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中国人兽共患病杂志 2005年第10期21卷 871-874,916页

作者：陈灵芝周金林李培英周勇志龚海燕中国农科院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232 安徽医科大学基础医学院安徽农业大事畜牧水产学院

目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔,首次免疫抗... 详细信息

目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔,首次免疫抗原剂量免为300μg/兔,二次免疫和三次免疫均为150μg/兔。三次免疫后进行攻击蜱试验,观察免疫保护效果。结果在IPTG诱导下,重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中获得高效表达,产生Trx-cysA和Trx-cysB融合蛋白,这两种融合蛋白经纯化后免疫家兔,分别使成蜱的吸附率降至17%和17%,饱血率降至42%和22%。结论重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中高效表达,表达产物能诱导家兔产生一定程度的抗蜱保护性免疫力。

关键词：蜱半胱氨酸蛋白酶基因表达免疫保护

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小鼠海马CA1和CA3神经元基本电生理特性的比较分析

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1072-1076页

作者：张玉松祝延郭呈斌解敏王烈成张晨安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 蚌埠医学院生理学教研室蚌埠233000 北京大学生命科学学院神经疾病与神经网络实验室北京100871

目的制备急性小鼠海马脑片,观察并分析海马脑片CA1和CA3神经元的电生理特性。方法将急性制备的小鼠海马脑片,应用红外微分干涉相差技术结合电荷耦合成像系统和脑片膜片钳技术,对小鼠海马CA1和CA3神经元结构特点和电生理特性进行观察和... 详细信息

目的制备急性小鼠海马脑片,观察并分析海马脑片CA1和CA3神经元的电生理特性。方法将急性制备的小鼠海马脑片,应用红外微分干涉相差技术结合电荷耦合成像系统和脑片膜片钳技术,对小鼠海马CA1和CA3神经元结构特点和电生理特性进行观察和检测。结果海马CA1和CA3神经元立体结构清晰,胞体突起明显,细胞死亡少且容易封接。海马CA1和CA3神经元自发放电电流和动作电位的幅度、频率,静息膜电位和峰峰间距,二者之间差异均无统计学意义;去极化脉冲电压与钠和钾离子通道电流密度,步阶脉冲电流与动作电位发放数二者之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论海马CA1和CA3神经元的一些基本电生理特性存在异同,这结果为记忆和神经疾病等研究提供一定的理论基础。

关键词：膜片钳技术小鼠脑片海马神经元电生理

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小鼠腹外侧视前区神经元的鉴定及其昼夜发放频率

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安徽医科大学学报 2016年第9期51卷 1235-1238页

作者：丁正霞薛天鲍进王媛张瑾王烈成安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 中国科学技术大学生命科学学院脑功能与脑疾病重点实验室合肥230027

目的鉴定腹外侧视前区（VLPO）的神经元,记录神经元在昼夜的动作电位（AP）的发放频率,揭示不同VLPO神经元昼夜发放的规律。方法 4~6周龄野生型小鼠新鲜脑片,根据形态、对药物去甲肾上腺素的响应及电特性对VLPO的神经元进行鉴定;膜片钳... 详细信息

目的鉴定腹外侧视前区（VLPO）的神经元,记录神经元在昼夜的动作电位（AP）的发放频率,揭示不同VLPO神经元昼夜发放的规律。方法 4~6周龄野生型小鼠新鲜脑片,根据形态、对药物去甲肾上腺素的响应及电特性对VLPO的神经元进行鉴定;膜片钳方式记录VLPO区域的神经元在白天的11：00~16：00以及夜间的22：00~02：00动作电位的发放;采用t检验对神经元动作电位的发放频率进行统计学分析。结果成功在VLPO鉴定出两类神经元,一类为多极三角形、去甲肾上腺素抑制性神经元,其阈值有低阈值发放（LTS）特性;一类呈两极梭形、去甲肾上腺素兴奋性神经元,其阈值无LTS特性。在记录的59个VLPO区域的神经元中,LTS特性的神经元有44个,非LTS特性的有15个;t检验分析显示去甲肾上腺素抑制的、有LTS特性的神经元在白天动作电位的发放频率明显高于夜间神经元动作电位的发放频率（P〈0.01）;去甲肾上腺素兴奋的、非LTS特性的神经元白天动作电位的发放频率也明显高于夜晚动作电位的发放频率（P〈0.05）。结论 VLPO存在两类神经元,这两类神经元的白天动作电位发放频率皆高于夜间动作电位发放频率,提示两类神经元都参与了昼夜节律的调控。

