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结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

细胞与分子免疫学杂志 2023年第1期39卷 75-80页

作者：汪欣然马文潇孙菀蔚宁星语黄蓉蓉刘淼安徽医科大学第二临床医学院安徽医科大学第一临床医学院安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表... 详细信息

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白,以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体,分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-30a-Rv2628重组载体,IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达,Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性,且抗体效价达1∶1093500。结论成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌休眠生存调节子 Rv2628 多克隆抗体

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过继骨髓细胞通过分化为NKT细胞并增加自身脂质含量减轻小鼠代谢功能障碍相关脂肪性肝病肝损伤

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第2期39卷 124-129页

作者：李小平耿瑾珂韩慕天苏州大学附属第一医院生殖医学中心江苏苏州215000 安徽医科大学基础医学院免疫教研室安徽合肥230061

目的探讨骨髓细胞过继对于小鼠代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MAFLD)的治疗作用,并探索起主要作用的细胞群体。方法 HE染色检测蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)诱导的C57BL/6小鼠MAFLD肝组织病变并通过检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水... 详细信息

目的探讨骨髓细胞过继对于小鼠代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MAFLD)的治疗作用,并探索起主要作用的细胞群体。方法 HE染色检测蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)诱导的C57BL/6小鼠MAFLD肝组织病变并通过检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平评估骨髓细胞过继对MAFLD的治疗作用。实时定量PCR检测T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、 Kupffer细胞等肝脏免疫细胞的低密度脂蛋白受体(LDLR)和白细胞介素4(IL-4) mRNA表达。羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记的骨髓细胞经小鼠尾静脉注射,采用冰冻切片观察肝组织CFSE+细胞比例,流式细胞术追踪CFSE+细胞在肝、脾组织的比例。流式细胞术检测CFSE+的过继细胞CD3、 CD4、 CD8、 NK1.1、 CD11b、粒细胞受体1(Gr-1)的表达确定其分化情况。尼罗红脂质染色评估肝组织NKT细胞胞内脂质含量。结果骨髓细胞过继输入的MAFLD小鼠肝组织损伤明显减轻、血清ALT、 AST水平降低。同时,肝脏免疫细胞上调其IL-4和LDLR的表达。LDLR敲除小鼠给予MCD饮食后引发更严重的MAFLD。骨髓细胞过继细胞治疗效果显著并分化出更多的NKT细胞定殖在肝脏,同时该群NKT细胞胞内脂质显著增多。结论骨髓细胞过继治疗通过分化更多的NKT细胞,同时通过提高该群细胞的胞内脂质含量从而减轻MAFLD小鼠肝损伤。

关键词：代谢功能障碍相关脂肪性肝病(MAFLD) 自然杀伤T(NKT)细胞低密度脂蛋白受体(LDLR) 肝脏骨髓细胞

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慢性炎症相关弥漫大B细胞淋巴瘤2例并文献复习

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临床与实验病理学杂志 2024年第6期40卷 659-662页

作者：王美玲段园园凡龙云徐建平徐五琴冯振中吴强安徽医科大学第二附属医院病理科合肥230601 安徽医科大学附属阜阳医院阜阳236000 安徽省胸科医院病理科合肥230022 皖南医学院弋矶山医院病理科芜湖241001 安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥230032

目的探讨慢性炎症相关弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma associated with chronic inflammation,DLBCL-CI)的临床病理学和分子遗传学特征。方法回顾性分析2例DLBCL-CI的临床病理学特征,行HE和免疫组化染色,二代测序技... 详细信息

目的探讨慢性炎症相关弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma associated with chronic inflammation,DLBCL-CI)的临床病理学和分子遗传学特征。方法回顾性分析2例DLBCL-CI的临床病理学特征,行HE和免疫组化染色,二代测序技术检测基因突变情况,并复习相关文献。结果例1男性,83岁,有脓胸病史半年余。例2男性,75岁,有慢性胸膜炎病史10年余,结肠癌病史6年余。镜下见2例背景均混杂大量急慢性炎细胞,中等至大的异型淋巴样细胞弥漫片状生长,细胞核不规则,核质比增大,染色质较粗,部分可见核仁。例2可见异型淋巴样细胞呈血管中心性生长并侵犯血管壁。免疫表型:2例CD20、CD79a和PAX5均阳性;2例C-MYC、CD10和BCL6均阴性,例1中MUM1和BCL2阳性,例2中MUM1和BCL2阴性;2例EBER均阳性,例1中EBNA2和LMP1阳性。2例Ki67增殖指数均较高(分别为70%、90%)。例2二代测序检测结果示CD58基因一级变异,其余24个基因呈二级变异或三级变异。例1行化疗,例2行手术+化疗,2例均在26个月内死亡。结论DLBCL-CI多见于老年男性,其发生、发展与长期慢性炎症和EBV感染密切相关。其恶性度高,预后差。

