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热带病与寄生虫学 2013年第2期11卷 74-76+126页

作者：余宏刘晓静汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省皖西卫生职业学院

目的寻找新的血吸虫疫苗候选分子,观察日本血吸虫重组跨膜蛋白4(rSj-Ts4)在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法以rSj-Ts4每鼠50μg/100μ1、100μg/100μ1和200μg/100μl分别免疫BALB/c小鼠,同时设生理盐水对照组,用日本血吸虫尾... 详细信息

目的寻找新的血吸虫疫苗候选分子,观察日本血吸虫重组跨膜蛋白4(rSj-Ts4)在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法以rSj-Ts4每鼠50μg/100μ1、100μg/100μ1和200μg/100μl分别免疫BALB/c小鼠,同时设生理盐水对照组,用日本血吸虫尾蚴攻击模型小鼠,计算减虫率、减卵率,观察它们的抗血吸虫感染作用;病例切片观察肝脏组织中肉芽肿的变化。结果用重组Sj-Ts4免疫BALB/c小鼠,第1、第2和第3组诱导的减虫率分别为22.6%、27.1%和30.8%,经t检验各实验组与对照组间差异均无显著性意义(P<0.05)。第1、第2和第3组诱导的肝组织减卵率分别为31.2%、34.29%和35.2%,经t检验各实验组与对照组间差异均无显著性意义(P<0.05)。病理可见重组Sj-Ts4组小鼠肝脏表面较光滑,质地较软,色泽略带暗红色,隐约可见少量灰白色小点,虫卵结节较少;生理盐水组小鼠肝组织中可见大量的虫卵肉芽肿形成,肉芽肿体积较大,周围有大量炎细胞浸润,较多的肝细胞变性坏死。结论结果表明日本血吸虫重组跨膜蛋白4(rSj-Ts4)可能是一种潜在的血吸虫病疫苗候选分子。

关键词：日本血吸虫跨膜蛋白4 免疫学保护性作用

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弓形虫抑制巨噬细胞凋亡的STAT3-miR-17~92-Bim新信号通路

弓形虫抑制巨噬细胞凋亡的STAT3-miR-17~92-Bim新信号通路

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中国动物学会原生动物学分会第十七次学术讨论会

作者：蔡亦红张爱梅李敏闻慧琴陈鹤罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥 230032

弓形虫是广泛寄生于温血动物体内的专性细胞内寄生原虫.原虫在寄生生活演化过程中获得了抑制细胞凋亡的机制,以利自身的细胞内增殖, 同时也导致虫体的全身播散和迁延.宿主蛋白定量分析显示,弓形虫不同感染阶段宿主细胞蛋白表达谱不同,...

弓形虫是广泛寄生于温血动物体内的专性细胞内寄生原虫.原虫在寄生生活演化过程中获得了抑制细胞凋亡的机制,以利自身的细胞内增殖, 同时也导致虫体的全身播散和迁延.宿主蛋白定量分析显示,弓形虫不同感染阶段宿主细胞蛋白表达谱不同,但其机制不明.miRNA具有物种特异性,可以通过特异性结合mRNA,下调蛋白质的翻译.

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弓形虫基因型Chinese 1不同毒力的分离株诱导巨噬细胞偏移应答

弓形虫基因型Chinese 1不同毒力的分离株诱导巨噬细胞偏移应答

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中国动物学会原生动物学分会第十七次学术讨论会

作者：张爱梅李敏闻慧琴陈鹤罗庆礼蔡亦红沈继龙安徽医科大学病原微生物学教研室安徽省病原生物学/人兽共患病重点实验室合肥 230032

刚地弓形虫是一种有核细胞内寄生原虫,可以感染包括人类在内的多种宿主.弓形虫急性感染可诱导强烈的Th1型免疫应答,产生促炎症细胞因子如IL-6,IFN-γ和TNF-α.已知巨噬细胞能够在周围微环境的影响下发生表型的极化,以发挥特定的功能.

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安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究

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安徽医科大学学报 2013年第5期48卷 493-495页

作者：张莹曾宪聪汪小五刘淑均李进王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院输血科合肥230022 安徽省合肥市蜀山区疾病预防控制中心检验科合肥230039 安徽医科大学病原与免疫学实验室合肥230032

目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检... 详细信息

目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。

关键词：卡波氏肉瘤相关疱疹病毒血清阳性率蚌埠安徽

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2010～2012年安徽池州地区TEM、SHV、CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶分布特征*

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国际检验医学杂志 2013年第4期34卷 395-397页

作者：罗飞王细宏罗庆礼安徽省池州市人民医院检验科安徽池州247100 安徽医科大学病原生物学重点实验室安徽合肥230000

目的研究池州地区分离的大肠埃希菌(***)、肺炎克雷伯菌(***)质粒编码的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分子流行病学特征。方法收集2010年9月至2012年4月期间从临床标本中分离的菌株,采用法国生物梅里埃(Bio-Merieus)全自动细菌分析系统鉴定... 详细信息

