检索结果-内蒙古大学图书馆

华西口腔医学杂志 2014年第1期32卷 27-31页

作者：王彦梅何家才李全利沈际佳安徽医科大学附属口腔医院颌面外科安徽省口腔临床医学重点学科安徽省口腔疾病研究省级实验室中央与地方共建口腔医学中心实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓... 详细信息

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓基质干细胞(BMSCs)接种至材料上,倒置显微镜及SEM观察细胞生长情况。材料浸提液与BMSCs共培养,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测接种后1、3、5 d的相对增殖率(RGR),并评估毒性分级。新鲜犬血加入材料浸提液进行溶血试验,分光光度计测定光密度值并计算溶血率。结果制备的海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料具有多孔性,孔隙率达(88.6±4.5)%。倒置显微镜及SEM观察可见,细胞在材料周围及表面伸展充分、生长旺盛。材料浸提液培养的细胞具有较好的活力,其毒性分级为1级。溶血试验结果表明复合材料的溶血率为1.28%,满足医用生物材料的要求。结论本研究制备的复合材料具有较高的孔隙率和良好的生物相容性。

关键词：海藻酸钙纳米羟磷灰石复合材料骨髓基质干细胞生物相容性

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应用免疫磁珠分离法纯化弓形虫速殖子的研究

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安徽医科大学学报 2014年第1期49卷 9-13页

作者：楼研沈继龙程维晟刘芳陈鹤罗庆礼王林安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室合肥230601

目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗... 详细信息

目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗原,免疫家兔,获得兔抗弓形虫多克隆IgG抗体。用抗体包被的免疫磁珠对小鼠腹腔液内弓形虫速殖子进行纯化,比较其纯度、回收率、虫体活力、毒力与感染性。结果用免疫磁珠分离技术纯化弓形虫速殖子后,其纯度提高到98.2%,细胞清除率为96%,虫体回收率为73.5%;用内盐法(MTS)细胞增殖与毒性检测试剂盒检测分离后的速殖子活性为95.6%。定量分组感染小鼠后死亡时间无显著性差异。结论免疫磁珠分离的速殖子纯度、细胞清除率和虫体回收率较高,能有效去除宿主细胞,且对速殖子的活性和毒力无影响。该法操作简便快速,无需昂贵的仪器设备,具有较大的实用价值。

关键词：弓形虫速殖子纯化免疫磁珠分离

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徐州猫源弓形虫株基因型及其毒力研究

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1421-1425页

作者：朱长东程维晟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽省庐江县人民医院检验科庐江231500

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico... 详细信息

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico）进行PCR扩增,扩增产物用相应的限制性核酸内切酶水解后观察分析电泳图谱;将分离的虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察其存活时间和存活率,分析毒力强弱。选取弓形虫的毒力相关效应分子ROP16和GRA15,PCR扩增出基因序列,比较其多态性。结果共获得6株猫源弓形虫虫株,基因分型结果显示,两株为Chinese 1型（即Toxo DB#9型）,4株为Toxo DB#205型;此6株弓形虫虫株对BALB/c小鼠和昆明鼠均有较强的毒性,两种小鼠分别在感染后5～7 d和9～12 d均100%死亡。毒力相关基因GRA15和ROP16的分析显示,Chinese 1型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅰ/Ⅲ型,Toxo DB#205型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅱ型。结论徐州地区猫源弓形虫虫株具有有限遗传多态性,且均为强毒的虫株。Toxo DB#205型虫株的主要毒力效应分子ROP16Ⅱ不同于Chinese 1型虫株,这一毒力相关基因的多态性与其毒力的关系尚待深入研究。

关键词：弓形虫基因型毒力 GRA15 ROP16

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弓形虫钙依赖蛋白激酶CDPK3多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 922-926页

作者：李丹韩萌都建安然安徽医科大学基础医学院生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化... 详细信息

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化重组pET-28a-TgCDPK3蛋白。取纯化蛋白用弗氏佐剂乳化后通过皮下多点注射免疫新西兰大白兔,一周后加强免疫,共2次。末次免疫后1周取血,分离血清,通过ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗血清与内源天然TgCDPK3蛋白以及重组表达蛋白TgCDPK3的反应性。同时以该抗血清为一抗采用免疫荧光法进行TgCDPK3蛋白的定位。结果pET-28a-TgCDPK3转化BL21后表达相对分子质量为59×103的His-TgCDPK3蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备的抗血清抗体效价为1∶64000。Western blot检测该抗血清能识别来源于弓形虫ME-49株的TgCDPK3蛋白及外源重组TgCDPK3蛋白。免疫荧光检测显示TgCDPK3定位于弓形虫速殖子膜表面。结论成功制备TgCDPK3多克隆抗体,该抗体效价高且特异性强,可用于相关基础实验,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 TgCDPK3 多克隆抗体免疫荧光

