检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 432-434,438页

作者：王晓霞牛勃解军杨涛赵建滨山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001

目的研究精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(RGD)肽衍生物——ω-氨基辛酸-甘氨酸-天门冬氨酸-色氨酸(AoG-DW)抗血小板聚集的活性及特异性。方法采用比浊法测定AoGDW肽抑制人血小板聚集的活性,体外细胞脱黏附试验及MTT法检测AoGDW对人脐带静脉... 详细信息

目的研究精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(RGD)肽衍生物——ω-氨基辛酸-甘氨酸-天门冬氨酸-色氨酸(AoG-DW)抗血小板聚集的活性及特异性。方法采用比浊法测定AoGDW肽抑制人血小板聚集的活性,体外细胞脱黏附试验及MTT法检测AoGDW对人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)的脱黏附作用。结果AoGDW和RGDS抑制人血小板聚集的IC50分别为(4.71±2.51)μmol/L和(61.82±8.08)μmol/L,AoGDW使HUVEC产生脱黏附的IC50为(16.50±0.68)mmol/L。结论AoGDW具有高活性的抗血小板聚集作用,并保留了其特异性,有可能避免或减少毒副作用的发生。对于抗血小板药物的临床应用将具有重要的现实意义。

关键词： AoGDW肽血小板聚集活性特异性

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IL-18调控血管平滑肌细胞TNF-α、IL-6、IL-8的表达

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安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1901-1905页

作者：罗欣周宏顾亚男李名聪李昱昊张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的初步探讨白细胞介素(IL)-18调控血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-8表达及其机制。方法以不同浓度的IL-18(3、10、30、100ng/ml)处理VSMC,采取不同时间,通过Real-timePCR分析TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平的表... 详细信息

目的初步探讨白细胞介素(IL)-18调控血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-8表达及其机制。方法以不同浓度的IL-18(3、10、30、100ng/ml)处理VSMC,采取不同时间,通过Real-timePCR分析TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平的表达;ELISA方法分析TNF-α、IL-6、IL-8蛋白水平表达;用特异性抑制剂分别阻断p38和AKT信号通路,通过Westernblot分析这2条信号途径激活情况及对TNF-α、IL-6、IL-8蛋白表达的影响。结果不同浓度的IL-18能促使VSMC中TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平表达升高,表现出剂量依赖效应;IL-18(30ng/ml)以时间依赖的方式增加3种细胞因子的mRNA及蛋白水平表达。Western blot结果显示IL-18能够激活p38和AKT;特异性阻断剂分析显示:IL-18调控TNF-α、IL-6、IL-8的表达部分依赖该2条信号途径的激活。结论IL-18部分依赖p38和AKT信号通路的活化从而促使VSMC中TNF-α、IL-6、IL-83种炎症因子表达增高。

关键词：白细胞介素-18 血管平滑肌细胞细胞因子信号转导途径

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人白介素18(IL-18)RGD模体抗黑色素瘤细胞B16活性研究

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中国生物工程杂志 2006年第2期26卷 13-19页

作者：卢忠民赵宝昌大连医科大学生物化学和分子生物学教研室大连116027

利用定点突变及DNA重组技术,在人白细胞介素18(IL-18)的cDNA序列中插入了GGC序列,使IL-18第39精氨酸残基和第40天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基,从而构建了RGD模体。此重组的cDNA序列构建入表达质粒pPIC9K,并转化Pichia Pastoris酵... 详细信息