关键词：淋巴瘤慢性炎症相关弥漫大B细胞淋巴瘤分子遗传学二代测序

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胶束莪术醇对卵巢癌相关巨噬细胞极化的影响

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安徽医科大学学报 2024年第5期59卷 840-846页

作者：唐勤王晶陈冰汪生张敏敏张梦媛吴强安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥23003 安徽医科大学第一附属医院妇产科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院病理科合肥230022 合肥工业大学化学与材料科学学院合肥230009 安徽医科大学科研实验中心合肥230032

目的探讨纳米材料胶束莪术醇(MC)通过促进卵巢癌腹水M2型巨噬细胞向M1型极化调控卵巢癌免疫微环境的机制。方法(1)小鼠分组后,用鼠卵巢癌细胞株ID8构建卵巢癌腹水模型,观察体质量变化,收集肿瘤组织和腹水。流式细胞术检测肿瘤组织和腹... 详细信息

目的探讨纳米材料胶束莪术醇(MC)通过促进卵巢癌腹水M2型巨噬细胞向M1型极化调控卵巢癌免疫微环境的机制。方法(1)小鼠分组后,用鼠卵巢癌细胞株ID8构建卵巢癌腹水模型,观察体质量变化,收集肿瘤组织和腹水。流式细胞术检测肿瘤组织和腹水巨噬细胞CD86和CD206表达;Western blot法检测蛋白激酶B(PKB/Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达。(2)诱导人单核细胞白血病(THP-1)细胞转化M2型巨噬细胞(THP-1 M2φ),用10μg/ml的MC处理,流式法检测凋亡率;qRT-PCR法检测巨噬细胞甘露糖受体(CD206)、转化生长因子-β(TGF-β)和白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达;流式法检测CD86和CD206表达;Western blot法检测Akt/mTOR表达。结果(1)体内实验:给药后,MC组鼠平均体质量低于对照组;MC组肿瘤组织和腹水巨噬细胞CD206表达降低,CD86表达上调;MC组腹水Akt、mTOR磷酸化水平降低。(2)体外实验:用药前后THP-1 M2φ凋亡无差异;MC组CD206、TGF-β的mRNA表达及CD206蛋白表达明显低于对照组,同时IL-1β、TNF-α的mRNA和CD86蛋白表达明显高于对照组;MC组Akt、mTOR的磷酸化水平降低。结论MC促进腹水巨噬细胞向M1极化调控卵巢癌免疫微环境,其机制可能与Akt/mTOR通路有关。

关键词：卵巢癌免疫微环境巨噬细胞 MC Akt/mTOR

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慢性感染阶段弓形虫包囊在小鼠脑组织的动态病理变化

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安徽医科大学学报 2023年第2期58卷 184-188页

作者：吴梦云蔡茹李伊凡汪学龙姚湧安徽理工大学医学院淮南232001 安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探究弓形虫慢性感染期间弓形虫包囊在感染小鼠脑部各区域的分布与病理变化对小鼠行为与神经精神的影响。方法使用弓形虫Prugniaud株灌胃小鼠,记录感染小鼠病情;分别在小鼠感染的第10、30、40、90、120、160天取感染小鼠脑组织,分离... 详细信息

目的探究弓形虫慢性感染期间弓形虫包囊在感染小鼠脑部各区域的分布与病理变化对小鼠行为与神经精神的影响。方法使用弓形虫Prugniaud株灌胃小鼠,记录感染小鼠病情;分别在小鼠感染的第10、30、40、90、120、160天取感染小鼠脑组织,分离出海马下丘脑、前额叶、纹状体和小脑区域,HE染色观察并记录各感染区域的包囊数量和神经病理变化。结果弓形虫感染小鼠出现竖毛、弓背等症状,在第40天最为显著,随后逐渐恢复,遗留偏瘫和原地打转等症状;在各时间节点,弓形虫包囊的数量均以海马下丘脑最多,前额叶和纹状体次之,小脑最少;弓形虫包囊的直径随着时间推移均呈增大趋势。慢性感染期间,在脑组织各区域均可观察到弓形虫包囊噬神经现象等特异性病理表现,上述弓形虫脑炎的病理改变在第40天达到顶峰,后逐渐恢复,至第120天增至刺激峰,随后逐渐恢复。结论弓形虫慢性感染期间的行为和神经精神症状与弓形虫包囊在感染小鼠脑部的定位分布有一定的相关性,并呈现动态变化。