关键词：腹外侧视前区动作电位 LTS 非LTS

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光通过自主感光视网膜神经节细胞调节睡眠活动

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安徽医科大学学报 2016年第4期51卷 463-467页

作者：王媛吴芳李晓凤洪艳丁正霞许奇张瑾薛天鲍进王烈成安徽医科大学基础医学院生理学教研室合肥230032 中国科学技术大学生命科学学院脑功能与脑疾病重点实验室合肥230027

目的利用不同基因型小鼠,探讨有无自主感光视网膜神经节细胞（ipRGCs）的小鼠在光的调节下对睡眠-觉醒活动的影响。方法四种不同基因型小鼠,分别为野生型（C57BL/6,WT）,ipRGCs不感光型（MKO）,仅保留ipRGCs型（MO）和视杆、视锥细胞... 详细信息

目的利用不同基因型小鼠,探讨有无自主感光视网膜神经节细胞（ipRGCs）的小鼠在光的调节下对睡眠-觉醒活动的影响。方法四种不同基因型小鼠,分别为野生型（C57BL/6,WT）,ipRGCs不感光型（MKO）,仅保留ipRGCs型（MO）和视杆、视锥细胞缺失且ipRGCs不感光型（TKO）。记录小鼠在12h∶12h明暗交替下24h睡眠量和觉醒量以及在关灯后1h（即21：00）给予3h光照,观察其在光照期间（21：00～24：00）睡眠量和觉醒量的变化。结果在12h∶12h明暗交替下,WT、MKO和MO小鼠的觉醒、快动眼睡眠（REM）、非快动眼睡眠（NREM）有明显的昼夜节律,并且这3种时相的分布时间差异无统计学意义;而TKO小鼠的3种时相无稳定相位,表现为自由运转。与12h∶12h明暗交替的相应时段比较,在3h光照期间,WT小鼠觉醒总量减少（P〈0.01）,REM总量增加（P〈0.01）,NREM总量增加（P〈0.01）以及总睡眠时间（TST）增加（P〈0.01）;MO小鼠觉醒总量减少（P〈0.01）,REM总量增加（P〈0.05）,NREM总量增加（P〈0.05）以及TST总量增加（P〈0.01）;MKO和TKO小鼠的3种时相均无显著变化。结论表达视黑素的ipRGCs在小鼠光诱导睡眠的过程中起重要作用。

关键词：自主感光视网膜神经节细胞光照生物节律睡眠

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重组金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及其免疫原性

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中国生物制品学杂志 2022年第9期35卷 1065-1068,1075页

作者：韩慧史伯昌李欣昱李华斌田崇瑜闫芳石艳春郑源强赵忠鹏内蒙古医科大学内蒙古自治区分子生物学重点实验室内蒙古呼和浩特010058 安徽医科大学基础医学院安徽合肥230032 山西农业大学动物医学学院山西晋中030800

目的对金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因定点突变体进行克隆、表达及纯化,并检测其免疫原性,为研制马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品奠定基础。方法对SEB基因序列进行定点突变和修饰以及偏性密码子优化后,构... 详细信息

目的对金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)基因定点突变体进行克隆、表达及纯化,并检测其免疫原性,为研制马抗SEB免疫球蛋白F(ab′)2制品奠定基础。方法对SEB基因序列进行定点突变和修饰以及偏性密码子优化后,构建重组表达质粒pET-22b-SEB,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达重组SEB蛋白,经离子交换层析纯化后,HPLC法检测重组SEB蛋白抗原纯度。Western blot法检测重组SEB蛋白抗原免疫活性;将不同浓度重组SEB蛋白抗原腹腔注射BALB/c小鼠,进行致病力、抗体效价、中和抗体活性检测。结果质粒pET-22b-SEB经双酶切及测序鉴定证明构建正确。纯化的重组SEB蛋白相对分子质量约28300,纯度大于90%,与天然SEB具有一致的免疫活性,且具有良好的安全性;免疫小鼠抗体效价达1∶81920,可有效诱导小鼠产生中和抗体。结论成功对SEB进行了定点突变减毒,经克隆、表达及纯化获得高纯度的重组SEB蛋白抗原,具有良好的免疫原性。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B 重组抗原表达纯化免疫原性

