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中国病理生理杂志 2022年第6期38卷 970-977页

作者：赵静陈茹沈桂萍张慧丰范彦英山西医科大学基础医学院药理教研室山西太原030001

目的:探讨在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下,小鼠皮层星形胶质细胞转化为A1毒性表型的同时,其能量代谢所发生的变化。方法:小鼠皮层星形胶质细胞培养8~9 d后,分为对照(control,CON)组和LPS组;采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒... 详细信息

目的:探讨在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下,小鼠皮层星形胶质细胞转化为A1毒性表型的同时,其能量代谢所发生的变化。方法:小鼠皮层星形胶质细胞培养8~9 d后,分为对照(control,CON)组和LPS组;采用CCK-8细胞增殖及毒性检测试剂盒检测不同LPS处理浓度及不同处理时间下的细胞活力;通过细胞免疫荧光染色技术检测胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达来鉴定星形胶质细胞的纯度;通过补体C3(complement component 3,C3)与GFAP细胞免疫荧光染色共定位,检测C3的表达水平;利用RT-qPCR技术检测C3、鸟苷酸结合蛋白2(guanylate-binding protein 2,GBP2)、S100钙结合蛋白A10(S100 calcium-binding pro⁃tein A10,S100A10)、转谷氨酰胺酶1(transglutaminase 1,TGM1)及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达变化;采用Western blot技术检测C3蛋白表达变化。利用Seahorse XFp活细胞生物能量检测技术检测细胞线粒体呼吸功能和糖酵解水平的变化。结果:免疫荧光染色结果显示,GFAP阳性细胞比例达98%以上。CCK-8结果显示,在不同浓度和不同处理时间下,LPS对星形胶质细胞的活力均无显著影响;RT-qPCR结果显示,在LPS剂量为100μg/L时,C3和GBP2的mRNA表达在24 h均显著升高(P<0.01),而S100A10和TGM1的mRNA表达则无显著变化。Western blot和免疫荧光染色结果显示,LPS处理后C3的蛋白表达显著升高(P<0.01);RT-qPCR结果显示,IL-1β的mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。线粒体压力测定结果显示,LPS处理后的线粒体呼吸相关指标--氧消耗速率(oxygen consumption rate,OCR)与CON组相比无显著差异,而糖酵解速率相关指标--细胞外酸化速率(ex⁃tracellular acidification rate,ECAR)、基础糖酵解质子流出速率(glycolytic proton efflux rate,glycoPER)、代偿性糖酵解、glycoPER百分比及线粒体质子流出速率(mitochondial proton efflux rate,mitoPER)/glycoPER在LPS处理后均显著下降(P<0.01)。结论:LPS可诱导星形胶质细胞向A1表型转换,无氧酵解水平显著降低,但对线粒体主导的有氧呼吸无显著影响。

关键词：星形胶质细胞脂多糖能量代谢

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内向整流钾通道阻滞剂BaCl_2引起大鼠冠状动脉收缩的机制

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生理学报 2017年第2期69卷 129-134页

作者：范芳文贺泽芳石萌杨蓉侯晓敏刘宇张明升山西医科大学基础医学院药理学教研室太原030001

为了探讨内向整流钾通道(inward rectifier K^+channels,K_(ir))阻滞剂BaCl_2引起大鼠冠状动脉(rat coronary artery,RCA)收缩的作用机制,本研究采用离体微血管环张力记录法观察BaCl_2引起的RCA收缩对细胞内Ca^(2+)([Ca^(2+)]_i)释放和细胞外Ca^(2+)([Ca^(2+)]_o)内流的依赖性,并通过抑制剂实验探讨其作用机制。结果显示,静息状态下,BaCl_2(0.1~1.0 mmol/L)浓度依赖性地收缩离体RCA,最大收缩幅度为(5.69±1.07)m N,与KCl(60 mmol/L)收缩幅度相近;BaCl_2在无钙液中所引起的收缩占其总收缩的(35.44±6.72)%,复钙进一步引起(64.56±5.94)%的收缩;钙通道阻滞剂硝苯地平(0.3μmol/L)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(100μmol/L)、细胞外信号调节激酶ERK1/2抑制剂PD98059(10μmol/L)和氯通道阻滞剂尼氟灭酸(100μmol/L)分别使BaCl_2引起的RCA最大收缩幅度降低(87.82±5.43)%(P<0.01)、(73.23±5.47)%(P<0.01)、(75.69±7.94)%(P<0.01)和(83.24±7.69)%(P<0.01)。上述实验结果表明,BaCl_2引起RCA收缩依赖于[Ca^(2+)]_i释放和[Ca^(2+)]_o内流,并提示该过程与增加前列腺素类物质合成、钙通道和氯通道激活及ERK1/2通路有关。