关键词：弓形虫包囊脑组织病理变化 HE染色

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AMPK抑制剂增加阿司匹林对肝癌的抑制作用

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中国药理学通报 2021年第11期37卷 1547-1553页

作者：孙昊璐吴一万卞和格金娟安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032

目的探究AMPK抑制剂能否增加阿司匹林对肝癌的抑制作用,以及作用机制。方法本研究采用二乙基亚硝胺结果与模型组相比,阿司匹林明显抑制DEN诱导的肝细胞癌的产生以及降低肝脏/体重的比值。阿司匹林上调自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、TFEB、... 详细信息

目的探究AMPK抑制剂能否增加阿司匹林对肝癌的抑制作用,以及作用机制。方法本研究采用二乙基亚硝胺结果与模型组相比,阿司匹林明显抑制DEN诱导的肝细胞癌的产生以及降低肝脏/体重的比值。阿司匹林上调自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、TFEB、AMPK表达。阿司匹林联合AMPK抑制剂明显抑制HCC细胞增殖,诱导HCC细胞凋亡。结论联合AMPK抑制剂可明显增强阿司匹林抗HCC的作用。

关键词： AMPK抑制剂阿司匹林肝癌 LC3 自噬凋亡

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基于Geant4-DNA模拟质子辐照线虫DNA链损伤的生物效应研究

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中华放射医学与防护杂志 2024年第7期44卷 562-570页

作者：季涛涛李桃生余威悦徐照中国科学院合肥物质科学研究院核能安全技术研究所合肥230031 中国科学技术大学研究生院科学岛分院合肥230026 安徽医科大学基础医学院核医学教研室合肥230032

目的使用Geant4-DNA工具包计算质子致线虫生殖细胞的DNA损伤产额及相对生物效能(RBE)值,探究质子辐照线虫的生物效应。方法使用Geant4-DNA工具包中希尔伯特曲线构建直径为20μm的线虫生殖细胞DNA模型;模拟100、50、20、5和2 MeV的质子... 详细信息

目的使用Geant4-DNA工具包计算质子致线虫生殖细胞的DNA损伤产额及相对生物效能(RBE)值,探究质子辐照线虫的生物效应。方法使用Geant4-DNA工具包中希尔伯特曲线构建直径为20μm的线虫生殖细胞DNA模型;模拟100、50、20、5和2 MeV的质子辐射造成的DNA损伤,获得不同的物理构造函数、能量阈值(ET)模型和自由基清除距离与DNA双链断裂产额(YDSBs)的关系,并与生物学实验数据(20 MeV质子)进行对比验证。计算不同能量质子诱导DNA损伤的具体类型以及基于RBE_(DSB)数学模型的质子RBE_(DSB)值。结果在不同的物理构造函数、ET模型以及自由基清除距离3个参数下,质子诱导的DNA损伤分析结果表明,当选取构造函数2时,质子诱导的YDSBs最低,构造函数4和构造函数6诱导的YDSBs相差不大;随着单能ET的增加,质子诱导的YDSBs在逐渐降低;当自由基清除距离越长时,质子诱导的YDSBs越高。与生物实验数据对比结果表明,选取构造函数4、21.25 eV的单能ET模型以及9 nm的自由基清除距离时,其模拟结果与相关实验数据最接近,两者相差约8.3%。质子的RBE_(DSB)计算结果表明,其值在1.02~1.85范围内变化,质子能量越低,RBE_(DSB)越高。结论基于Geant4-DNA模拟质子诱导线虫的YDSBs与相关分子生物学检测结果吻合较好,为理解和预测质子辐射诱导的生物效应提供了重要手段。

关键词： Geant4-DNA 线虫质子 DNA双链断裂相对生物效能

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乳源六肽通过FoxO3a-MnSOD通路减少酒精诱导的氧化应激缓解肝损伤

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安徽医科大学学报 2022年第12期57卷 1864-1869页

