检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 87-92页

作者：张薇娜张鹏刘淼任翠平黄大可沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学基础医学院综合实验室合肥230032

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分... 详细信息

目的研究日本血吸虫Mago nashi蛋白编码基因在虫体生殖器官发育方面的功能。方法体外PCR法合成Mago nashi双链RNA(dsRNA),将SjMago nashi基因dsRNA产物和阴性对照lacZ基因dsRNA产物分别电击转染至机械脱尾的日本血吸虫童虫体内,将部分电击转染的童虫作体外培养,在培养后第1、3和5天以TRIzol法同时提取其总RNA和总蛋白。实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测Mago nashi基因和蛋白表达产物。电击转染的童虫注射入6只BALB/c小鼠体内,每鼠约1 000条,6周后取出虫体,盐酸卡红染色,在激光共聚焦显微镜下观察虫体内部各器官形态特征,测量虫体相关指标。结果在电击转染后的第1、3和5天,SjMago nashi dsRNA组目的基因的转录水平较阴性对照组分别下降了22%、69%和80%,蛋白质水平较阴性对照组分别下降了12%、39%和56%。激光共聚焦显微镜观察发现,SjMago nashi dsRNA组中的雄虫睾丸内有较多精子,呈泛雄性化表现,而雌虫的卵巢和卵黄腺无明显特征变化。与阴性对照组相比,SjMago nashi dsRNA组的雄虫的体宽、睾丸长和睾丸宽,雌虫的体宽、卵巢长和卵巢宽均明显缩小(P<0.05)。结论 SjMago nashi dsRNA可特异性抑制日本血吸虫靶基因及其编码蛋白的表达,SjMago nashi基因为日本血吸虫生殖相关基因,在生殖系统器官的正常发育中起一定作用。

关键词：日本血吸虫生殖双链RNA RNA干扰 Magonashi基因

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血吸虫及其相关蛋白与自身免疫性疾病(英文)

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中国人兽共患病学报 2015年第1期31卷 57-63页

作者：王书书计永胜沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032 安徽医科大学免疫教研室和病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿内科合肥230001

自身免疫性疾病(ADs)是以特定的靶器官或多个器官系统的慢性损害和功能障碍为特征,临床上缺乏有效的治疗方法,目前发病率逐年升高,严重威胁人类健康。现有数据显示,血吸虫感染或注射血吸虫相关蛋白可能保护或减轻机体免受自身免疫性疾... 详细信息

自身免疫性疾病(ADs)是以特定的靶器官或多个器官系统的慢性损害和功能障碍为特征,临床上缺乏有效的治疗方法,目前发病率逐年升高,严重威胁人类健康。现有数据显示,血吸虫感染或注射血吸虫相关蛋白可能保护或减轻机体免受自身免疫性疾病的损害。研究学者已经建立相应的小鼠自身免疫疾病模型,证实了注射血吸虫蛋白具有诱导宿主Th2免疫偏移,下调Th17反应,并诱导旁路途经活化的巨噬细胞,从而减轻自身免疫性疾病,具有肯定的治疗效果。在这篇综述中,我们总结了血吸虫感染及血吸虫相关蛋白与减轻Th1介导的自身免疫性疾病之间的关系,力争明确其潜在的免疫保护机制。

关键词：自身免疫性疾病血吸虫 Th1Th2应答

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增强型绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫成虫体内的瞬时表达

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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 18-21页

作者：袁小松沈继龙汪学龙董慧芬蒋明森安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 武汉大学医学院病原生物学教研室

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blo... 详细信息

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blot验证转基因在成虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在成虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功的扩增出760bp和276bp的预期大小的片断,Western-blot证实了EGFP基因在成虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察到,EGFP主要定位在成虫的皮层,口吸盘和尾部尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫成虫体内并获得表达,为转基因血吸虫和基因功能的研究打下基础。

关键词：电穿孔技术增强型绿色荧光蛋白转基因血吸虫

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日本血吸虫表位肽-DNA颗粒性疫苗对小鼠免疫应答的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第4期29卷 319-320,F0003页

作者：汪雪峰张荣波胡友莹杜久伟陈晓军徐志鹏苏川安徽理工大学医学院病原生物学教研室淮南232001 南京医科大学病原生物学系江苏省病原生物学重点实验室南京210029

采用已构建的日本血吸虫Si22．6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗（PDDV）及其混合疫苗免疫C57BL／6小鼠。36只小鼠随机均分6组，即18K对照组（[K]18-空质粒PDDV）、PBS对照组、C组（C-PDDV）、T组（T-PDDV）、B组（B-PDDV）和C-... 详细信息

