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安徽医科大学学报 2014年第10期49卷 1357-1361页

作者：雷娜刘淼任翠平刁玉洁杨菲程海燕沈际佳安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032 安徽医学高等专科学校合肥230022

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空... 详细信息

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组,前两组各10只,空白对照组9只。蛋白疫苗组,第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白,第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白,免疫方法同前。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠,计算减虫率和减卵率。眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型,同时检测血清细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白介素4(IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较,减虫率和减卵率显著升高(P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组(P<0.01)。结论日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性;该重组蛋白免疫引起的是Th1/Th2混合型免疫反应。

关键词：日本血吸虫表膜蛋白蛋白疫苗

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MT2受体介导褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用

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解剖学报 2014年第3期45卷 344-349页

作者：徐丽金清东宫喜刘卉周瑞祥莆田学院基础医学院生理学教研室福建莆田351100 福建医科大学人体解剖学与组织学胚胎学系神经生物学研究中心福州350004

目的探讨褪黑素(MLT)通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌(MFC)细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达,观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Ak... 详细信息

目的探讨褪黑素(MLT)通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌(MFC)细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达,观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Akt的磷酸化的影响。结果 ***介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用;2.沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用。结论褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

关键词：褪黑素小鼠前胃癌细胞褪黑素膜受体MT2 Akt ERK1 2 实时定量聚合酶链反应小鼠

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缬沙坦对人冠脉内皮细胞氧化应激过程中gp91^(Phox)的影响

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安徽医科大学学报 2014年第6期49卷 739-742页

作者：王成韩卫星吴继军刘超刘晓颖安徽医科大学第一附属医院心血管内科合肥230022 安徽医科大学第一临床学院诊断学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室合肥230032 安徽医科大学生命科学院细胞生物学教研室合肥230032

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91P... 详细信息

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91Phox的水平,对两组结果进行统计分析并比较。结果实验组HCAEC中gp91Phox的水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论缬沙坦可以显著减少HCAEC中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91Phox的表达,从而降低氧化应激水平。

关键词：缬沙坦人冠脉内皮细胞氧化应激 gp91Phox

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调节性T细胞在poly I:C/D-GalN诱发的肝脏损伤中的免疫调节作用

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中国免疫学杂志 2014年第1期30卷 24-29页

作者：宋静王黎丽侯昕沈际佳安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230001 中国科学技术大学生命科学实验中心合肥230027

目的:探讨调节性T细胞在Polyinosinic-polycytidylic acid(poly I:C)/D-galactosamine(D-GalN)诱发的急性肝脏损伤中的作用及其机制。方法:建立poly I:C/D-GalN诱发的爆发性肝炎小鼠模型,观察比较野生型C57BL/6小鼠、Rag1-/-小鼠(C57BL/6背景)和过继转输调节性T细胞的Rag1-/-小鼠的血清转氨酶活性;肝脏HE染色评价小鼠肝组织病理形态学改变;实时荧光定量PCR检测肝脏TNF-α和IFN-γmRNA水平;ELISA检测血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平。结果:poly I:C/D-GalN联合注射后,与野生型小鼠相比,Rag1-/-小鼠血清转氨酶水平明显增高,肝脏损伤更加严重,炎性因子mRNA水平和蛋白水平都显著增加。给Rag1-/-小鼠过继转输CD25+细胞后能明显降低poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤。结论:调节性T细胞对poly I:C/D-GalN诱发的肝脏损伤有抑制作用,提示调节性T细胞可以负向调节天然免疫细胞。

关键词：调节性T细胞 poly I C D-GalN 急性肝损伤 IFN-γ TNF-α

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多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上检测BDV-P24蛋白质的应用

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重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 1005-1009页

作者：张鸿志李丹雷阳邓婧陈世刚黄华李文娟陈建军王啸张亮黄荣忠刘霞谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科、重庆医科大学神经科学研究中心、重庆市神经生物学重点实验室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠2... 详细信息

