检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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EGF与CNTF基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响及机制探讨

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安徽医科大学学报 2013年第7期48卷 750-755页

作者：田丰尹宗生高维陆张辉张胜权黄大可安徽医科大学第一附属医院骨科合肥230022 安徽医科大学安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的研究表皮生长因子(EGF)与睫状神经营养因子(CNTF)基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响,并探讨其机制。方法 96只SD大鼠随机均分为EGF转染组(A组)、CNTF转染组(B组)、CNTF与EGF共转染组(C组)和对照组(D组)4组。采用改良Allen... 详细信息

目的研究表皮生长因子(EGF)与睫状神经营养因子(CNTF)基因共转染对脊髓损伤大鼠运动功能恢复的影响,并探讨其机制。方法 96只SD大鼠随机均分为EGF转染组(A组)、CNTF转染组(B组)、CNTF与EGF共转染组(C组)和对照组(D组)4组。采用改良Allen's法制备大鼠脊髓损伤模型,分别向A、B、C组和D组持续转染重组EGF与CNTF质粒和空白质粒各5μg。术后1、2、4、6周采用BBB运动功能评分系统检测大鼠运动功能恢复情况;采用RT-PCR和Western blot法检测EGF与CNTF基因的表达;采用免疫荧光双标染色和组织学观察EGF与CNTF对反应性星形胶质细胞增殖分化的影响以及脊髓组织病理变化情况。结果术后2、4、6周运动功能评分C组BBB评分明显高于其余3组(P<0.05)。RT-PCR和Western blot法检测显示A组大鼠脊髓组织可见EGF,B组可见CNTF mRNA与蛋白的表达,C组可见共同表达,而D组则未见明显表达。组织学观察示C组脊髓结构以及神经元形态恢复较好且逐渐趋于正常,且免疫荧光双标染色示C组脊髓组织中Nestin阳性的星形胶质细胞数较D组明显增多(P<0.05)。结论 EGF与CNTF基因能够促进脊髓损伤后星形胶质细胞逆分化,从而促进脊髓功能的修复。

关键词：表皮生长因子睫状神经营养因子共转染脊髓损伤运动功能恢复

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阜阳市手足口病柯萨奇病毒A10型VP4区基因特征分析

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中华疾病控制杂志 2013年第6期17卷 480-483页

作者：赵蕾陈敬贤王明丽安徽医科大学基础医学院微生物学教研室安徽合肥230032 哥伦比亚大学病理与细胞生物学教研室美国纽约10032

目的分析2011-2012年阜阳市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿咽拭子标本分离的柯萨奇病毒A10型(coxsackievirus A10,CoxA10)VP4区的基因特征,初步了解该病毒的变异情况。方法对49份HFMD患儿的咽拭子标本进行病毒分离,出... 详细信息

目的分析2011-2012年阜阳市手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿咽拭子标本分离的柯萨奇病毒A10型(coxsackievirus A10,CoxA10)VP4区的基因特征,初步了解该病毒的变异情况。方法对49份HFMD患儿的咽拭子标本进行病毒分离,出现人肠道病毒(human enterovirus,HEV)特征性病毒致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)后提取病毒RNA,用VP4区分型引物进行半巢式反转录-PCR,再通过测序和GenBank Blast比对确定病毒型别,并对其VP4区进行序列进化分析。结果 49份咽拭子标本有16份出现了特征性CPE,病毒分离阳性率32.7%。其中三株经鉴定为CoxA10,阳性率18.8%。它们的VP4区核苷酸序列同源性为95%～99%,与GenBank中参考毒株VP4区核苷酸序列同源性为77%～97%。其中与中国株HQOO5431同源性为96%～97%,与中国株JN639887同源性为96%～97%,与中国株FJ598089同源性为95%～96%,与日本株AB282808同源性为85%～86%,与日本株AB162743同源性为87%～89%,与CoxA10原型株Kowalik(AF081300)同源性为77%～78%。进化分析表明这三株分离株与Kowalik株聚成一簇,均属于CoxA10,与日本各地分离的CoxA10的病毒核苷酸差异较大,但与我国本土分离株自成一簇。结论 2011-2012年阜阳地区手足口病病原体CoxA10 VP4与中国地区分离株在进化上密切相关,其序列未发生明显变异。