关键词：氯化钡内向整流钾通道冠状动脉前列腺素类氯通道钙离子 ERKl/2通路

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血吸虫感染抗性人血清筛选日本血吸虫童虫cDNA文库

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中国地方病学杂志 2007年第5期26卷 490-493页

作者：任翠平王晓楠雷黎朱绍春赵志荣刘淼沈际佳安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱。为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清．免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库。对获得的阳性克隆核... 详细信息

目的分析血吸虫感染抗性人血清中起免疫保护作用抗体针对的日本血吸虫蛋白抗原谱。为日本血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原分子。方法采集血吸虫流行病区感染抗性人血清．免疫学方法筛选日本血吸虫童虫cDNA文库。对获得的阳性克隆核苷酸进行序列分析，并利用软件对所筛基因编码的抗原分子进行表位预测。结果共筛选出29个持续阳性克隆，对其进行测序，获得25个基因，包括5种已知基因（其中日本血吸虫肌球蛋白12个、丝氨酸蛋白酶抑制剂2个、细胞色素b1个、延伸因子1吨1个和线粒体编码区1个）和5个未知基因。软件分析显示不同抗原分别具有多个不同的抗原表位。结论获得的阳性克隆插入基因片段可能编码潜在的日本血吸虫病疫苗分子．其中日本血吸虫肌球蛋白为主要抗感染蛋白分子。

关键词：血吸虫日本基因文库免疫学

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急性睡眠剥夺调控AMPK-自噬信号致小鼠抑郁样行为机制

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1737-1742页

作者：杜宏梅崔杨凤陈明安徽医科大学基础医学院药理学教研室合肥230032

目的研究急性睡眠剥夺(SD)对小鼠焦虑和抑郁样行为的影响,并探讨其可能的分子机制。方法随机将33只雄性8周龄C57BL/6小鼠分为环境对照(EC)组和SD组。采用旷场实验和十字高架实验评估小鼠自主行为和焦虑行为;采用强迫游泳实验和悬尾实验... 详细信息

目的研究急性睡眠剥夺(SD)对小鼠焦虑和抑郁样行为的影响,并探讨其可能的分子机制。方法随机将33只雄性8周龄C57BL/6小鼠分为环境对照(EC)组和SD组。采用旷场实验和十字高架实验评估小鼠自主行为和焦虑行为;采用强迫游泳实验和悬尾实验检测小鼠抑郁行为。Western blot法检测小鼠海马区神经炎症蛋白和自噬相关蛋白水平的表达。结果与EC组比较,在旷场实验中SD组小鼠总运动距离显著增加(P<0.01),穿线次数和中央区域时间未表现出显著差异;在强迫游泳实验中SD组小鼠不动时间显著增加(P<0.01),但悬尾实验和十字高架实验中各指标均无显著差异。Western blot结果显示:与EC组比较,SD组小鼠海马区NLRP1、TNF-α、IL-1β、IL-18和自噬蛋白p62水平显著升高,Atg5、Atg7水平显著降低,AMPK磷酸化水平也显著降低。结论SD可能通过抑制小鼠海马区AMPK-自噬信号,上调神经炎症水平,导致小鼠出现抑郁样行为。

关键词：急性睡眠剥夺抑郁样行为自噬神经炎症 p-AMPK

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日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因功能的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 87-92页

作者：张薇娜张鹏刘淼任翠平黄大可沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分... 详细信息

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分电击转染的童虫作体外培养,在培养后第1、3和5天以TRIzol法同时提取其总RNA和总蛋白。实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测Mago nashi基因和蛋白表达产物。电击转染的童虫注射入6只BALB/c小鼠体内,每鼠约1 000条,6周后取出虫体,盐酸卡红染色,在激光共聚焦显微镜下观察虫体内部各器官形态特征,测量虫体相关指标。结果在电击转染后的第1、3和5天,SjMago nashi dsRNA组目的基因的转录水平较阴性对照组分别下降了22%、69%和80%,蛋白质水平较阴性对照组分别下降了12%、39%和56%。激光共聚焦显微镜观察发现,SjMago nashi dsRNA组中的雄虫睾丸内有较多精子,呈泛雄性化表现,而雌虫的卵巢和卵黄腺无明显特征变化。与阴性对照组相比,SjMago nashi dsRNA组的雄虫的体宽、睾丸长和睾丸宽,雌虫的体宽、卵巢长和卵巢宽均明显缩小(P<0.05)。结论 SjMago nashi dsRNA可特异性抑制日本血吸虫靶基因及其编码蛋白的表达,SjMago nashi基因为日本血吸虫生殖相关基因,在生殖系统器官的正常发育中起一定作用。

