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安徽医科大学学报 2015年第3期50卷 341-344页

作者：袁杰清束军王丹平沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNI... 详细信息

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNIP浓度明显低于良性胸腔积液中的含量;良恶性胸腔积液患者的血清中TXNIP浓度水平差异无统计学意义。TXNIP浓度89.57μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度76%,特异度87.5%,符合率86.96%;CEA浓度5.285μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度88%,特异度90.6%,符合率91.23%。联合试验,并联诊断的灵敏度为97.12%,特异度为79.28%;串联诊断灵敏度为66.88%,特异度98.83%。结论 TXNIP对恶性胸腔积液的诊断具有一定价值,与CEA联合检测可以提高诊断灵敏度与特异度。但是TXNIP对恶性胸腔积液的诊断价值并不优于CEA。

关键词：硫氧还蛋白结合蛋白癌胚抗原胸腔积液诊断

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3-溴丙酮酸对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1174-1178页

作者：张梅束军朱宁沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A54... 详细信息

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A549细胞内的HK2活性;ELISA检测试剂盒检测不同浓度3-BrPA对A549细胞培养上清液中和细胞内MMP-9、Vimentin表达水平的影响。结果划痕实验和Transwell结果显示,3-BrPA干预组的A549细胞迁移距离、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.05);HK2活性结果显示,3-BrPA干预组A549细胞内HK2活性明显低于阴性对照组(P<0.05);ELISA实验结果显示,3-BrPA干预组MMP-9、Vimentin表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论 3-BrPA能显著抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,能显著抑制肿瘤转移相关蛋白MMP-9和Vimentin的表达水平。

关键词： 3-溴丙酮酸肺腺癌迁移侵袭

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胃和弓状核中obestatin在摄食行为调节中的作用

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安徽医科大学学报 2012年第5期47卷 508-510页

作者：康冬梅赵翠平姚慧黄大可叶山东安徽省立医院老年内分泌科合肥230001 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032 安徽省立医院内分泌科合肥230001

目的观察摄食行为改变对小鼠胃和下丘脑弓状核中obestatin表达的影响,探讨obestatin在摄食行为调节中的作用。方法 50只雄性昆明种小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,分别为饥饿0、24、48、72 h及饥饿72 h后再进食4 h。分别于饥饿不同时段... 详细信息

目的观察摄食行为改变对小鼠胃和下丘脑弓状核中obestatin表达的影响,探讨obestatin在摄食行为调节中的作用。方法 50只雄性昆明种小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,分别为饥饿0、24、48、72 h及饥饿72 h后再进食4 h。分别于饥饿不同时段和饥饿后再进食时观察各组小鼠体重的变化;采用免疫组化法检测各组小鼠胃组织和弓状核中obestatin表达水平的变化。结果与A组相比,B、C、D组小鼠体重均明显降低(P<0.01),E组小鼠体重增加(P<0.05)。与A组比较,余4组胃和弓状核obestatin表达均明显降低(P<0.05),B、C、D、E组差异无统计学意义。线性相关分析表明弓状核obestatin表达与处死时体重、胃组织obestatin呈正相关,与体重变化呈负相关。结论饥饿和饥饿后再进食状态胃组织和弓状核中obestatin表达有变化,提示obestatin可能参与了摄食行为的调节。

关键词： obestatin 饥饿进食胃弓状核

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高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及VEGF、MMP-2表达的影响

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 363-368页

作者：李晓峰束军程宇徐胜沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖)、顺铂组(5、10、20、40μmol/L顺铂)和联合组(30 mmol/L葡萄糖联合5、10、20、40μmol/L顺铂),分别处理48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖率,比较不同组别间细胞增殖率的差异;对照组、葡萄糖组、甘露醇组处理24 h和48 h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞中VEGF、MMP-2的mRNA水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF、MMP-2的蛋白浓度,比较不同组别间VEGF、MMP-2的表达水平差异。结果除10 mmol/L葡萄糖组外,葡萄糖组的细胞增殖率均高于对照组(P<0.05);相同顺铂浓度下,联合组的细胞增殖率高于顺铂组(P<0.05);与对照组比较,葡萄糖组VEGF、MMP-2表达明显增强(P<0.05),且对葡萄糖浓度有一定依赖性,葡萄糖浓度为30 mmol/L时VEGF mRNA、MMP-2的mRNA和蛋白水平达最高值,40 mmol/L时VEGF蛋白浓度最高;相同干预条件,48 h细胞的VEGF、MMP-2表达水平高于24 h(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能促进肺腺癌A549细胞的增殖,增强对顺铂的耐受力及VEGF、MMP-2的表达。