关键词：手足口病柯萨奇病毒感染序列同源性

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c-Met siRNA对U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响

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实用医学杂志 2013年第6期29卷 854-856页

作者：石玉生谭燕伍锡栋张兴梅南方医科大学南方医院放疗科广州市510515 南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广州市510515

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响。方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分... 详细信息

目的:合成针对c-Met的小干扰RNA(siRNA),研究其对U87-EGFRvⅢ(表皮生长因子受体Ⅲ型突变体)胶质瘤细胞凋亡和增殖的影响。方法:用脂质体转染合成的c-Met siRNA入U87-EGFRvⅢ细胞,未转染组为对照组,荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测c-Met基因和蛋白的表达,MTT和Annexin V-FITC/PI法检测细胞增殖和凋亡情况。结果:c-Met siRNA明显抑制c-Met表达(P<0.05);明显增加细胞凋亡率(P<0.05)。同时,c-Met siRNA单独或协同EGFRvⅢsiRNA可抑制胶质瘤细胞增殖(P<0.05)。结论:c-Met siRNA可抑制U87-EGFRvⅢ胶质瘤细胞增殖、诱导其凋亡,为研究c-Met基因在胶质瘤中的作用及其靶向联合治疗提供了理论基础。

关键词： siRNA c—Met 表皮生长因子受体 Ⅲ型突变体

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腺嘌呤核苷受体介导肿瘤坏死因子-α开放血肿瘤屏障的作用及其机制

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中国药理学通报 2013年第9期29卷 1248-1251页

作者：秦丽娟谷艳婷王艳蕾张田贾永森王小君孙娜薛一雪河北联合大学基础医学院河北唐山063000 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院生理学教研室辽宁沈阳110016 河北联合大学中医学院河北唐山063000 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的明确肿瘤坏死因子-α(TNF-α)开放血肿瘤屏障的作用及其可能机制。方法构建体外血肿瘤屏障模型,给予TNF-α后不同时间点,免疫组织化学法和Western blot法动态检测胶质瘤细胞的热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)和腺嘌呤核... 详细信息

目的明确肿瘤坏死因子-α(TNF-α)开放血肿瘤屏障的作用及其可能机制。方法构建体外血肿瘤屏障模型,给予TNF-α后不同时间点,免疫组织化学法和Western blot法动态检测胶质瘤细胞的热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)和腺嘌呤核苷受体(adenosine A1receptor,A1R)的表达水平;荧光分析法检测体外血肿瘤屏障模型的通透性改变。结果给予TNF-α后,胶质瘤细胞内HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内A1R的表达水平也在给予TNF-α后明显增加,并于120 min达高峰后逐渐减少。其血肿瘤屏障的通透性亦于给予TNF-α后120 min达最大后减少。结论经TNF-α作用后的胶质瘤细胞HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过某种内在机制提高A1R的表达水平,进而增加了血肿瘤屏障的通透性。

关键词： TNF-α胶质瘤血脑屏障血肿瘤屏障热休克蛋白 70 腺嘌呤核苷受体

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Urantide对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡的作用及机制研究

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中国药理学通报 2013年第5期29卷 648-654页

作者：张骏艳姚华李晟孙璇君陈志武抗炎免疫药理学省部共建教育部重点实验室国家中医药管理局中药药理三级实验室安徽医科大学基础医学院药理学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学生命科学院生物学教研室安徽舍肥230032

目的观察urantide对大鼠缺血/再灌注心肌组织氧化应激损伤的作用和心肌细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt及PKC信号通路的关系。方法可逆性冠脉左前降支结扎造成心肌缺血/再灌注模型,给予大鼠心脏缺血30 min再灌注90 min。80只大鼠随机分为... 详细信息