利用定点突变及DNA重组技术,在人白细胞介素18(IL-18)的cDNA序列中插入了GGC序列,使IL-18第39精氨酸残基和第40天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基,从而构建了RGD模体。此重组的cDNA序列构建入表达质粒pPIC9K,并转化Pichia Pastoris酵母GS115,利用表达系统进行了高效表达。用Sephadex G-100凝胶过滤纯化表达产物,获得初步纯化的蛋白。研究表明,IL-18在体外对黑色素瘤细胞株B16没有作用,而IL-18-RGD抑制作用明显,IC50=8·10μmol/L;应用小鼠动物模型研究结果显示,IL-18及IL-18-RGD均对黑色素瘤细胞B16有抑制作用,且IL-18-RGD比IL-18的作用强;同时,对鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoicmembrane,CAM)血管生成的抑制实验发现,IL-18-RGD对CAM血管生成的抑制作用也比IL-18强。但IL-18-RGD仍保存对PBMC诱导产生IFN-γ能力。结果提示,IL-18-RGD在具有抗炎,抗感染作用的同时增添了抑制肿瘤血管新的功能。

关键词： IL-18 RGD模体毕赤酵母 B16细胞

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β-CM-7对MCF-7、SKOV_3和SK-N-SH肿瘤细胞增殖和凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2008年第1期43卷 5-9页

作者：周艳秦宜德董华胜顾芳安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的探讨β-酪啡肽-7（β-CM-7）在体外对人乳腺癌细胞（MCF-7）、人卵巢癌细胞（SKOV3）和人神经母细胞瘤细胞（SK—N—SH）增殖和凋亡的影响。方法用MTT测定法观察β-CM-7在体外对MCF-7、SKOV3、SK—N—SH细胞增殖的影响。用流式细胞... 详细信息

目的探讨β-酪啡肽-7（β-CM-7）在体外对人乳腺癌细胞（MCF-7）、人卵巢癌细胞（SKOV3）和人神经母细胞瘤细胞（SK—N—SH）增殖和凋亡的影响。方法用MTT测定法观察β-CM-7在体外对MCF-7、SKOV3、SK—N—SH细胞增殖的影响。用流式细胞仪测定β-CM-7在体外对MCF-7和SKOV3细胞凋亡的影响。结果β-CM-7作用于MCF-7细胞24和48h，对其增殖影响不明显（P〉0．05）。2．5×10^-6 -2．5×10^-2g／L的β-CM-7作用72h，能抑制MCF-7细胞增殖（P〈0．05或P〈0．01），抑制率为17．50％～32．08％。β-CM-7作用MCF-7细胞72h，在2．5×10^-7～2．5×10^-2g／L剂量下，诱导肿瘤细胞的凋亡（P〈0．05或P〈0．01），凋亡率为9．23％～29．41％，而在作用48h后，仅在2．5×10^-3g／L的高浓度下具有诱导肿瘤细胞的凋亡作用，凋亡率为10．12％。β-CM-7作用于SKOV3细胞24～72h，只有在高剂量（2．5×10^-2g／L和／或2．5×10^-3g／L）时，抑制肿瘤细胞增殖（P〈0．05），抑制率为10．50％～19．44％。β-CM-7作用SKOV、细胞48h和72h，在2．5×10^-3～2．5×10^-2g／L高剂量下能诱导肿瘤细胞的凋亡（P〈0．05或P〈0．01），凋亡率为8．72％～17．83％。β-CM-7对SK—N—SH肿瘤细胞增殖影响无显著性（P〉0．05）。结论β-CM-7能够抑制MCF-7和SKOV3细胞增殖，诱导细胞凋亡，作用结果与其剂量和作用时间有关。β-CM-7对SK—N—SH细胞的增殖无明显影响。

关键词：内啡肽类乳腺肿瘤/病理学神经母细胞瘤/病理学细胞凋亡细胞分裂

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胰岛素在小鼠受精卵早期发育中的作用

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中国科学（C辑） 2008年第10期38卷 956-962页

作者：于秉治张哲邓欣徐小燕冯晨李延笑崔城宿文辉赵鸿梅于大海中国医科大学生物化学与分子生物学教研室沈阳110001

大量研究已经证实生长因子和激素在胚胎早期发育的细胞增殖与分化过程中起着重要的作用.应用定量ELISA,RT-PCR,免疫印迹和免疫荧光的方法检测胰岛素在小鼠受精卵和卵母细胞中的表达和定位.发现胰岛素均匀分布在卵细胞的胞浆中.同时也检... 详细信息

