检索结果-内蒙古大学图书馆

蚌埠医学院学报 2006年第3期31卷 233-234页

作者：马佳沈继龙黄桦陈素莲陈治文安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室安徽合肥230032 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的... 详细信息

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的早期凋亡率分别为7.18%、21.1%、3.59%,晚期凋亡率分别为2.63%、5.35%、6.34%,总凋亡率分别为9.81%、26.45%、9.93%。结论:B16细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率对As2O3有浓度依赖关系,高浓度的As2O3使B16细胞出现坏死。

关键词：黑素瘤三氧化二砷细胞凋亡细胞株

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血清前白蛋白检测在晚期血吸虫病诊断中的临床意义

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临床输血与检验 2006年第3期8卷 193-194页

作者：罗江龙罗庆礼方静沈继龙安徽省东至县血防专科医院 247230 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室病原生物学教研室

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血... 详细信息

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血清PA水平在不同的血吸虫性肝损害程度的差异均有显著性(P<0.05);而血清ALB水平在血吸虫性肝损害程度级与级间的差异无显著性(P>0.05),而在级与级间的差异有显著性(P<0.05)。结论检测PA较ALB能更灵敏地反映血吸虫性肝损害程度,并对晚血肝损害的早期诊断、病情判断和预后有一定的参考价值。

关键词：前白蛋白白蛋白晚期血吸虫病免疫比浊

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用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 202-205页

作者：袁小松沈继龙汪学龙胡元生罗庆礼安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RN... 详细信息

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转基因在童虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在童虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功扩增出760 bp和276 bp的预期大小的片段,Western blotting证实了EGFP基因在童虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察表明EGFP主要定位在童虫的皮层和副皮层,虫体前端尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫童虫体内并获得表达。

关键词：日本血吸虫电穿孔荧光蛋白基因转基因基因表达

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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 316-318页

作者：钟政荣沈继龙汪学龙胡元生沈继录王家传李小月安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 详细信息

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

关键词：重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体制备鉴定分布作用机制

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重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测

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安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 147-149页

作者：蔡娟都建汪学龙沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽省六安市人民医院检验科六安237005

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,... 详细信息

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。

关键词：弓形虫病/诊断抗体原虫酶联免疫吸附测定

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一个弱毒株弓形虫新基因的发现

一个弱毒株弓形虫新基因的发现

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2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：王家传蒋作君沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

弓形虫是细胞内的寄生原虫,对免疫功能受损者和孕妇造成危害严重,而在免疫功能正常的人群感染后多呈无症状的带虫状态。免疫血清诊断是当前弓形虫感染实验室诊断的主要手段,目前尚无实用的分子疫苗。有关弓形虫强毒RH株的抗原及抗感染... 详细信息

弓形虫是细胞内的寄生原虫,对免疫功能受损者和孕妇造成危害严重,而在免疫功能正常的人群感染后多呈无症状的带虫状态。免疫血清诊断是当前弓形虫感染实验室诊断的主要手段,目前尚无实用的分子疫苗。有关弓形虫强毒RH株的抗原及抗感染免疫机制较多,而事实上,人体和大部分动物感染均为弱毒虫株。为了筛选弱毒株相关抗原,我们用弓形虫成囊株(Prugniaud株)感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原和保护性抗原基因。以成囊株弓形虫包囊

关键词：弓形虫弱毒株 cDNA文库

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日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

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临床输血与检验 2005年第1期7卷 4-7页

作者：胡元生沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的　从日本血吸虫成虫 c DNA中扩增出信号蛋白 Sj1 4-3 -3编码基因 ,并亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1( +) ,旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法　提取日本血吸虫成虫总 RNA,分离m RNA,RT-PCR法制备c DNA,并扩增出 Sj1 4-3 -3编... 详细信息