目的研究池州地区分离的大肠埃希菌(***)、肺炎克雷伯菌(***)质粒编码的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)分子流行病学特征。方法收集2010年9月至2012年4月期间从临床标本中分离的菌株,采用法国生物梅里埃(Bio-Merieus)全自动细菌分析系统鉴定,大肠埃希菌294株,肺炎克雷伯菌178株,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)规定的ESBLs表型筛选和确证试验,确定该地区ESBLs的发生率,并用质粒提取试剂盒提取ESBLs阳性菌株的质粒DNA,通过特异性引物,聚合酶链反应(PCR)及核酸电泳分析上述菌株所携带的耐药基因并进行基因分型。结果该地区17.3%的大肠埃希菌和19.7%肺炎克雷伯菌产ESBLs,其中大肠埃希菌耐药质粒编码TEM型、SHV型和CTX-M型基因的百分率分别为49.0%、37.2%、39.2%,肺炎克雷伯菌分别为48.6%、25.7%、42.8%。结论该地区产ESBLs菌株已经达到一定的比例,并且出现有些菌株同时携带两种或两种以上应的耐药基因,临床上严格控制,合理使用抗菌药物已经刻不容缓。

关键词： β内酰胺酶类基因型抗菌药安徽

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刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 170-173页

作者：陈兴智郭凯陈勇刘丽丽沈继龙焦玉萌方强孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(***)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化... 详细信息

目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(***)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。分别以慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠血清和健康小鼠血清为一抗,用蛋白质印迹(Western blottting)鉴定BSR4重组蛋白的免疫反应性。用3H-TdR掺入法检测慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠脾淋巴细胞对不同浓度BSR4重组蛋白的特异性增殖水平,计算刺激指数(SI)。以BSR4重组蛋白为抗原,用ELISA法检测急性(抗弓形虫IgG-IgM+)和慢性(抗弓形虫IgG+IgM-)弓形虫病患者血清,以及健康人血清,各20份,评判该蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28a(+)-BSR4经IPTG诱导后表达重组蛋白BSR4,经变性、复性和纯化后获得相对分子质量(Mr)45 000的可溶性蛋白。Western blotting分析结果显示,该蛋白能被慢性弓形虫感染小鼠血清识别。脾淋巴细胞增殖试验表明,1、5和25μg/ml重组蛋白BSR4刺激感染弓形虫小鼠脾淋巴细胞的SI分别为1.13、0.88和1.17,显著高于未感染组(分别为0.46、0.24和0.49,均P<0.01)。ELISA检测结果显示,BSR4抗原能被慢性弓形虫病患者血清(IgG+IgM-)特异性识别(20/20),而不能被急性弓形虫病患者血清(IgG-IgM+)识别(0/20)。结论重组BSR4蛋白具有特异的免疫原性和免疫反应性。

关键词：刚地弓形虫缓殖子表面抗原相关蛋白4 重组表达免疫原性免疫反应性

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 374-377页

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10... 详细信息

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00mmol/L,1.00mmol/L SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)、1.00 mmol/L SNP+1.00 mmol/L L-半胱氨酸(L-cyst)、1.00 mmol/L SNP+0.15 mmol/LFeSO4+1.00 mmol/L L-cyst,设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/L SNP+100μl肌幼虫悬液),每组设3个复孔。置37℃5%CO2培养箱中孵育,第4天收集各孔成虫,镜检并作番红染色,计算各组虫体死亡率。结果 SNP 0.02 mmol/L和0.05 mmol/L组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)%和(3.2±1.0)%,这两组与空白对照组的死亡率[(1.9±0.2)%]之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为(9.9±1.8)%、(37.7±2.5)%、(50.1±3.5)%和(80.8±1.1)%,与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。SNP浓度在0.02～1.00 mmol/L范围内与旋毛虫成虫死亡率呈线性正相关(P<0.05)。在1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00 mmol/L实验组比较,成虫死亡率均有所下降,分别为(56.5±3.7)%、(72.7±5.6)%、(74.8±2.4)%和(69.8±2.3)%。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、SNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性NO 旋毛虫成虫

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弓形虫脑炎的神经系统损伤及其病理机制

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中国人兽共患病学报 2012年第12期28卷 1247-1250,1254页

作者：王璐沙泉沈继龙安徽医科大学免疫学教研室安徽省病原生物学重点实验室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发... 详细信息

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发病率明显增加,对免疫机能低下患者造成严重的威胁。弓形虫由包囊内的缓殖子向速殖子转变是导致疾病发生的先决条件,进而速殖子又可以感染神经系统中的不同细胞。这些细胞在对抗弓形虫入侵的同时也会产生各种炎症因子对神经系统造成损伤。因而对弓形虫脑炎的抗炎免疫研究甚为重要。本文主要从神经系统和细胞两个方面探讨弓形虫脑炎的损伤及其机制。

关键词：弓形虫脑炎小神经胶质细胞

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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1273-1277页

作者：祁瑶宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、... 详细信息

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。

关键词： T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子 Th2优势应答血吸虫病

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