采用已构建的日本血吸虫Si22．6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗（PDDV）及其混合疫苗免疫C57BL／6小鼠。36只小鼠随机均分6组，即18K对照组（[K]18-空质粒PDDV）、PBS对照组、C组（C-PDDV）、T组（T-PDDV）、B组（B-PDDV）和C-T-B组（C-PDDV、T-PDDV和B-PDDV等量混合），每鼠分别在第0、3和6周麻醉下经尾脊部皮下注射100μlPDDV（含10μgDNA和28μg肽），对照组注射等量的空质粒DNA和[K]18肽或PBS。末次免疫后7d，脱颈处死，制备脾细胞悬液，经日本血吸虫成虫抗原（SWA）刺激后根据，^3H标记的胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）检测脾细胞增殖反应，ELISA法检测脾细胞培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）的含量。EUSA结果显示，T组小鼠脾细胞中IFN-γ的含量[（76．0±11．2）ps／ml]，高于PBS[（13．0±2．1）pg／ml]和18K对照组[（14．0±3．2）pg／ml]（P〈0．01），T组和C—T-B组小鼠脾细胞中IL-4的水平分别为（152．0±21．1）和（86．0±12．2）pg／ml，高于其他组（P〈0．01或P〈0．05）。T组小鼠脾细胞经SWA刺激后，增殖反应明显高于PBS和18K对照组（p〈0．01）；而C-T-B组小鼠脾细胞的增殖反应与PBS和18K对照组相比．差异无统计学意义（P〉0．05）。说明T-PDDV和C-T-B混合PDDV诱导的免疫应答强于单价的C-PDDV和B-PDDV。

关键词：日本血吸虫颗粒性肽-DNA混合疫苗小鼠免疫应答

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弓形虫棒状体蛋白ROP18的优化表达

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中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 345-349页

作者：程正阳苏蕊张贤李叶林朱万博余莉安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室安徽合肥230032

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行... 详细信息

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行优化,合成优化后的全长基因(ROP18u)并将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18u重组质粒;以优化后的ROP18u基因为模板,PCR扩增去除N端信号肽和前功能区序列的截短ROP18片段(ROP18uc),将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18uc重组质粒。所有重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc于30℃诱导培养4h-6h,分别检测到分子质量约为88ku和77ku的重组蛋白,该蛋白能被GST单克隆抗体和ROP18多克隆抗体识别。结论成功构建了pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc原核表达载体,密码子优化未能显著提高ROP18重组蛋白的表达量,但提高了可溶性蛋白的含量。

关键词：弓形虫 ROP18 原核表达

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猪囊尾蚴病患者IFN-γ、IL-4的免疫组织化学研究

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中国人兽共患病学报 2007年第8期23卷 792-796页

作者：王雪梅胡守锋孙新沈继龙夏惠方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观... 详细信息

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观察其IFN-γ/IL-4的表达水平。结果45例病变组织中35例有IFN-γ的表达,阳性表达率为77.78%,24例有IL-4的表达,阳性表达率为53.33%,阳性表达多定位于异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆;脑型囊尾蚴病IL-4的阳性表达强度高于皮肌型。结论猪囊尾蚴感染的病变组织中有多种类型炎细胞浸润,以异物巨细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润为主;炎细胞中IFN-γ表达较普遍,同时也有IL-4的表达。

关键词：猪囊尾蚴病 IFN-γ IL-4 免疫组织化学

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日本血吸虫成虫可溶性蛋白和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白抑制小鼠结肠炎的研究（英文）

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第2期37卷 127-136页

作者：武艺李路徐永伟邢瑞欣胡静王书书沈继龙徐元宏陈熙安徽医科大学第一附属医院消化内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法 24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、 Sj SWP... 详细信息

目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法 24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、 Sj SWP治疗组(SjSWP组)。PBS、 rSjcystatin、 SjSWP组用0.1 ml 5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导结肠炎,灌肠后6、 24 h分别腹腔注射100μl PBS、 50μg r Sjcystatin、 50μg SjSWP;健康对照组在相应时间点用等量的PBS灌肠及腹腔注射。TNBS灌肠72 h后无痛处死各组小鼠,检测宏观评分、结肠长度、髓过氧化物酶活性和显微镜下微观评分来评估炎症参数和病理改变。流式细胞仪检测小鼠脾脏中Th1和Th2及T调节细胞(Tregs)的比例。ELISA检测小鼠结肠组织匀浆上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4 (IL-4)、 IL-13、 IL-10等炎性细胞因子的水平。多组计量资料分析采用单因素方差分析,多组均数间的两两比较用Student-Newman-Keuls检验。结果 TNBS诱导的结肠炎小鼠表现出明显的炎症和病理学特征,表现为体质量下降,便血、腹泻、结肠缩短、溃疡,以及炎性细胞因子IFN-γ、炎性细胞浸润和髓过氧化物酶活性的增加。与PBS组相比, rSjcystatin和SjSWP的干预治疗可以显著改善TNBS诱导的结肠炎症,表现为宏观评分(改善结肠糜烂、黏连、溃疡和缩短)和微观评分(减少组织损伤和炎症)的降低。健康对照组、 PBS组、 rSjcystatin组和SjSWP组小鼠结肠的宏观评分分别为0、 9.8±0.8、 4.3±1.0和4.5±1.4,微观评分分别为0、 6.0±0.4、 2.2±0.5和2.8±0.6,rSjcystatin组、 SjSWP组与PBS组相比差异均有统计学意义(F=57.8、 34.1, P <0.01), rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P> 0.05)。健康对照组、 PBS组、 rSjcystatin组和SjSWP组髓过氧化物酶分别为0.3±0.0、 1.4±0.1、 0.6±0.1和0.6±0.1 (F=32.5, P <0.01);脾脏Tregs比例分别为(4.4±0.7)%、(8.2±3.1)%、(18.4±2.1)%和(13.4±1.9)%(F=8.3, P <0.01);结肠组织匀浆上清中IFN-γ、 IL-10水平分别为(952.0±61.1)、(1 684.6±158.3)、(1 092.0±81.9)、(1 001.6±111.2) pg/ml,(322.8±27.4)、(399.3±77.9)、(860.6±153.6)、(892.0±113.8) pg/ml (F=9.6、 8.3, P <0.05);与PBS组相比, rSjcystatin与SjSWP组的INF-γ、髓过氧化物酶活性明显减低, Tregs应答增强, IL-10分泌增多,差异均有统计学意义(P <0.01), rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论 SjSWP及rSjcystatin均可通过上调小鼠Treg和Th2介导的免疫应答,减轻小鼠实验性结肠炎,抑制导致结肠炎发病的Th1免疫应答。