关键词：日本血吸虫生殖双链RNA RNA干扰 Magonashi基因

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棕榈酸钠暴露不同时间对肾小管上皮细胞损伤及对NLRP3炎症小体激活的影响

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安徽医科大学学报 2022年第6期57卷 841-846页

作者：张洁张艳华朱云峰李艳李维祖李卫平安徽医科大学基础医学院药理学教研室合肥230032

目的探究棕榈酸钠(PA)暴露不同时间对肾小管上皮细胞(HK-2)的损伤作用和机制。方法 CCK-8法检测PA作用不同时间HK-2细胞活力;油红染色法检测PA作用不同时间脂质沉积情况;Annexin-Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒检测PA作用不同时间HK-2细胞凋亡情... 详细信息

目的探究棕榈酸钠(PA)暴露不同时间对肾小管上皮细胞(HK-2)的损伤作用和机制。方法 CCK-8法检测PA作用不同时间HK-2细胞活力;油红染色法检测PA作用不同时间脂质沉积情况;Annexin-Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒检测PA作用不同时间HK-2细胞凋亡情况;活性氧试剂盒检测PA作用不同时间活性氧(ROS)生成情况;ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及上清液中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的水平;Western blot测定HK-2细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(Caspase-1)、NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达情况。结果 CCK-8法结果显示,PA(6、9、12、24 h)组HK-2细胞活力下降;油红染色结果显示,PA(6、9、12、24 h)组脂质沉积增加;Annexin-Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒结果显示,细胞凋亡率增加;活性氧试剂盒结果显示,PA(6、9、12、24 h)组ROS的生成显著增加;ELISA结果显示,PA(6、9、12、24 h)组细胞中GSH和SOD的活性降低,细胞上清液中IL-1β和IL-18的水平增加;Western blot结果显示,PA(6、9、12、24 h)组炎症相关蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC及NOX4表达水平升高。结论 PA诱导能导致HK-2细胞脂质沉积和损伤,其机制可能与棕榈酸钠刺激后细胞内NLRP3炎性小体激活介导的炎症反应有关。

关键词：棕榈酸钠人肾小管上皮细胞 NLRP3炎症小体活性氧 NADPH氧化酶4

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4-氨基吡啶对豚鼠心室肌钙和钠电流的影响

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药学学报 2001年第4期36卷 250-253页

作者：傅丽英李泱夏国瑾姚伟星江明性同济医科大学基础医学院药理教研室湖北武汉430030

目的　研究 4 氨基吡啶 ( 4 AP)对心肌细胞L型钙通道和钠通道的影响。方法　用全细胞膜片钳技术考察 4 AP对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和钠电流的作用。结果　 4 AP 0 1,0 5 ,1 0mmol·L-1浓度依赖性地抑制L型钙电流 (ICa,L)和钠电... 详细信息

目的　研究 4 氨基吡啶 ( 4 AP)对心肌细胞L型钙通道和钠通道的影响。方法　用全细胞膜片钳技术考察 4 AP对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和钠电流的作用。结果　 4 AP 0 1,0 5 ,1 0mmol·L-1浓度依赖性地抑制L型钙电流 (ICa,L)和钠电流 (INa) ,抑制率分别为 ( 11 6± 1 7) % ,( 37 5± 8 3) %和 ( 5 4 5± 6 9) %以及 ( 2 2 1±14 3) % ,( 39 4± 8 8) %和 ( 6 2 3± 6 8) %。 0 5mmol·L-14 AP使ICa ,L和INaI -V曲线均上移。结论　 4

关键词： 4-氨基吡啶心肌细胞钙电流钠电流膜片钳豚鼠

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Ape/Ref-1与中枢神经系统疾病的研究进展

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生理科学进展 2005年第4期36卷 319-321页

作者：闫晶晶刘艳霞天津医科大学基础医学院药理学教研室天津300070

无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(apurinic/apyrim id inic endonuclease/redox-factor1,Ape/Ref-1)是一种在体内分布非常广泛的蛋白质,具有修复损伤的DNA,调节氧化还原反应,参与细胞信号转导等多种功能,在维持基因组的完整、调... 详细信息