目的:验证本课题组前期制备的多克隆及单克隆P24抗体能否在石蜡组织切片上检测博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)磷蛋白(P24蛋白质)以及探索其运用的条件。方法:选择出生24 h内的SD大鼠20只为实验组颅内注射BDV病毒液,对照组大鼠20只在相同部位注射磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),未经注射的SD大鼠和C57小鼠各40只作为阴性实验对照,饲养到60 d取脑石蜡包埋制片;免疫组化染色用Envision两步法,一抗为多克隆或单克隆P24抗体,以PBS代替一抗作为空白对照,P24抗体的稀释浓度分别从1∶50、1∶100、1∶200、1∶400直到1∶5 000;以高倍镜下神经细胞细胞质呈棕黄色或棕褐色颗粒为阳性,将每张切片阳性细胞比例评分乘以阳性强度评分计算总分。结果:多克隆P24和单克隆P24抗体分别在BDV感染大鼠实验组与阴性对照组的染色评分差异有统计学意义(多克隆抗体Z=-3.108,P=0.000;单克隆抗体Z=-4.605,P=0.000);在多克隆P24抗体稀释度中,1∶200、1∶400的敏感性好而背景着色较轻,在单克隆P24抗体稀释度中,1∶100、1∶200、1∶400的敏感性好而无背景着色。结论:多克隆及单克隆P24抗体在石蜡组织切片上能检测出BDV P24蛋白质;并且多克隆P24抗体推荐的浓度为1∶200和1∶400,单克隆P24抗体的推荐浓度为1∶100、1∶200和1∶400。

关键词：多克隆P24抗体单克隆P24抗体博尔纳病病毒免疫组化染色

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信号分子PKC调控内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ增强血肿瘤屏障通透性机制的研究

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中国医科大学学报 2014年第2期43卷 101-105,109页

作者：李振刘啸白刘云会薛一雪王萍刘丽波中国医科大学附属盛京医院神经外科沈阳110004 中国医科大学96期七年制沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的探索信号分子蛋白激酶C（PKC）参与内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）增强血肿瘤屏障（BTB）通透性过程的相关机制。方法采集出生3～5d的Wistar胎鼠大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑... 详细信息

目的探索信号分子蛋白激酶C（PKC）参与内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAP-Ⅱ）增强血肿瘤屏障（BTB）通透性过程的相关机制。方法采集出生3～5d的Wistar胎鼠大脑皮质，应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后，接种于培养皿中进行脑微血管内皮细胞（BMEC）原代培养；将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养，构建体外BTB模型；共培养后的BMEC随机分成3组：对照组、EMAP-Ⅱ组和H7＋EMAP-Ⅱ组，测定跨内皮阻抗值和辣根过氧化物酶流量，评估各组BTB通透性的变化，Westernblot法和免疫荧光法检测紧密连接相关蛋白claudin-5在各组BMEC上的表达水平变化；共培养后的BMEC被随机分成5组：EMAP-Ⅱ0，0．5，1，2，4h组，Westernblot法检测EMAP-Ⅱ作用不同时间点时BMEC膜上PKC各亚型的蛋白表达变化。结果与对照组比较，EMAP-Ⅱ组BTB的通透性显著增高（P=0．002），BMEC上claudin-5的表达水平显著降低（P=0．005），EMAP-Ⅱ的上述作用受到PKC抑制剂H7预处理的显著抑制（P=0．036）；EMAP-Ⅱ作用0．5h时，BMEC膜上PKC-α和PKC-β的蛋白表达水平显著增加，1h时达到峰值，其后表达水平逐渐下降，4h时恢复至未用药水平。BMEC膜上PKC-ζ的蛋白表达水平于O．5h时显著增加，其后表达水平逐渐下降，2h时恢复至未用药水平。结论信号分子PKC参与EMAP-Ⅱ增强BTB通透性的过程，其机制可能与BMEC膜上PKC-α、-β和-ζ的表达水平上调有关。

关键词：内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ 血肿瘤屏障通透性蛋白激酶C

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不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞PEDF表达的影响

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1084-1087页

作者：金程束军娄志霞沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、... 详细信息

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、高糖B组(20 mmol/L葡萄糖)、高糖C组(30 mmol/L葡萄糖),进行A549细胞培养,分别于24、48、96 h后取样:采用半定量RT-PCR法检测不同时间点、含不同浓度葡萄糖组细胞PEDF mRNA水平,用ELISA法检测细胞培养上清液中和胞内PEDF蛋白,比较不同组间PEDF表达水平差异。结果与对照组相比,随着葡萄糖浓度的增加,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈剂量依赖性改变;随着葡萄糖作用时间的延长,除RT-PCR检测中的高糖C组,及ELISA检测中的高糖B组外,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈时间依赖性改变。结论高浓度葡萄糖、较长时间作用可能降低肺腺癌细胞PEDF的表达水平。