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基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法的建立

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中国生物制品学杂志 2010年第7期23卷 767-769页

作者：方强夏惠陈兴智徐家森王雪梅齐文娟孙新沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准... 详细信息

目的建立基于529bp高度重复序列的弓形虫PCR诊断方法。方法以弓形虫基因组中529bp的高度重复序列为诊断靶基因设计引物,并以其为模板经PCR扩增该基因,与pMD18-T载体连接,构建pMD18/Tox529bp重组质粒,测序鉴定正确后,经稀释标定作为标准品。优化PCR反应体系及条件,并验证该方法的灵敏度及特异性。结果所构建的pMD18/Tox529bp重组质粒经测序正确,建立的PCR方法最低可检出10个拷贝的目的基因,除对弓形虫基因组DNA扩增出特异性条带外,用该方法对健康志愿者全血、正常小鼠全血、间日疟原虫、恶性疟原虫及结核杆菌基因组DNA均未扩增出特异性条带。结论已建立了一种具有较高灵敏度和特异性的弓形虫PCR诊断方法 ,有望应用于人和动物弓形虫感染的筛查、临床诊断及流行病学调查。

关键词：弓形虫病重复序列,核酸聚合酶链反应

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钠离子通道Na_v1.7在大鼠牙髓炎中的表达

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安徽医科大学学报 2013年第8期48卷 873-877页

作者：祝心威蒋勇沈继龙罗庆礼李炯陶然许乐朱凌安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔疾病研究中心实验室合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第四附属医院口腔科合肥230022

目的通过检测大鼠实验性牙髓炎牙髓中电压门控钠离子通道Nav1.7的表达,探讨Nav1.7的表达与牙痛的关系。方法大鼠切牙髓腔暴露,置入脂多糖(LPS)诱导产生牙髓炎。大鼠分为正常对照组和封LPS 1、3、5 d组,HE染色观察各组牙髓组织病理学改... 详细信息

目的通过检测大鼠实验性牙髓炎牙髓中电压门控钠离子通道Nav1.7的表达,探讨Nav1.7的表达与牙痛的关系。方法大鼠切牙髓腔暴露,置入脂多糖(LPS)诱导产生牙髓炎。大鼠分为正常对照组和封LPS 1、3、5 d组,HE染色观察各组牙髓组织病理学改变。通过免疫组化、ELISA和逆转录PCR(RT-PCR)方法检测大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Nav1.7的表达。结果封LPS 1 d组,牙髓中未见明显炎症,而封LPS 3和5 d组牙髓中炎症反应程度逐渐上升。免疫组化结果显示,Nav1.7在所有牙髓中均有表达,封LPS 3和5 d组牙髓中Nav1.7表达量较正常对照组明显增加(P<0.05);ELISA结果与上述结果相似。RT-PCR结果显示,封LPS 3和5 d组牙髓中Nav1.7 mRNA较正常对照组有显著上调(P<0.05)。结论在牙髓炎中,Nav1.7可能以时序控制方式表达明显增多,且与牙髓炎炎症程度相关。鉴于Nav1.7在疼痛中发挥了重要作用,牙髓中Nav1.7的表达可能涉及牙痛的病理生理机制。

关键词：电压门控钠离子通道牙髓炎症 Nav 1 7

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血清IL-6与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值

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安徽医科大学学报 2020年第8期55卷 1265-1270页

作者：董晓玉马晴晴殷俊李家斌郑美娟沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省病原生物学重点实验室、安徽高校人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽医科大学附属巢湖医院检验科巢湖238000 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院感染科合肥230022

目的探讨血清白细胞介素6(IL-6)水平与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值。方法选取患者121例,分为两组:全身炎症反应综合征(SIRS)患者(95例,包括非脓毒症患者19例,脓毒症患者56例,脓毒症休克患者20例)、局部感染组(2... 详细信息

