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重组果糖二磷酸醛缩酶SjLAP和亮氨酸氨基肽酶SjFBPA用于日本血吸虫病的诊断和疗效考核的评价(英文)

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 339-347页

作者： Faustina Halm-Lai 罗庆礼钟政荣宋晓蓉陈兆武王林胡梅梅储德勇沈继龙安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230022 Cape Coast大学微生物学教研室加纳

目的评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值。方法异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/BL21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和... 详细信息

目的评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值。方法异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/BL21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和纯化柱纯化rSjLAP和rSjFBPA蛋白。88只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,A、B和C组(各21只小鼠),D组(25只小鼠)。A、B和C组分别感染5、15和25条日本血吸虫尾蚴。D组为不感染对照组,在实验的第1天全部处死。A、B和C组在感染后第3、7、10、14、20、30和60天,分别处死小鼠3只,采眼球血制备血清,检测其抗体水平。采用单独或联合rSjLAP和rSjFBPA为抗原,ELISA法检测小鼠血清、急性血吸虫病(38份)和慢性血吸虫病患者(96份)血清中的抗体,以健康人(90份)血清为对照,同时检测华支睾吸虫病(33份)、卫氏并殖吸虫病(40份)和钩虫病患者(37份)血清,并检测急性血吸虫病患者吡喹酮治疗(60 mg/kg,2次/d×2 d)后1年的血清(36份)、慢性血吸虫病患者吡喹酮治疗(剂量,疗程同前)后1年(36份)和2年(64份)的血清。结果 BALB/c小鼠在感染后第10天,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用均可检测到小鼠血清中的IgG抗体;B组(0.535±0.053,0.595±0.033,0.696±0.104)和C组(0.548±0.060,0.608±0.063,0.621±0.090)早期抗体水平明显高于A组(0.415±0.038,0.455±0.056,0.498±0.077)(P<0.05)。用rSjLAP为抗原可检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清,阳性率分别为97.4%(37/38)和87.5%(84/96)(P>0.05);用rSjFBPA为抗原检测,其阳性率分别为94.7%(36/38)和88.5%(85/96)(P>0.05);用rSjLAP和rSjFBPA联合为抗原检测,则其阳性率分别为94.7%(36/38)和85.4%(82/96)(P>0.05)。rSjLAP或联合抗原的特异性均为96.7%(87/90),而rSjFBPA的特异性为97.8%(88/90)。给予吡喹酮治疗后,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用检测急性血吸虫病血清(0.236±0.212,0.287±0.191,0.235±0.120)和慢性血吸虫病患者(0.266±0.124,0.261±0.143,0.265±0.140;0.204±0.074,0.176±0.074,0.176±0.073),抗体滴度普遍下降,与对照组(0.188±0.056,0.173±0.045,0.184±0.051)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。rSjLAP和rSjFBPA单独为抗原检测华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为15.2%(5/33)和12.1%(4/33),两者联合则为9.2%(3/33)。rSjLAP检测卫氏并殖吸虫的交叉反应率为15.0%(6/40),rSjFBPA为12.5%(5/40),两种抗原联合检测为15.0%(6/40)。上述抗原单独或联合检测钩虫的交叉反应率均为8.1%(3/37)。上述各组阳性率与健康人群之间差异有统计学意义(P<0.05),显示该重组抗原在其他蠕虫检测中存在一定的交叉反应。结论用rSjFBPA和rSjLAP作为抗原的ELISA法诊断血吸虫病具有良好的敏感性和特异性。

关键词：日本血吸虫病免疫诊断亮氨酸氨基肽酶果糖二磷酸醛缩酶

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脂多糖对孤独症大鼠行为学发育的影响及病理机制

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中国康复医学杂志 2022年第9期37卷 1158-1164页

作者：王月段博阳余莉吴德唐久来安徽医科大学第一附属医院儿科安徽省合肥市230022 安徽医科大学第四附属医院安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽高校省级重点实验室