作者：李安琪祝晓梅黄九九秦宜德戚楠安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室合肥230032

目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘... 详细信息

目的研究乳源六肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺(PGPIPN)和其截短五肽脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸(PGPIP)缓解小鼠慢性酒精性肝损伤及其相关的分子机制。方法60只昆明小鼠,随机均分为对照组、模型组、谷胱甘肽(GSH)组、PGPIPN组、截短五肽PGPIP组。采用梯度酒精灌胃的方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,造模的同时给予药物干预,共12周。肝脏HE染色分析各处理组对小鼠酒精性肝损伤的病理学影响。体外分离培养小鼠原代肝细胞和人正常肝细胞系L-02,水溶性四氮唑-1(WST-1)细胞增殖及细胞毒性检测确定各种细胞合适的PGPIPN诱导浓度。持续诱导L-02细胞不同时间,Western blot检测人叉头框蛋白O3(FoxO3a)和磷酸化FoxO3a蛋白质的表达,确定合适的诱导时间。免疫荧光染色检测FoxO3a在L-02细胞中的亚细胞定位。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测不同处理组小鼠原代肝细胞和L-02细胞FoxO3a和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因mRNA的变化。结果PGPIPN组和PGPIP组病理学检查类似GSH组,小鼠肝脏损伤明显减轻。分别选择中浓度和高浓度PGPIPN诱导小鼠原代肝细胞和L-02细胞。在16 h,L-02细胞FoxO3a蛋白表达显著增加,并且FoxO3a蛋白主要表达于细胞核内。此外,在相应剂量PGPIPN诱导后,两种类型细胞中mRNA水平的显著增加。结论PGPIPN和截短五肽PGPIP能减少小鼠慢性酒精性肝损伤,其机制可能是通过FoxO3a-MnSOD信号通路,减少酒精诱导的氧化应激从而发挥作用。

关键词： PGPIPN 酒精性肝损伤氧化应激 FoxO3a MnSOD

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自噬相关蛋白ATG7在乳腺癌中的表达及其临床病理意义

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临床与实验病理学杂志 2024年第9期40卷 917-922页

作者：曲燕石亭亭王娟如罗军王志皓罗文武郭欠影赵敏吴正升安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院病理科合肥230022 合肥市第二人民医院病理科合肥230011

目的探讨ATG7(autophagy-related 7, ATG7)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展的影响。方法采用免疫组化法检测乳腺癌组织中ATG7蛋白的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。使用shRNA干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达... 详细信息

目的探讨ATG7(autophagy-related 7, ATG7)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌发生、发展的影响。方法采用免疫组化法检测乳腺癌组织中ATG7蛋白的表达,并分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。使用shRNA干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达。应用嘌呤霉素筛选稳转细胞系,并运用Western blot法检测转染效率。CCK-8和克隆形成实验检测敲低ATG7对细胞增殖能力的影响。裸鼠皮下成瘤实验检测敲低ATG7对体内成瘤能力的影响。结果免疫组化结果显示ATG7主要定位于乳腺癌细胞质,且其表达与肿瘤大小和Ki67显著相关(P<0.05)。ATG7-shRNA可显著干扰乳腺癌细胞MCF-7中ATG7的表达。CCK-8和克隆形成实验结果显示,与对照组相比,敲低ATG7可促进乳腺癌细胞增殖能力。裸鼠皮下成瘤实验结果显示,与对照组相比,敲低ATG7后小鼠成瘤能力明显升高。结论 ATG7表达可能抑制乳腺癌的增殖能力,可作为乳腺癌治疗的潜在靶点。

关键词：乳腺肿瘤自噬 ATG7 增殖

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病原感染与免疫教学AI视频动画的制作与思考

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基础医学教育 2024年第3期26卷 249-254页

作者：夏丹丹郭萍刘伯玉张俊玲张林杰王林定王明丽安徽医科大学临床医学院基础医学部病原生物学与免疫学教研室合肥230031 安徽医科大学临床医学院临床医学系安徽医科大学基础医学院微生物学教研室

病原感染与免疫主要教授病原微生物等感染引发疾病后的诊断与防治的发生机制与方法,传统教学法学生接受程度较低。文章中本科生为教学AI视频动画的创作主体,以此探索不同课程独立知识点间的链接,能够更好地理解和掌握各课程的内在联系... 详细信息

病原感染与免疫主要教授病原微生物等感染引发疾病后的诊断与防治的发生机制与方法,传统教学法学生接受程度较低。文章中本科生为教学AI视频动画的创作主体,以此探索不同课程独立知识点间的链接,能够更好地理解和掌握各课程的内在联系。实施方案根据病原感染与免疫三门临床医学生必修课程为主线梳理出40个重难点,制作出30个具有综合内容的教学脚本,依据脚本完成AI化视频动画的制作与表现。在安徽医科大学临床医学院小范围使用后盲评教学效果,99%的学生都认为该教学动画能够加深对相应知识点的理解和记忆。71.71%学生认为画面非常有趣。全体参加该教学动画制作的学生的专业技能与理论联系实际能力显著提升。教师在教学过程使用该视频动画可以提高教学效率。

关键词：基础医学病原感染与免疫教学AI视频动画线上教育教学方法

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