关键词：肺腺癌色素上皮衍生因子葡萄糖浓度影响

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PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2014年第10期49卷 1361-1364页

作者：娄志霞束军金程沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,... 详细信息

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF浓度的增加,PEDF对A549细胞的增殖抑制率递增(P<0.05);相同PEDF浓度(80、160、320、640 nmol/L)情况下,除了80、160 nmol/L PEDF作用24 h和48 h的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF作用时间的延长,PEDF对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P<0.05)。上述不同浓度的PEDF处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF浓度的升高呈递增趋势(P<0.05)。结论 PEDF在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF抑制细胞增殖作用可能和PEDF浓度及作用时间有关,PEDF诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF浓度有一定关系。

关键词：色素上皮衍生因子肺腺癌 A549 细胞增殖细胞凋亡

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微管蛋白和微管作用物质研究及其在神经退行性疾病中的机制探讨

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中国组织工程研究 2014年第51期18卷 8353-8357页

作者：王鹏安思训温玉新于顺何欣北华大学基础医学院人体解剖学教研室吉林省吉林市132013 首都医科大学宣武医院老年病研究所神经生物学研究室北京市100053

背景:tau蛋白是一种微管相关蛋白。研究表明,变异的tau蛋白被认为是阿尔茨海默病患者产生老年斑的关键;人突触核蛋白(Syn)是参与形成帕金森病患者淀粉样变性的主要成分。目的:总结近年来微管相关作用物质的研究进展及其与神经退行性疾... 详细信息

背景:tau蛋白是一种微管相关蛋白。研究表明,变异的tau蛋白被认为是阿尔茨海默病患者产生老年斑的关键;人突触核蛋白(Syn)是参与形成帕金森病患者淀粉样变性的主要成分。目的:总结近年来微管相关作用物质的研究进展及其与神经退行性疾病的相关性。方法:以"tubulin;Alzheimer Disease;Parkinson Disease;Neurodegeneration:微管蛋白;神经退行性疾病;阿尔茨海默病;帕金森病"为检索词,检索1975年3月至2014年3月Pub Med数据库及万方医学网相关文献。纳入微管结构与功能、微管与神经退行性疾病相关蛋白、微管蛋白相关物质及其与神经退行性疾病相关研究的文献26篇进行分析探讨。结果与结论:微管由微管蛋白组成,在细胞中起重要的细胞骨架作用。在神经系统,微管系统的稳定性也是维持胞体和突起间营养转运的基础。已证实微管蛋白与帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病的关键蛋白密切相关。tau蛋白异常聚积导致的轴突转运障碍不仅影响神经元的形态,而且影响其功能。Syn可以促进生长初期原代培养神经元轴突内微管的组装。当细胞受到不良刺激时,发生微管相关物质的不良代谢,导致微管系统产生结构的紊乱和功能的障碍,胞内物质异常堆积,并通过一系列目前尚待阐明的调控机制使细胞逃逸凋亡,从而进入退行性变性。目前的神经退行性疾病的临床治疗也多以替代法治疗为主,尚无特效药物。

关键词：微管蛋白阿尔茨海默病帕金森病组织构建组织工程神经退行性疾病微管

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人巨细胞病毒皮层蛋白pUL76非保守C端引起核内蛋白聚集体形成

人巨细胞病毒皮层蛋白pUL76非保守C端引起核内蛋白聚集体形成

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：张文昌王明丽安徽医科大学基础医学院微生物学教研室

目的许多神经系统疾病与细胞内蛋白聚集体形成密切相关,人巨细胞病毒先天性感染主要累及神经系统,而HCMV UL76转染细胞最典型的特征就是引起细胞核内蛋白聚集体的形成。UL76属于疱疹病毒UL24家族,该家族成员氨基酸序列N端保守,而C端变... 详细信息

目的许多神经系统疾病与细胞内蛋白聚集体形成密切相关,人巨细胞病毒先天性感染主要累及神经系统,而HCMV UL76转染细胞最典型的特征就是引起细胞核内蛋白聚集体的形成。UL76属于疱疹病毒UL24家族,该家族成员氨基酸序列N端保守,而C端变异较高。通过分别构建人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus HCMV)皮层蛋白UL76全长以及保守N端和非保守C端的真核表达

关键词：聚集体人巨细胞病毒 pUL76 皮层蛋白非保守

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