目的:探讨发育早期感染对孤独症症状的影响,建立丙戊酸钠SD大鼠孤独症样模型,分析发育早期脂多糖暴露对其孤独症样行为的影响及病理机制。方法:随机选取9只SD孕鼠中的6只于孕12.5天给予丙戊酸钠600mg/kg腹腔注射建立孤独症模型,另外3只... 详细信息

目的:探讨发育早期感染对孤独症症状的影响,建立丙戊酸钠SD大鼠孤独症样模型,分析发育早期脂多糖暴露对其孤独症样行为的影响及病理机制。方法:随机选取9只SD孕鼠中的6只于孕12.5天给予丙戊酸钠600mg/kg腹腔注射建立孤独症模型,另外3只孕鼠作为对照组,给予生理盐水腹腔注射。模型组孕鼠产仔后,第20天随机挑选一半仔鼠作为丙戊酸钠加脂多糖组,给予脂多糖2mg/kg腹腔注射,另一半生理盐水腹腔注射作为丙戊酸钠组,注射生理盐水的孕鼠的子代为对照组。采用随机数字法在3组中随机选取仔鼠各8只,在生后43天进行旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验和三箱社交实验。生后50天3组仔鼠额叶脑组织进行HE染色和透射电镜病理检测,海马组织进行HE染色。结果:旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验、三箱实验结果显示,丙戊酸钠组较对照组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、关闭臂探索时间少、社交性和社交偏好性降低(P<0.05);丙戊酸钠加脂多糖组较丙戊酸钠组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、社交性和社交偏好性降低(P<0.05)。HE和电镜结果显示,丙戊酸钠加脂多糖组细胞核膜破裂,较丙戊酸钠组细胞结构损伤更为严重。结论:发育早期脂多糖注射会使孤独症大鼠模型孤独症样行为加重,提示感染可能是导致孤独症谱系障碍儿童症状恶化的原因之一,值得临床关注。

关键词：孤独症谱系障碍脂多糖类丙戊酸钠动物行为学

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DAPK2调控I型干扰素启动子的初步研究

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中国动物传染病学报 2023年

作者：孙悦潘利洁孙文泽朱进进庄宝灿沈继龙余莉曹苑苑安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室

为揭示RLR信号通路中激酶对I型干扰素的调控作用，本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控I型干扰素信号通路的激酶：DAPK2；并对其调控特异性，激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明，通过使用不同的荧... 详细信息

为揭示RLR信号通路中激酶对I型干扰素的调控作用，本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控I型干扰素信号通路的激酶：DAPK2；并对其调控特异性，激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明，通过使用不同的荧光素酶启动子以及qRT-PCR试验发现，DAPK2可以特异性地负调控RLR信号通路中I型干扰素的产生，并且主要集中在IRF3介导的通路上，对NF-κB控制的炎症因子无明显调控作用。利用不同阶段的信号蛋白激活IFN-β启动子发现DAPK2的作用位点在VISA和TBK1之间。其激酶活性突变体对RLR通路调控作用的缺失表明DAPK2的调控作用依赖其激酶活性。本研究为DAPK2在未来应用于治疗病毒引起的动物传染病提供了可能的药物靶标及理论指导。

关键词： RLR DAPK2 I型干扰素天然免疫

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弓形虫棒状体蛋白ROP18表位肽抗体的制备与初步应用

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 48-54页

作者：朱进进程正阳余莉安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备... 详细信息

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备抗ROP18血清,通过ELISA鉴定其效价,Western blot鉴定其特异性,并将这两种抗体应用于免疫荧光和免疫共沉淀技术。间接ELISA结果显示两种抗体效价分别为1∶16 000、1∶64 000;Western blot结果显示,两种抗体均能够特异性识别弓形虫速殖子中的内源性天然ROP18蛋白和外源重组ROP18蛋白;免疫荧光检测到ROP18定位于弓形虫速殖子顶端及感染细胞的纳虫泡膜上;免疫共沉淀未能成功下拉目标蛋白。成功获得ROP18的两种表位肽多克隆抗体,效价高且特异性强,并成功应用于免疫荧光定位,为进一步探究ROP18在弓形虫中的功能和作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 ROP18 免疫荧光免疫共沉淀