大量研究已经证实生长因子和激素在胚胎早期发育的细胞增殖与分化过程中起着重要的作用.应用定量ELISA,RT-PCR,免疫印迹和免疫荧光的方法检测胰岛素在小鼠受精卵和卵母细胞中的表达和定位.发现胰岛素均匀分布在卵细胞的胞浆中.同时也检测到mTOR(mammalian target of rapamycin)和p70S6K的表达、活性和定位.在小鼠受精卵中mTOR和p70S6K的表达没有明显不同.二者在G1,G2和M期分布在细胞浆,在S期聚集在原核的周围.在不同时期,mTOR的活性是波动的.利用PI3K的特异性抑制剂渥曼青霉素,观察到卵裂率明显减低.当使用mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素时,受精卵的第一次有丝分裂延迟.这些结果表明胰岛素存在于小鼠的卵母细胞和受精卵中,并且胰岛素可能通过激活PI3K/PKB/mTOR/S6K的信号传导通路在小鼠的早期胚胎发育中发挥功能作用.

关键词：小鼠胚胎胰岛素 mTOR S6K

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固定金属亲和层析法纯化重组Kringle 5蛋白工艺的建立

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中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 1101-1104页

作者：陈显久解军张悦红牛勃山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001

目的建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础。方法常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法... 详细信息

目的建立固定金属亲和层析法(Immobilized metal affinity chromatography,IMAC)纯化重组Kringle 5蛋白的工艺,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定基础。方法常规制备IMAC蛋白上样样品,分别采用pH梯度洗脱和咪唑梯度洗脱的方法获取Kringle 5蛋白洗脱液,分段收集洗脱样品,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western blot鉴定其反应原性。结果咪唑梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度达98%以上,得率为21.3 mg/柱体积,但不能充分将Kringle 5蛋白与杂蛋白分离;pH梯度洗脱法获得的Kringle 5蛋白纯度在98%以上,得率为62.7 mg/柱体积,且可与杂蛋白充分分离。结论已建立了重组Kringle 5蛋白的纯化方法,为Kringle 5蛋白的制备及生物学活性研究奠定了基础。

关键词： Kringle 5蛋白固定金属亲和层析纯化

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法尼基转移酶抑制剂和香叶基香叶基转移酶抑制剂对皮肤角质形成细胞增殖的抑制作用

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安徽医科大学学报 2020年第2期55卷 155-158页

作者：周宏李名聪顾亚男朱婷婷罗欣张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTI)和香叶基香叶基转移酶抑制剂(GGTI)对皮肤角质形成细胞(KCs)增殖的影响。方法使用不同浓度的FTI、GGTI对KCs进行处理,细胞活力测定实验(MTS)法分析KCs增殖受各处理组的影响;利用流式细胞术检测各加药组... 详细信息

目的探讨法尼基转移酶抑制剂(FTI)和香叶基香叶基转移酶抑制剂(GGTI)对皮肤角质形成细胞(KCs)增殖的影响。方法使用不同浓度的FTI、GGTI对KCs进行处理,细胞活力测定实验(MTS)法分析KCs增殖受各处理组的影响;利用流式细胞术检测各加药组细胞周期受一定浓度FTI、GGTI的影响;Western blot分析各加药组细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE和P21及pAKT和pERK1/2表达量受一定浓度FTI、GGTI的影响。结果MTS显示FTI、GGTI对KCs增殖有抑制作用,并呈浓度依赖性,FTI(5μmol/L)、GGTI(5μmol/L)时KCs细胞活力最小,抑制率分别为14.7%、24.5%。流式周期结果表示FTI、GGTI阻滞KCs在G1、G2、S各期不明显。Western blot结果表明FTI、GGTI均能够下调CyclinB1,并且可以上调P21和CyclinE的表达。同时,FTI、GGTI能促进P13K-AKT信号通路的激活,抑制MAPKS-ERK1/2信号通路的激活。结论FTI、GGTI对原代KCs的增殖有抑制作用。

