此,本文综述了近年来银杏叶提取物对心脑血管疾病的防治作用和机制。

关键词：银杏叶提取物心血管疾病脑血管疾病 EGb 761

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Rho GTP酶在阿尔茨海默病中的研究进展

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实用医学杂志 2016年第5期32卷 693-694页

作者：喻慎仪张璐南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广州市510515

阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）是最常见的进行性神经系统退行性疾病,以渐进性的认知和记忆的障碍和情志的异常改变为主要临床特征。AD的标志性病理改变为β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）沉积形成的老年斑（senile p... 详细信息

阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）是最常见的进行性神经系统退行性疾病,以渐进性的认知和记忆的障碍和情志的异常改变为主要临床特征。AD的标志性病理改变为β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）沉积形成的老年斑（senile plaques）和由磷酸化的不溶性tau蛋白组成的神经原纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFTs）。

关键词：阿尔茨海默病 Rho GTP酶 β-淀粉样蛋白 senile amyloid 神经原纤维缠结蛋白磷酸化树突棘 plaques 蛋白组成

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术中冰冻切片对复杂性肾囊性病变的临床诊断价值

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河北医科大学学报 2017年第1期38卷 86-88页

作者：苏世强刘丽哲王香芝李瑞玲赵敬霞庞书舰河北省石家庄市第一医院泌尿外科河北石家庄050011 河北医科大学基础医学院病理生理学教研室河北石家庄050017

目的探讨术中冰冻切片对复杂性肾囊性病变的诊断价值。方法回顾性分析93例术中行冰冻切片检查的复杂性肾囊性病变患者临床资料。按照Bosniak分类,BosniakⅡ类囊肿13例、ⅡF类囊肿19例、Ⅲ类囊肿37例、Ⅳ类囊肿24例。行肾囊肿去顶减压术2... 详细信息

目的探讨术中冰冻切片对复杂性肾囊性病变的诊断价值。方法回顾性分析93例术中行冰冻切片检查的复杂性肾囊性病变患者临床资料。按照Bosniak分类,BosniakⅡ类囊肿13例、ⅡF类囊肿19例、Ⅲ类囊肿37例、Ⅳ类囊肿24例。行肾囊肿去顶减压术27例,肾部分切除术37例,根治性肾切除术29例。比较术中冰冻切片病理和术后常规石蜡切片病理的诊断结果。结果术中冰冻切片病理结果为恶性肾肿瘤51例、良性肾肿瘤14例、肾囊肿27例及肾结核1例;术后石蜡切片病理为恶性肾肿瘤54例、良性肾肿瘤13例、肾囊肿25例及肾结核1例。术中冰冻切片病理诊断肾脏恶性病变的敏感度为94.1%,特异度为100.0%,术中冰冻切片诊断复杂性肾脏囊性病变良恶性总体符合率为96.8%。病理亚型诊断符合率分别为肾透明细胞癌97.3%、肾乳头状细胞癌44.4%,肾嫌色细胞癌33.3%,多房囊性肾细胞癌28.6%,肾滑膜肉瘤0、肾囊肿92.6%、肾结核100.0%。结论术中冰冻切片检查诊断复杂性肾囊性病变的敏感度、特异度及符合率高,但是其在诊断病理亚型方面存在局限性。

关键词：肾肿瘤囊肿诊断,鉴别

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Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程

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中国病理生理杂志 2016年第5期32卷 900-906页

作者：赵舒祺蔡军伟李雪杨勤黄林罗海华项静乔敏姜勇刘靖华贵州医科大学病理生理学教研室贵州贵阳550004 南方医科大学基础医学院病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室广东广州510515

目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab3... 详细信息

目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab32和Rab34的表达变化,筛选出水平升高的Rab7分子;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达是否在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后继续升高;接下来用RNAi技术下调BLP耐受巨噬细胞Rab7表达,观察细胞对细菌的吞噬能力及杀灭能力的影响。结果:在检测的10个Rab GTP酶中,Rab7在BLP耐受BMDMs的mRNA水平升高,是非耐受细胞的1.4倍;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后,随着时间延长均明显升高;下调Rab7表达不影响BLP耐受巨噬细胞对细菌的吞噬能力,但是显著降低其对细菌的杀灭能力。结论:BLP耐受通过上调巨噬细胞Rab7的表达,在增强巨噬细胞对细菌的杀灭过程中发挥重要作用。

关键词：细菌脂蛋白耐受细菌清除 Rab GTP酶 Rab7蛋白

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脑创伤后炎症反应与免疫抑制

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重庆医科大学学报 2016年第1期41卷 1-4页

作者：张为丹赵敬翟瑄重庆医科大学附属儿童医院神经外科重庆400014 重庆医科大学基础医学院病理生理教研室重庆400016

脑创伤(traumatic brain injury,TBI)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)受损,脑内固有免疫细胞(小胶质细胞、星型胶质细胞等)和外周来源免疫细胞(巨噬/单核细胞、T细胞、中性粒细胞等)均参与到脑组织的炎症反应中,释放多种炎症因子... 详细信息

脑创伤(traumatic brain injury,TBI)后血脑屏障(blood brain barrier,BBB)受损,脑内固有免疫细胞(小胶质细胞、星型胶质细胞等)和外周来源免疫细胞(巨噬/单核细胞、T细胞、中性粒细胞等)均参与到脑组织的炎症反应中,释放多种炎症因子、活性氧、化学诱导物,造成脑组织损伤,同时引发机体对免疫细胞的产生和功能的抑制性调节,即免疫抑制。本文就TBI后脑内炎症反应和外周免疫抑制方面的研究作一综述,旨在进一步了解其病理生理改变,为临床治疗提供理论依据。

关键词：脑创伤炎症反应免疫抑制

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