目的　从日本血吸虫成虫 c DNA中扩增出信号蛋白 Sj1 4-3 -3编码基因 ,并亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1( +) ,旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法　提取日本血吸虫成虫总 RNA,分离m RNA,RT-PCR法制备c DNA,并扩增出 Sj1 4-3 -3编码基因 ,通过线性 TA克隆载体 p GEM-T连接 ,亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1 ( +) ,经转染至 COS-7细胞中表达 ,Western blotting鉴定。结果　RT-PCR产物、p GEM-T-Sj1 4-3 -3及 pc DNA3 .1 ( +) -Sj1 4-3 -3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段 ,经 SDS-PAGE及 Western blotting鉴定后的分子量为 2 9k D。结论　真核表达重组质粒 pc DNA3 .1( +) -Sj1 4-3 -3在 COS-7细胞中的表达产物是一分子量为 2 9k D的蛋白 ,并能被抗 Sj1 4-3

关键词：日本血吸虫 14-3-3信号蛋白真核表达

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一个具有诊断价值的弓形虫基因的发现

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临床输血与检验 2005年第3期7卷 184-186页

作者：王家传蒋作君沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性... 详细信息

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列测定,结果送GenBank进行同源性分析。根据序列测定结果,选取其中1个具有完整开放阅读框架的基因进行分析。结果获得4个持续阳性反应克隆。测序和同源性分析显示,WT1为弓形虫P30基因;WT4为弓形虫N-乙酰磷酸丙糖转移酶基因;WT9与已知的基因无同源性。WT12克隆基因与一未知的弓形虫基因有很高的同源性,且具有1个513bp大小的完整开放阅读框架,其蛋白质结构和功能预测可能是个跨膜信号蛋白。结论筛选得到的1个阳性克隆有望成为早期诊断抗原基因,值得进一步研究。

关键词：弓形虫 cDNA文库免疫学筛选阳性克隆分析

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Sj14-3-3核酸疫苗联合CpG,mIL-12和SjGST抗日本血吸虫感染的保护作用

Sj14-3-3核酸疫苗联合CpG,mIL-12和SjGST抗日本血吸虫感染的保护...

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2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：胡元生沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

目的在证明核酸疫苗Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上,联合使用CpG,mIL-12 和SjGST,观察此二种佐剂和SiGST的免疫效果及其抗血吸虫感染的初步机制。方法分别用①Sj14-3-3 组;②Sj14-3-3+SjGST组;③Sj14-3-3+mIL-12④Sj14-3-3+CpG... 详细信息

目的在证明核酸疫苗Sj14-3-3具有部分抗血吸虫感染的基础上,联合使用CpG,mIL-12 和SjGST,观察此二种佐剂和SiGST的免疫效果及其抗血吸虫感染的初步机制。方法分别用①Sj14-3-3 组;②Sj14-3-3+SjGST组;③Sj14-3-3+mIL-12④Sj14-3-3+CpG免疫小鼠,对照组:肌肉注射等容积的生理盐水。实验组②、③和④同时免疫SjGST、mIL-12和CpG各20μg/次/鼠。末次免疫后6 w周经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴40±1条/鼠。尾蚴攻击感染后6w处死小鼠,行门静脉灌注冲洗收集成虫, 计算减虫率;并计数肝组织虫卵计算减卵率。常规ELISA方法检测血清抗Sj14-3-3特异性IgG、IgG1 和IgG2a抗体水平,用ELISA试剂盒测定小鼠脾细胞培养上清IFN-γ和IL-4的含量。流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+和CD8+T细胞数量,计算CD4+/CD8+T细胞比率。结果配用不同佐剂/SjGST的重组Sj14-3-3核酸疫苗免疫BALB/c小鼠的结果表明:核酸疫苗佐剂/SjGST。mIL-12、SjGST及CpG均能够明显提高疫苗对小鼠抗血吸虫感染的保护性免疫作用,减虫率和减卵率均有所提高,减虫率:Sj14-3-3 组为28.7%,加过免疫佐剂/SjGST后各组的减虫率分别提高到:Sj14-3-3+mIL-12组为41.3%, Sj14-3-3+CpG组为37.1%,Sj14-3-3+SjGST组为39.2%;减卵率从19.9%分别提高到(按以上顺序): 52.6%,41.2%,39.6%;其中以佐剂mIL-12效果最好。Sj14-3-3核酸疫苗加入以上佐剂/SjGST后,均使血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体水平较单独Sj14-3-3核酸疫苗组有明显高。加入SjGST/佐剂组脾细胞培养上清(经不同刺激物:ConA和Sj14-3-3蛋白)的IFN-γ的含量均较单独使用Sj14-3-3核酸疫苗要高,小鼠IL-4的含量变化如下:在ConA刺激下,加SjGST/佐剂组较单独使用Sj14-3-3疫苗组要高, 但在用Sj14-3-3蛋白刺激时,各组变化不明显。流式细胞术检测结果:CD4+加SjGST/佐剂组中除了加入mIL-12组外,余下的均较单独使用Sj14-3-3核酸疫苗组有所升高,CD8+T细胞加SjGST/佐剂组均较单独使用Sj14-3-3核酸疫苗组高,因此,CD4+/CD8+T细胞的比率是加SjGST/佐剂的三组均较单独使用Sj14-3-3疫苗组要低。结论本研究证实SjGST和两种佐剂(mIL-12和CpG)均可以提高核酸疫苗Sj14-3-3对小鼠血吸虫感染的保护性免疫作用,它们主要通过增强体液免疫和/或细胞免疫机制发挥作用。