关键词：葡萄糖肺腺癌生长血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-2

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复方芪参提取物对瘢痕疙瘩成纤维细胞内Smad蛋白连接区的影响

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安徽医科大学学报 2010年第6期45卷 780-784页

作者：黄维娟何淑芳杨雁周伏圣方巧云杨森张学军安徽医科大学基础医学院药理教研室合肥230032 安徽医科大学皮肤病研究所合肥230032 安徽医科大学教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室(省部共建) 合肥230032

目的研究复方芪参提取物(CASE)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)内Smad蛋白连接区的影响。方法 MTT法检测CASE对新生牛血清(NBS)诱导的KFs增殖的影响;细胞免疫荧光染色法观察不同浓度(7.5、15、30mg/L)CASE对T... 详细信息

目的研究复方芪参提取物(CASE)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)内Smad蛋白连接区的影响。方法 MTT法检测CASE对新生牛血清(NBS)诱导的KFs增殖的影响;细胞免疫荧光染色法观察不同浓度(7.5、15、30mg/L)CASE对TGF-β1诱导的KFs内Smad2L和Smad3L蛋白磷酸化的影响;人体正常成纤维细胞(NFs)作为对照。结果 CASE(15、30、60mg/L)能够显著抑制NBS诱导的KFs的增殖,其IC50为18.90mg/L;TGF-β1能够诱导KFs内Smad2L和Smad3L蛋白磷酸化,而CASE(7.5、15、30mg/L)对这两种蛋白的磷酸化均具有明显的抑制作用,而TGF-β1对NFs中Smad2L和Smad3L蛋白表达无明显影响。结论 CASE能够抑制KFs细胞的增殖,其作用机制可能与抑制Smad2连接区和Smad3连接区磷酸化有关。

关键词：瘢痕疙瘩成纤维细胞转化生长因子-β1 Smad蛋白质类

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过量表达LMO2对成血管细胞增殖和造血分化的作用

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 177-184页

作者：周海胜李春查晓军陈兵刘德培安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿科合肥230001 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。... 详细信息

目的利用小鼠胚胎干细胞进行体外造血细胞分化,研究LMO2蛋白在成血管细胞分化过程中的作用。方法构建小鼠成血管细胞特异性表达lmo2或绿色荧光蛋白的表达载体,分别转染小鼠胚胎干细胞。经过筛选获得细胞克隆进行自发分化以形成胚胎体。收集分化0～12 d的胚胎体细胞,检测造血细胞相关基因的表达;利用EB细胞进行细胞集落形成实验及血细胞集落形成单位实验,并统计集落形成数。结果成功构建了成血管细胞特异性表达目的基因的表达载体,转染目的基因的小鼠胚胎干细胞在其分化中产生的成血管细胞可特异表达目的基因。过量表达lmo2能够促进造血相关基因的表达,所产生细胞集落数是对照组的2倍,晚期造血分化的血细胞集落形成单位总数是对照组的2.5倍,其中红系集落单位数是对照组的3倍。结论在成血管细胞中过量表达LMO2,促进其细胞增殖及其造血细胞分化。

关键词： LMO2 胚胎干细胞成血管细胞增殖分化

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弓形虫钙依赖蛋白激酶CDPK3多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 922-926页

作者：李丹韩萌都建安然安徽医科大学基础医学院生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化... 详细信息

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化重组pET-28a-TgCDPK3蛋白。取纯化蛋白用弗氏佐剂乳化后通过皮下多点注射免疫新西兰大白兔,一周后加强免疫,共2次。末次免疫后1周取血,分离血清,通过ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗血清与内源天然TgCDPK3蛋白以及重组表达蛋白TgCDPK3的反应性。同时以该抗血清为一抗采用免疫荧光法进行TgCDPK3蛋白的定位。结果pET-28a-TgCDPK3转化BL21后表达相对分子质量为59×103的His-TgCDPK3蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备的抗血清抗体效价为1∶64000。Western blot检测该抗血清能识别来源于弓形虫ME-49株的TgCDPK3蛋白及外源重组TgCDPK3蛋白。免疫荧光检测显示TgCDPK3定位于弓形虫速殖子膜表面。结论成功制备TgCDPK3多克隆抗体,该抗体效价高且特异性强,可用于相关基础实验,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 TgCDPK3 多克隆抗体免疫荧光

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实时定量PCR检测内质网应激相关基因方法的建立

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安徽医科大学学报 2012年第8期47卷 988-991页

作者：王夏沈玉君徐元宏沈玉先安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学基础医学院合肥230032 安徽医科大学教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室(省部共建) 合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