目的观察urantide对大鼠缺血/再灌注心肌组织氧化应激损伤的作用和心肌细胞凋亡的影响及其与PI3K/Akt及PKC信号通路的关系。方法可逆性冠脉左前降支结扎造成心肌缺血/再灌注模型,给予大鼠心脏缺血30 min再灌注90 min。80只大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注(I/R)组、urantide低、中、高剂量组(3,10,30μ***-1)、维拉帕米对照组(1.6 ***-1)、urantide+CHE组(30μ***-1+1 ***-1)、urantide+LY294002组(30μ***-1+0.3 ***-1)。Urantide低、中、高剂量组中urantide于缺血前5 min舌下静脉1 min内一次性推注,urantide+CHE组与urantide+LY294002组中,在穿线稳定后舌下静脉分别快速推注CHE与LY294002,5 min后舌下静脉快速推注uran-tide 30μ***-1,稳定10 min后再行缺血/再灌注操作。实验结束后测定大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活力和丙二醛(MDA)含量以及一氧化氮(NO)含量。TUNEL法检测凋亡细胞指数(AI),免疫组化法检测心肌组织Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与I/R组相比,urantide 30μ***-1能明显升高SOD活性(P<0.01),明显减少血清中MDA的含量(P<0.05),明显提高NOS活力(P<0.01),使NO含量增加(P<0.01);Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05);urantide+CHE组与urantide+LY294002组与urantide30μ***-1组相比,SOD活力和NO含量下降,MDA含量上升,心肌组织中Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡指数上升,而Bcl-2蛋白表达下降,与I/R组比较差异无统计学意义(P>0.01)。结论 Urantide能够通过激活PKC和PI3K/Akt信号转导通路,减少心肌组织氧自由基的含量,进一步调控Bcl-2和Bax蛋白的表达,抑制心肌缺血/再灌注大鼠心肌细胞的凋亡,从而对大鼠心肌缺血/再灌注具有一定保护作用。

关键词： urantide 心肌缺血再灌注损伤氧化应激细胞凋亡 PKC信号通路 PI3K Akt信号通路

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骨髓间充质干细胞向人胶质瘤迁移的分子机制初探

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中国医科大学学报 2013年第11期42卷 965-969,981页

作者：胡宜程鹏薛一雪刘云会中国医科大学附属盛京医院神经外科沈阳110004 中国医科大学附属第一医院神经外科沈阳110001 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室沈阳110001

目的研究细胞表面黏附分子在骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胶质瘤定向迁移中的作用及其下游信号通路,探讨此过程中的分子生物学机制。方法骨髓间充质干细胞分离自6周龄的SD大鼠,采用全骨髓贴壁法原代培养。利用Transwell小室构建骨髓间充... 详细信息

目的研究细胞表面黏附分子在骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胶质瘤定向迁移中的作用及其下游信号通路,探讨此过程中的分子生物学机制。方法骨髓间充质干细胞分离自6周龄的SD大鼠,采用全骨髓贴壁法原代培养。利用Transwell小室构建骨髓间充质干细胞体外迁移模型,观察人U251胶质瘤细胞诱导BMSCs趋化迁移的过程中,血管细胞黏附分子1(VCAM 1)阻滞抗体及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路抑制剂LY294002对BMSCs迁移能力的影响。利用U251细胞培养上清诱导BMSCs,加入或不加入LY294002,利用RT PCR及Western blot方法观察VCAM 1的核酸及蛋白表达变化情况。结果加入VCAM 1阻滞抗体及LY294002后,BMSCs向U251胶质瘤细胞的迁移受到显著抑制;U251细胞能促进BMSCs的VCAM 1核酸及蛋白表达,加入LY294002后上调的VCAM 1表达受到抑制。结论胶质瘤细胞可通过促进BMSCs上调表达VCAM 1而促进其迁移,在此过程中PI3K信号通路发挥作用。

关键词：骨髓间充质干细胞胶质瘤迁移黏附分子信号通路

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脑微血管内皮细胞TNFR差异表达对rhTNF开放血肿瘤屏障的影响