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副溶血弧菌耐热直接溶血素DAS-ELISA检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 666-672页

作者：白雪欣胡宸艺金志颖万伟李月王菁李岩伟高姗王景林安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化... 详细信息

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化和鉴定,随后用高纯度的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,得到抗体后利用分子互作测定抗体的亲和力,并利用该抗体建立检测副溶血弧菌耐热直接溶血素的DAS-ELISA方法。通过棋盘法对该方法的反应条件进行优化,建立标准曲线,并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。结果本实验制备的多克隆抗体亲和力可达1×10^(-8),使用该高亲和力抗体建立的DAS-ELISA方法灵敏度为78 ng/mL,定量范围为78~312 ng/mL;与创伤弧菌溶细胞毒素(Vibrio vulnificus hemolysin,VVH)、产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringensαtoxin,CPA)以及产气荚膜梭菌ε毒素(epsilon toxin,ETX)均无交叉反应;利用扇贝、花蛤和魁蚶制备海鲜模拟样本,在上述3种模拟样本内添加重组蛋白构建标准曲线,评价本方法复杂基质中检出能力时发现灵敏度均并未发生改变;同时在上述3种模拟样本中添加菌液上清评价本方法检测天然毒素能力,检出率为100%。结论成功构建了一种用于副溶血弧菌耐热直接溶血素检测的DAS-ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高,适用于复杂基质检测,有望开发成副溶血弧菌耐热直接溶血素快速诊断试剂盒,具有良好的应用前景。

关键词：耐热直接溶血素多克隆抗体 DAS-ELISA

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p62蛋白的分子功能及其在疾病中的研究进展

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生物工程学报 2023年第4期39卷 1374-1389页

作者：隋馨莹徐平段昌柱李衍常重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 安徽医科大学基础医学院安徽合肥230032 中国医学科学院蛋白组学与新药研发创新单元北京102206

螯合体1(SQSTM1/p62)是一种选择性自噬接头蛋白,在清除待降解蛋白、维持细胞内蛋白质稳态中发挥重要的调控作用。p62蛋白具有多个功能结构域,介导与多种蛋白质发生相互作用进而精确调节特定的信号通路,从而将p62蛋白与氧化防御系统、炎... 详细信息

螯合体1(SQSTM1/p62)是一种选择性自噬接头蛋白,在清除待降解蛋白、维持细胞内蛋白质稳态中发挥重要的调控作用。p62蛋白具有多个功能结构域,介导与多种蛋白质发生相互作用进而精确调节特定的信号通路,从而将p62蛋白与氧化防御系统、炎症反应和营养感知等重要生命过程联系起来。研究表明p62的突变或者表达异常与多种疾病的发生发展过程密切相关,包括神经退行性疾病、肿瘤、感染性疾病、遗传性疾病以及慢性疾病等。本文综述了p62蛋白的结构特征、分子功能,并系统介绍其在蛋白质稳态和信号通路调控中的多种功能,总结了p62在疾病发生发展中的复杂性与多面性,以期为p62蛋白的功能与相关疾病研究提供参考。

关键词： SQSTM1/p62 蛋白酶体自噬疾病肿瘤

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Shewanella oneidensis MR-1生物法绿色合成Au/CdS/rGO和光催化性能研究

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安徽建筑大学学报 2021年第4期29卷 46-51页

作者：宋小杰王秀芳杨帆安徽建筑大学功能分子设计与界面过程重点实验室安徽合肥230601 安徽医科大学基础医学院安徽合肥230026

本论文以氯金酸作为前驱体,用环境广泛存在的革兰氏阴性菌希瓦氏菌(Shewanella oneidensis MR-1)生物法原位还原制备了Au/CdS/rGO纳米复合材料。用X射线衍射仪(XRD)、透射电子显微镜(TEM)和X射线光电子能谱(XPS)对制备的纳米复合材料进... 详细信息