关键词：血吸虫病 14-3-3蛋白核酸疫苗佐剂谷胱苷肽-S-转移酶保护性免疫

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重组日本血吸虫14-3-3信号蛋白和GST用于急性血吸虫病的诊断

重组日本血吸虫14-3-3信号蛋白和GST用于急性血吸虫病的诊断

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2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：罗庆礼沈继龙卞茂红刘淼余轶婧安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学第一附属医院输血科安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

目的用重组日本血吸虫14-3-3蛋白和GST作为诊断抗原,建立间接ELISA法诊断急性血吸虫病。方法从日本血吸虫成虫cDNA文库中分别扩增出Sj14-3-3和SjGST编码基因,亚克隆至表达载体pET28a(+),诱导表达出rSj14-3-3和SjGST,分别将两种蛋白抗原... 详细信息

目的用重组日本血吸虫14-3-3蛋白和GST作为诊断抗原,建立间接ELISA法诊断急性血吸虫病。方法从日本血吸虫成虫cDNA文库中分别扩增出Sj14-3-3和SjGST编码基因,亚克隆至表达载体pET28a(+),诱导表达出rSj14-3-3和SjGST,分别将两种蛋白抗原纯化,Western blot鉴定。将两种蛋白作为抗原单独和联合应用包被ELISA反应板,通过棋盘滴定确定最适抗原浓度和血清的稀释度, 并对ELISA方法进行优化;然后对粪检血吸虫卵阳性病人血清和正常血清进行多次检测,确定ELISA 的阳性阈值(cut off值);最后用间接ELISA法将重组抗原、成虫粗制抗原分别对26份急性血吸虫病人血清、31份正常人血清、10份肝吸虫病人血清和5份旋毛虫病鼠血清进行检测,同时对这67份人血清和5份兔血清进行环卵沉淀试验(COPT)和间接血凝试验(IHA),比较重组抗原诊断急性血吸虫病的敏感性和特异性,以及交叉反应性,同时比较重组抗原与粗抗原,以及重组抗原间接ELISA法与其他方法的敏感性和特异性以及交叉反应性。结果经Western blot鉴定,rSj14-3-3和rSjGST可分别与抗rSj14-3-3和抗rSjGST单克隆抗体特异性反应。棋盘滴定法确定以0.1μg/孔重组蛋白进行包被,血清按1:10稀释,且根据多次ELISA检测结果得到cut off值为0.04。对以上急性血吸虫病人血清、正常人血清、肝吸虫病人血清和旋毛虫病鼠血清检测,阳性血清的检出率为91.6%,正常血清假阳性为3.1%, 与肝吸虫及旋毛虫血清无交叉反应。与成虫粗抗原对比分析,敏感性和特异性与成虫粗抗原(92%和3%)相一致。间接ELISA法与COPT和IHA两种方法比较,敏感性和特异性均优于后两者。结论建立了重组抗原rSj14-3-3/GST的间接ELISA法诊断急性血吸虫病的方法,为血吸虫病的早期诊断和治疗提供了技术支撑。。

关键词：日本血吸虫 14-3-3蛋白 GST 免疫诊断

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