关键词：甲羟戊酸代谢途径法尼基转移酶抑制剂香叶基香叶基转移酶抑制剂皮肤角质形成细胞细胞增殖

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LSS基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

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安徽医科大学学报 2021年第8期56卷 1335-1338页

作者：李名聪孙晓梅李昱昊周宏罗欣张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因敲除鼠的繁育和基因型分析。将引进杂合子小鼠进行饲养并繁育,提取其基因组DNA,利用PCR反应扩增目的基因片段,鉴定出小鼠的基因型;Western blot分析并比较LSS基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠的肝脏、皮肤组... 详细信息

探讨羊毛固醇合成酶(LSS)基因敲除鼠的繁育和基因型分析。将引进杂合子小鼠进行饲养并繁育,提取其基因组DNA,利用PCR反应扩增目的基因片段,鉴定出小鼠的基因型;Western blot分析并比较LSS基因敲除杂合子小鼠和野生型小鼠的肝脏、皮肤组织中LSS蛋白的表达情况。成功的繁育出LSS基因敲除小鼠,使用PCR鉴定其子代小鼠包括野生型(LSS^(+/+),Wt)、杂合子(LSS^(+/-)),未出现纯合敲除小鼠;Western blot结果表明:相较于野生型小鼠,LSS基因敲除杂合子小鼠在肝组织和皮肤组织中表达LSS蛋白量少;杂合子敲除鼠的生存能力比野生型小鼠弱。获得LSS基因敲除小鼠,PCR鉴定小鼠基因型具有简单、稳定的优点。

关键词： LSS 基因敲除小鼠基因型鉴定聚合酶链式反应体系繁育

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筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白

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安徽医科大学学报 2014年第7期49卷 879-882页

作者：李小勤唐宜桂刘琛雷婷秦宜德安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到*** ... 详细信息

目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到*** BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。

关键词：乳源抗癌六肽 GST pull-down 诱饵蛋白捕获蛋白靶点蛋白

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N-乙酰半胱氨酸体外下调IL-8、IL-6及TNFα在PBMC中的表达

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安徽医科大学学报 2005年第1期40卷 4-6页

作者：张胜权罗欣陈兵徐从贞鲁云霞张在和安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

　目的　研究N 乙酰半胱氨酸(NAC)体外对白细胞介素 8(IL 8)、白细胞介素 6(IL 6 )及肿瘤坏死因子α(TNFα)在外周血单核细胞 (PBMC)中表达的影响。方法　分离新鲜外周血PBMC,以PMA、A23187刺激PBMC,同时加入不同浓度的NAC,通过ELISA、R... 详细信息

　目的　研究N 乙酰半胱氨酸(NAC)体外对白细胞介素 8(IL 8)、白细胞介素 6(IL 6 )及肿瘤坏死因子α(TNFα)在外周血单核细胞 (PBMC)中表达的影响。方法　分离新鲜外周血PBMC,以PMA、A23187刺激PBMC,同时加入不同浓度的NAC,通过ELISA、RT PCR方法分别测定培养上清IL 8、IL 6及TNFα水平及细胞中相应mRNA水平。结果　通过PMA、A23187刺激的PBMC培养上清中的IL 8、IL 6及TNFα水平及细胞中的mRNA水平显著升高(P<0 01)。加入NAC(0、3、10、20mmol/L) 3h细胞中IL 8、IL 6及TNFα的mRNA水平显著降低(P<0 01)。24h后培养上清中IL 8、IL 6及TNFα水平明显低于PMA及A23187刺激的上清(P<0 01);且具有剂量依赖关系 (P<0 01 )。结论　NAC体外可以下调PMA、A23187刺激PBMC表达IL 8、IL 6及TNFα。

关键词：乙酰半胱氨酸白细胞介素6 白细胞介素8 肿瘤坏死因子

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