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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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弓形虫MIC1、MIC6和ROP18混合蛋白对小鼠的免疫保护作用

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 34-41页

作者：李虎朱进进李婧旸韩成建余莉病原生物学安徽省重点实验室安徽省高校人畜共患病重点实验室安徽医科大学基础医学院微生物学与寄生虫学教研室合肥230032 安徽医科大学合肥第三临床学院合肥市第三人民医院检验科合肥230032

为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血... 详细信息

为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血清特异性抗体,以及免疫蛋白刺激后脾细胞培养上清中各细胞因子的水平,通过脾淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞增殖情况。最后一次免疫后,用弓形虫WH3强毒株攻击,观察并记录小鼠的存活情况。结果表明,与对照PBS组相比,蛋白免疫组产生高滴度的IgG和IgG亚型(IgG1和IgG2a)抗体,滴度可高达1∶128000。细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平不同程度地升高,并且重组蛋白能够诱导淋巴细胞特异性增殖。免疫组小鼠的生存时间较对照组有所延长,其中MIC6-ROP18组延长时间最长(P<0.01)。MIC1、MIC6和ROP18组成的重组疫苗能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,其中MIC6-ROP18蛋白组合的免疫保护效果更为明显,但仍需进一步改进。本研究为弓形虫疫苗的研发提供了思路。

关键词：弓形虫疫苗重组蛋白 MIC1 MIC6 ROP18

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低温和短日照诱导白纹伊蚊滞育的代谢适应研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2024年第2期35卷 145-149页

作者：王淼简藓懿刘庆梁国锐谢静文王明姜玉庭赵彤言郭晓霞安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071

目的检测白纹伊蚊滞育期间成蚊及卵内总糖、糖原、总胆固醇、甘油三酯、山梨醇、海藻糖指标含量的变化,为白纹伊蚊的滞育生理学研究提供理论基础。方法在实验室条件下,通过设置短日照和低温诱导白纹伊蚊滞育,取产卵后雌蚊及滞育维持期蚊... 详细信息

目的检测白纹伊蚊滞育期间成蚊及卵内总糖、糖原、总胆固醇、甘油三酯、山梨醇、海藻糖指标含量的变化,为白纹伊蚊的滞育生理学研究提供理论基础。方法在实验室条件下,通过设置短日照和低温诱导白纹伊蚊滞育,取产卵后雌蚊及滞育维持期蚊卵,对总糖、糖原、海藻糖、甘油三酯、总胆固醇、山梨醇等生化物质进行提取,通过酶标仪检测其含量。运用GraphPad 8.0软件对实验数据进行非配对t检验统计分析。结果在滞育诱导条件下,白纹伊蚊成蚊总糖、糖原、海藻糖、山梨醇、甘油三酯、总胆固醇含量分别为(21.60±2.21)、(28.23±0.16)、(6.89±0.28)、(21.71±3.89)、(52.54±4.98)mg/g和(19.08±1.68)μmol/g,总糖、糖原、山梨醇较正常发育组高(均P<0.05)。蚊卵内总糖、糖原、海藻糖、总胆固醇生化指标含量分别为(103.94±8.06)、(8.61±1.54)、(1.35±0.07)mg/g和(13.58±0.28)μmol/g,均高于正常发育组(均P<0.01)。结论白纹伊蚊在滞育诱导条件下,卵内及成蚊体内生化指标发生不同程度的升高。总糖、糖原、海藻糖、总胆固醇等生化指标在蚊虫滞育生理中的作用在接下来的实验中可以进一步研究。

关键词：滞育白纹伊蚊滞育卵代谢

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