关键词：日本血吸虫可溶性成虫蛋白半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结肠炎免疫调节

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芍药苷通过IL-13信号通路抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化

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安徽医科大学学报 2011年第4期46卷 314-320页

作者：杜明占沈继龙吴强胡向阳储德勇安徽医科大学病理学教研室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸... 详细信息

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸虫病肝纤维化的作用机制。方法 BALB/c小鼠感染血吸虫尾蚴12 d开始,药物组每天灌胃给予PAE[0.2 ml,60 mg/(kg.d)×30 d],正常和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,并于感染后第42天起所有各组灌胃给予吡喹酮[500 mg/(kg.d)×2 d]以杀虫。在感染后第8、12周末,分别处死小鼠,取血及肝脏,分别用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量;碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸(HYP)含量;苏木精-伊红(HE)和Masson胶原纤维染色法观察肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度;免疫组化染色观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、IL-13、STAT6、IL-13Rα1的表达情况;RT-PCR检测Col–Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达情况。结果感染后第8、12周时,模型组小鼠血清HA水平和肝脏HYP水平显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏虫卵肉芽肿面积和纤维化程度显著高于药物组(P<0.01);肝脏α-SMA阳性细胞的表达强度显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏IL-13表达水平显著高于药物组(P<0.01);肝脏Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA水平显著高于正常组和药物组(P<0.01)。感染后第8周时模型组小鼠STAT6、IL-13Rα1表达水平显著高于药物组(P<0.01)。结论 PAE可能通过抑制IL-13信号转导通路而抑制日本血吸虫病肝纤维化。

关键词：芍药苷血吸虫日本肝硬化白细胞介素13

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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

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中国人兽共患病杂志 2004年第10期20卷 847-850页

作者：查任远沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj1... 详细信息

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性。

关键词：日本血吸虫病免疫诊断重组sj14-3-3 单克隆抗体

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淮河干流浮游动物群落结构特征

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湖泊科学 2015年第5期27卷 932-940页

作者：吴利李源玲陈延松合肥师范学院生命科学学院合肥230061 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学) 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230022

2011年3、6、9和12月对淮河干流11个采样点的浮游动物群落结构进行调查研究,共检出浮游动物79属206种,其中原生动物27属69种,占浮游动物总物种数的33.5%;轮虫35属104种,占50.5%;枝角类12属27种,占13.1%;桡足类5属6种,占2.9%.总体上看,... 详细信息

2011年3、6、9和12月对淮河干流11个采样点的浮游动物群落结构进行调查研究,共检出浮游动物79属206种,其中原生动物27属69种,占浮游动物总物种数的33.5%;轮虫35属104种,占50.5%;枝角类12属27种,占13.1%;桡足类5属6种,占2.9%.总体上看,从上游至下游,浮游动物物种数呈现逐渐减少的趋势.浮游动物的丰度和生物量分别为3527447 ind./L和2452 mg/L,轮虫和原生动物丰度是淮河干流浮游动物丰度的主体,轮虫生物量是淮河干流浮游动物生物量的主体,浮游动物及各类群丰度和生物量均表现为从上游到中游逐渐增高的趋势,而从中游到下游呈现逐渐降低的趋势.上游浮游动物多样性指数和均匀度指数高于中、下游.结果表明:淮河干流上游水质为轻污染,中、下游水质为中污染或重污染.浮游动物群落结构和环境因子的冗余分析表明,水温、溶解氧和流速是与淮河干流浮游动物群落结构相关性较强的环境因子.

关键词：浮游动物群落结构水质淮河干流

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