本论文以氯金酸作为前驱体,用环境广泛存在的革兰氏阴性菌希瓦氏菌(Shewanella oneidensis MR-1)生物法原位还原制备了Au/CdS/rGO纳米复合材料。用X射线衍射仪(XRD)、透射电子显微镜(TEM)和X射线光电子能谱(XPS)对制备的纳米复合材料进行表征,结果表明Au/CdS/rGO纳米复合材料被成功合成;XRD图谱显示出有Au、CdS和rGO的特征峰;TEM图谱显示纳米颗粒粒径10-20 nm,并且较好地分散在rGO上。Au/CdS/rGO纳米复合材料的光催化性能研究以亚甲基蓝溶液(40 mg/L)作为模拟污染源进行光降解,催化剂的用量为50 mg,在模拟太阳光光照情况下,70 min纳米复合材料的降解率可达98.86%,优于单纯的CdS和rGO材料,并且循环三次以后降解率为78.42%。本实验微生物参与一步合成纳米复合材料的方法使得在不引入化学还原剂的情况下制备高效纳米复合催化剂成为可能,为生物法合成多种性能的功能纳米复合材料,同时减少生态环境污染提供了借鉴。

关键词： Au/CdS/rGO 纳米复合材料生物法合成光催化亚甲基蓝

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黄牛Ghrelin基因的克隆、表达及生物学活性检测

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生物工程学报 2009年第1期25卷 23-28页

作者：张爱玲张丽陈宏张良志蓝贤勇张春雷张存芳朱泽轶西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100 安徽医科大学基础医学院合肥230032 广东海洋大学农学院湛江524000 徐州师范大学细胞与分子生物学研究所徐州221000 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

本研究通过RT-PCR方法从秦川牛皱胃胃底腺mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆至pGM-T载体获得重组质粒pGh-T1,并进行序列测定。将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET32a(+),构建表达载体pGh-32,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。IPTG诱导后S... 详细信息

本研究通过RT-PCR方法从秦川牛皱胃胃底腺mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆至pGM-T载体获得重组质粒pGh-T1,并进行序列测定。将测序正确的cDNA序列定向克隆到pET32a(+),构建表达载体pGh-32,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。IPTG诱导后SDS-PAGE分析表明秦川牛Ghrelin基因在大肠杆菌中获得高效表达,可溶性分析表明Ghrelin融合蛋白以可溶性和包涵体2种形式表达。Western blotting初步证实了所获的融合蛋白是特异的。镍柱亲和层析法分离纯化融合蛋白并皮下注射家兔后获得了融合蛋白的抗体血清,ELISA检测血清的稀释效价在1:12800。将获得的血清与黄牛下丘脑弓状核进行免疫组化试验,进一步印证了重组蛋白表达产物是有活性的,为进一步研究黄牛Ghrelin的功能及其对黄牛生长发育和脂肪沉积奠定了基础。

关键词：黄牛 RT—PCR Ghrelin 克隆基因表达

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利用单线虫两重PCR技术对秀丽隐杆线虫线粒体DNA拷贝数进行相对定量的方法

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军事医学 2013年第7期37卷 543-546页

作者：高玉晓吴永红叶巧李志慧张成岗安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室全军军事认知与心理卫生研究中心北京100850

目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物... 详细信息

目的基于单线虫两重PCR技术,利用细胞核DNA(nDNA)作为内参研究秀丽隐杆线虫线粒体相对数量的实验条件,进而建立一种相对定量秀丽隐杆线虫线粒体DNA(mtDNA)拷贝数的方法。方法首先以秀丽隐杆线虫nDNA和mtDNA序列为模板,利用多重PCR引物设计软件MPprimer和引物特异性评估软件MFEprimer V2.0设计两重PCR引物;然后针对以单线虫为PCR扩增模板的处理条件进行摸索,包括蛋白酶K的消化浓度及反应时间;最后研究秀丽隐杆线虫nDNA片段和mtDNA片段扩增后到达平台期的时间,进而比较不同循环数扩增下秀丽隐杆线虫线粒体拷贝数相对定量的可行性。结果单线虫经蛋白酶K 60℃消化及95℃灭活处理后,能较特异地扩增出nDNA和mtDNA;单线虫PCR模板的处理条件为50μg/ml蛋白酶K 60℃处理2 min并于95℃灭活10 min;线粒体拷贝数相对nDNA而言,趋于稳定的PCR循环数为26。结论建立了一种以为nDNA内参快速相对定量线粒体拷贝数的方法,为线粒体DNA拷贝数相关的实验研究提供了技术支撑。

关键词：单线虫两重PCR 线粒体DNA DNA拷贝数

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