无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1(apurinic/apyrim id inic endonuclease/redox-factor1,Ape/Ref-1)是一种在体内分布非常广泛的蛋白质,具有修复损伤的DNA,调节氧化还原反应,参与细胞信号转导等多种功能,在维持基因组的完整、调节基因表达、细胞保护等许多方面发挥重要作用。本文着重论述Ape/Ref-1的结构和生物学功能,及其在中枢神经系统肿瘤、损伤等疾病中的作用。

关键词：无嘌呤/无嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子1 碱基切除修复中枢神经系统疾病

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强啡肽对脊髓原生型与诱生型一氧化氮合成酶活性、分布和基因表达的影响及机制

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生理科学进展 1997年第1期28卷 45-48页

作者：胡文辉中国协和医科大学基础医学院药理学教研室

蛛网膜下腔注射（ｉ．ｔ．）强啡肽Ａ１－１７（Ｄｙｎ）引起剂量依赖性后肢和尾部瘫痪及甩尾甩足抑制。脊髓背角（侧）ＮＭＤＡ受体和ＮＯＳ／ＮＯ功能活性下降可能与Ｄｙｎ镇痛作用有关，脊髓腹角（侧）ＮＭＤＡ受体－Ｃａ２＋－ＮＯ... 详细信息

蛛网膜下腔注射（ｉ．ｔ．）强啡肽Ａ１－１７（Ｄｙｎ）引起剂量依赖性后肢和尾部瘫痪及甩尾甩足抑制。脊髓背角（侧）ＮＭＤＡ受体和ＮＯＳ／ＮＯ功能活性下降可能与Ｄｙｎ镇痛作用有关，脊髓腹角（侧）ＮＭＤＡ受体－Ｃａ２＋－ＮＯＳ／ＮＯ通路过度激活及ｃ－ｆｏｓ高表达可能与Ｄｙｎ致脊髓损伤（ＳＣＩ）作用有关。在Ｄｙｎ致ＳＣＩ机制中，过量ＮＯ（细胞水平）具有神经毒性作用，脑源性ＮＯＳ主要在早期，诱生型ＮＯＳ主要在后期起作用，而内皮细胞源性ＮＯＳ和适量ＮＯ（血管水平）可能具有保护作用。在原代培养脊髓神经元中，高浓度Ｄｙｎ可通过ＮＭＤＡ受体和κ受体直接引起细胞内Ｃａ２＋超负荷。

关键词：强啡肽脊髓神经生物学痛觉一氧化氮合成酶

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尼可地尔、谷氨酰胺、美托洛尔单独及合用对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞抗凋亡和HSP70的影响

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中国药理学通报 2014年第9期30卷 1242-1246页

作者：陈文华孙畅张颖吴艳娜温克康毅娄建石天津医科大学基础医学院药理学教研室天津300070

目的研究尼可地尔(nicorandil,Nic)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、美托洛尔(metoprolol,Met)三药联用对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞抗凋亡能力和保护性蛋白HSP70表达的影响。方法将健康♂Wistar大鼠随机分为7组:1假手术(Sham)组,... 详细信息

目的研究尼可地尔(nicorandil,Nic)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、美托洛尔(metoprolol,Met)三药联用对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞抗凋亡能力和保护性蛋白HSP70表达的影响。方法将健康♂Wistar大鼠随机分为7组:1假手术(Sham)组,只实施冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)穿线;2 I/R组,实施LAD 30 min缺血/120 min再灌注程序(ischemia/reperfusion,I/R);3 Nic组;4 Glu组;5 Met组;6三药联用(NGM)组;7三药联用低剂量(NGML)组。药物预处理组则在执行I/R程序前30 min腹腔注射Nic、Glu和Met,三药的初始给药剂量均为1mg·kg-1。TUNEL(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling)法检测心肌细胞凋亡情况,通过凋亡指数衡量心肌细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax以及保护性蛋白热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)的表达情况。结果 I/R组中,缺血区的细胞凋亡率较高(36.9%±10.3%),细胞凋亡相关蛋白表达Bcl-2/Bax值较低(0.14±0.08);与I/R组相比,药物预处理组的细胞凋亡率明显降低(P<0.01),凋亡相关蛋白表达Bcl-2/Bax值明显升高(P<0.01);与Sham组相比,I/R组的HSP70表达明显增加(P<0.01);与I/R组相比,药物预处理组的HSP70表达明显增加(P<0.01);与药物单用组相比,3药联用组的HSP70表达更高(P<0.01)。结论对于大鼠在体I/R损伤,三药联用组与药物单用组相比细胞凋亡率明显降低,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达有所改善;保护性蛋白HSP70的表达增加。

关键词：缺血再灌注损伤联合用药抗凋亡 HSP 70 细胞凋亡率心脏保护

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