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中风与神经疾病杂志 2013年第7期30卷 580-582页

作者：秦丽娟王健谷艳婷张田王艳蕾薛一雪河北联合大学基础医学院河北唐山063000 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院辽宁沈阳110016 中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的观察脑微血管内皮细胞的肿瘤坏死因子受体(TNFR)差异表达对rhTNF开放血肿瘤屏障的影响。方法建立TNFR1/TNFR2高表达的脑微血管内皮细胞株,并与C6胶质瘤细胞一起通过Transwell小室构建体外血肿瘤屏障模型。免疫荧光技术检测脑微血管... 详细信息

目的观察脑微血管内皮细胞的肿瘤坏死因子受体(TNFR)差异表达对rhTNF开放血肿瘤屏障的影响。方法建立TNFR1/TNFR2高表达的脑微血管内皮细胞株,并与C6胶质瘤细胞一起通过Transwell小室构建体外血肿瘤屏障模型。免疫荧光技术检测脑微血管内皮细胞TNFR的表达水平。荧光分析法测定给予rhTNF后的血肿瘤屏障通透性变化。结果脑微血管内皮细胞的TNFR1高表达时,rhTNF开放血肿瘤屏障的程度最大。而TNFR2高表达时,血肿瘤屏障开放程度与对照组相比无明显差异。结论 rhTNF可能是通过与脑微血管内皮细胞的TNFR1结合而引起血肿瘤屏障开放的。

关键词：胶质瘤血肿瘤屏障 TNFR

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ROCK介导缓激肽开放SD大鼠血肿瘤屏障

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解剖科学进展 2013年第1期19卷 75-78页

作者：马腾刘啸白薛一雪中国医科大学基础医学院神经生物学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学

目的利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分... 详细信息

目的利用ROCK的特异性抑制剂Y-27632,研究ROCK是否介导缓激肽开放血肿瘤屏障。方法应用ROCK的特异性抑制剂Y-27632预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,用缓激肽诱导血肿瘤屏障开放,测量跨内皮阻抗值(TEER),辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western-blot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达;应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变。结果 Y-27632显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高;Y-27632显著抑制ZO-1的表达;Y-27632抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,应力纤维形成明显减少。结论 ROCK介导缓激肽开放血肿瘤屏障。

关键词： ROCK Y-27632 缓激肽血肿瘤屏障紧密连接 ZO-1 SD大鼠

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针对U87-EGFRvⅢ细胞的适配子对胶质瘤荷瘤鼠的抑瘤作用

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华南国防医学杂志 2013年第6期27卷 372-375页

作者：伍锡栋谭燕梁惠玉张兴梅石玉生南方医科大学基础医学院神经生物学教研室广东广州510515 南方医科大学南方医院放疗科

目的观察应用细胞-配体指数富集的系统进化技术(cell systematic evolution of ligands by exponential enrichment,Cell-SELEX)筛选出的针对稳定过表达表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(epidermal growth factor receptor vari-antⅢ,EGFRvⅢ)的U87-EGFRvⅢ细胞的适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的抑瘤作用。方法选用4～6周的雄性裸鼠28只随机分为4组,分别为空白对照组、转染试剂对照组、DNA原库GN对照组、适配子U2治疗组,每组7只。皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型,通过in vivojet-PEI TM转染试剂的作用将筛选得到的适配子U2和原库GN分别进行瘤内注射。给药结束1周后,对肿瘤的重量和体积大小进行统计学分析。结果在形体上U2治疗组肿瘤大小明显小于其他组,试剂组与原库GN组均没有明显的差异,统计学分析U2治疗组与其它组的肿瘤重量和体积均有差异(P<0.05)。结论筛选得到的适配子对通过皮下种植U87-EGFRvⅢ细胞悬浮液建立荷瘤裸鼠动物模型中的肿瘤生长有一定的抑制作用,为适配子在荷瘤裸鼠动物模型中的应用提供了一定的技术理论基础。

关键词：表皮生长因子受体Ⅲ型突变体适配子胶质瘤抑瘤作用

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