从人外周血白细胞中扩增目的基因片段,构建标准品质粒,应用SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时定量PCR,检测内质网应激相关基因的拷贝数。所建立的实时定量PCR方法在起始模板量106～1013拷贝/μl范围内,荧光信号达到阈值的循环数Ct值与模板... 详细信息

从人外周血白细胞中扩增目的基因片段,构建标准品质粒,应用SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时定量PCR,检测内质网应激相关基因的拷贝数。所建立的实时定量PCR方法在起始模板量106～1013拷贝/μl范围内,荧光信号达到阈值的循环数Ct值与模板浓度线性关系良好(R2=0.991 9),是检测内质网应激相关基因有效的手段。

关键词：实时定量PCR SYBR GreenⅠ 内质网应激

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甲状腺激素对成年大鼠额叶内synaptotagmin 1表达的影响

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安徽医科大学学报 2010年第6期45卷 752-755页

作者：王建月王茜孙春萍桂丽朱德发安徽医科大学第一附属医院老年内分泌科合肥230022 安徽体育运动职业技术学院体育教育管理系合肥230051 安徽医科大学第三附属医院内分泌科合肥230061 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的研究不同甲状腺激素水平对SD大鼠额叶内突触结合蛋白1(syt1)表达的影响。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)复制成年期大鼠甲状腺功能减退(甲减)模型,左旋甲状腺素复制甲状腺功能亢进(甲亢)模型,放射免疫法测定血清甲状腺激素T3、T4水平,免... 详细信息

目的研究不同甲状腺激素水平对SD大鼠额叶内突触结合蛋白1(syt1)表达的影响。方法用丙基硫氧嘧啶(PTU)复制成年期大鼠甲状腺功能减退(甲减)模型,左旋甲状腺素复制甲状腺功能亢进(甲亢)模型,放射免疫法测定血清甲状腺激素T3、T4水平,免疫组化SP法分析甲减组、甲亢组及正常对照组大鼠额叶分子层(Ⅰ层)、外颗粒层(Ⅱ层)、外锥体细胞层(Ⅲ层)、内颗粒层(Ⅳ层)和内锥体细胞层(Ⅴ层)syt1蛋白的表达情况。结果甲减组大鼠血清T3、T4显著低于正常对照组(P<0.05),Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层syt1免疫反应产物明显少于正常对照组(P<0.05);甲亢组大鼠血清T3、T4显著高于对照组,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ层syt1免疫反应产物也比正常对照组减少(P<0.05),仅在第Ⅳ层与正常对照组比较无统计学意义。结论甲状腺激素水平的降低和增高可导致成年期大鼠额叶内syt1蛋白表达减少,其减少的原因可能是不同的。

关键词：甲状腺功能减退症甲状腺功能亢进症突触结合蛋白质Ⅰ 额叶甲状腺激素类

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甲状腺非典型腺瘤中DAPI核染色、Ki-67表达及意义

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临床与实验病理学杂志 2014年第10期30卷 1117-1121页

作者：邢益祥孟刚安徽医科大学基础医学院病理学教研室合肥230031 合肥华澳临床医学检验所病理实验室合肥230001

目的探讨4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色、Ki-67在甲状腺非典型腺瘤(atypical thyroid adenoma,ATA)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法和免疫荧光染色法分别检测ATA... 详细信息

目的探讨4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色、Ki-67在甲状腺非典型腺瘤(atypical thyroid adenoma,ATA)中的表达及临床意义。方法采用免疫组化EnVision两步法和免疫荧光染色法分别检测ATA、甲状腺滤泡癌(follicular thyroid carcinoma,FC)中Ki-67增殖指数及DAPI核染色情况。结果 DAPI在低、高核级ATA组织中的阳性率分别为12.50%(2/16)、16.13%(5/31),两组相比差异无统计学意义(χ2=0.01,P>0.05);其在对照组FC中的阳性率为85.71%(6/7),两组相比差异有统计学意义(χ2=13.17,P<0.01);Ki-67在低、高核级ATA组织中的阳性率分别为6.25%(1/16)、6.45%(2/31),二者相比差异无统计学意义(χ2=0.36,P>0.05);而在对照组FC中的阳性率为85.71%(6/7),二者相比差异有统计学意义(χ2=22.19,P<0.01);Ki-67、DAPI表达与ATA患者年龄、结节数量、肿块大小无关。结论联合检测Ki-67和DAPI可能对ATA与FC的鉴别诊断有一定价值。Ki-67、DAPI与ATA核级别、患者年龄、肿块大小和结节数量无关。

关键词：甲状腺肿瘤非典型腺瘤 Ki-67 DAPI 免疫组织化学免疫荧光染色

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