目的探讨血清白细胞介素6(IL-6)水平与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值。方法选取患者121例,分为两组:全身炎症反应综合征(SIRS)患者(95例,包括非脓毒症患者19例,脓毒症患者56例,脓毒症休克患者20例)、局部感染组(26例)以及20例健康者为对照组。检测患者血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平及白细胞(WBC)计数;及外周血中性粒细胞(PBNs)表面簇分化抗原(CD)62L、CD64和CD11b分子及其吞噬功能。结果SIRS组患者血清IL-6和IL-10水平最高(P<0.01),其次为局部感染组和正常对照组(P<0.01)。脓毒症休克组IL-6水平最高(P<0.01),其次为脓毒症组和非脓毒症组(P<0.01)。脓毒症休克组与脓毒症组血清IL-10水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与低IL-6组比较,高IL-6组脓毒症患者血清hsCRP、PCT和IL-10水平亦见增高(P<0.01),PBNs CD11b指数和CD64指数也同时增高(P<0.01),高IL-6组患者中性粒细胞吞噬功能高于低IL-6组(P<0.01)。结论脓毒症患者的血清IL-6水平随着疾病进展而逐渐升高,脓毒症休克患者的血清IL-6水平最高,其次是脓毒症和非脓毒症患者。高IL-6水平脓毒症患者中性粒细胞吞噬作用增强,同时高表达CD64和CD11b。血清IL-6水平与脓毒症的诊断和分期密切相关,动态监测脓毒症患者血清IL-6可为临床诊断及分期、疾病进展提供参考依据,值得在临床推广。

关键词： IL-6 IL-10 CD64 CD11b CD62L 脓毒症

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不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞PEDF表达的影响

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1084-1087页

作者：金程束军娄志霞沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、... 详细信息

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、高糖B组(20 mmol/L葡萄糖)、高糖C组(30 mmol/L葡萄糖),进行A549细胞培养,分别于24、48、96 h后取样:采用半定量RT-PCR法检测不同时间点、含不同浓度葡萄糖组细胞PEDF mRNA水平,用ELISA法检测细胞培养上清液中和胞内PEDF蛋白,比较不同组间PEDF表达水平差异。结果与对照组相比,随着葡萄糖浓度的增加,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈剂量依赖性改变;随着葡萄糖作用时间的延长,除RT-PCR检测中的高糖C组,及ELISA检测中的高糖B组外,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈时间依赖性改变。结论高浓度葡萄糖、较长时间作用可能降低肺腺癌细胞PEDF的表达水平。

关键词：肺腺癌色素上皮衍生因子葡萄糖浓度影响

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基于CRISPR/Cas9技术的弓形虫rop16_(I/III)缺陷虫株的构建及毒力鉴定

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中国人兽共患病学报 2017年第1期33卷 22-26,31页

作者：王聪程维晟刘芳张焰 FaustinaPappoe 罗庆礼闻慧琴邓芳徐元宏沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学附属省立肿瘤医院检验科合肥230001

目的构建并鉴定弓形虫RH株rop16_(I/III)缺陷虫株。方法利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株。运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒。此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段。pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株。PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株。吉姆萨染色分别比较RH株和RHΔrop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵。并比较RH株和RHΔrop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率。结果经测序比对,成功构建了pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒。PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RHΔrop16株有Rop16_(I/III)蛋白表达。吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RHΔrop16虫株。毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16_(I/III)缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10d均全部死亡,两组间无统计学差异。结论利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16_(I/III)缺陷的弓形虫RH虫株,rop16_(I/III)基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响。

关键词：刚地弓形虫 rop16(I/III) CRISPR/Cas9 RH株基因缺陷

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PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2014年第10期49卷 1361-1364页

作者：娄志霞束军金程沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,... 详细信息

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF浓度的增加,PEDF对A549细胞的增殖抑制率递增(P<0.05);相同PEDF浓度(80、160、320、640 nmol/L)情况下,除了80、160 nmol/L PEDF作用24 h和48 h的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF作用时间的延长,PEDF对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P<0.05)。上述不同浓度的PEDF处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF浓度的升高呈递增趋势(P<0.05)。结论 PEDF在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF抑制细胞增殖作用可能和PEDF浓度及作用时间有关,PEDF诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF浓度有一定关系。

关键词：色素上皮衍生因子肺腺癌 A549 细胞增殖细胞凋亡

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