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乙型肝炎病毒外膜大蛋白、DNA、前S1抗原检测用于评价乙型肝炎病毒复制状况的对比分析

中华预防医学杂志 2017年第6期51卷 501-505页

作者：夏芳徐元宏郑美娟汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省马鞍山市含山县人民医院检验科合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的对比分析乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）、乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）和前S1抗原（Pre S1-Ag）评价慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中乙型肝炎病毒复制状况的有效性.方法收集2013年6月至2015年3月在合肥某医院就诊的482例CHB患... 详细信息

目的对比分析乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）、乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）和前S1抗原（Pre S1-Ag）评价慢性乙型肝炎（CHB）患者血清中乙型肝炎病毒复制状况的有效性.方法收集2013年6月至2015年3月在合肥某医院就诊的482例CHB患者的血清标本,采用ELISA法检测HBV-LP、乙型肝炎病毒标志物（HBV-M）和Pre S1-Ag;实时荧光定量PCR检测HBV-DNA.比较HBV-DNA、HBV-LP、Pre S1-Ag阳性率的差异,采用Spearman秩相关分析HBV-DNA拷贝数的对数值和HBV-LP的吸光度值相关性.结果 482例CHB患者HBV-DNA、HBV-LP和Pre S1-Ag阳性率分别为67.22%（324/482）、73.86%（356/482）和37.34%（180/482）（P〈0.01）;339例HBeAg阴性CHB患者的3项指标阳性率分别为54.57%（185/339）、64.90%（220/339）和27.73%（94/339）（P〈0.01）.在HBeAg阴性患者中,185例为HBV-DNA阳性,HBV-LP阳性率为90.81%（168/185）,高于Pre S1-Ag[39.46%（73/185）]（P〈0.01）;154例患者HBV-DNA阴性,其HBV-LP阳性率为33.77%（52/154）,也高于Pre S1-Ag的13.64%（21/154）（P〈0.01）.HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性患者HBV-DNA、HBV-LP、Pre S1-Ag阳性率分别为97.04%（131/135）、94.81%（128/135）和60.00%（81/135）（P〈0.01）;HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性患者3项指标阳性率分别为53.74%（122/227）、63.88%（145/227）和27.31%（62/227）（P〈0.01）;HBsAg、HBcAb阳性患者3项指标的阳性率分别为55.79%（53/95）、67.37%（64/95）和28.42%（27/95）（P〈0.01）.HBV-LP的吸光度值随着HBV-DNA拷贝数的对数值增加而呈上升趋势（Spearman秩相关系数=0.908,P〈0.01）.结论 HBV-LP与HBV-DNA载量对数值之间的相关性良好,可作为HBV-DNA和HBV-M检测的有效补充,较Pre S1-Ag更能反映CHB患者的病毒复制状态.

关键词：肝炎病毒乙型 DNA 肝炎,乙型,慢性大蛋白前S1抗原

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二甲双胍丁酸盐对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡与迁移能力的影响

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安徽医科大学学报 2018年第2期53卷 171-175页

作者：陈晴晴束军谢庆书沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响。方法用梯度浓度(0、0.5、1、2、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用MTT法检测MFB对A549细胞增... 详细信息

目的研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响。方法用梯度浓度(0、0.5、1、2、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用MTT法检测MFB对A549细胞增殖的抑制率;干预24、48 h后用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率。用划痕实验分析MFB对A549细胞株迁移能力的影响。结果 MTT实验表明,MFB对A549细胞的增殖具有抑制作用,并且在一定浓度范围内呈现出浓度和时间依赖性(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示:实验组细胞凋亡率大于对照组(P<0.05),具有一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。划痕实验结果显示实验组细胞迁移率小于对照组,高浓度用药组细胞迁移率小于低浓度用药组(P<0.05),且药物作用48 h后细胞迁移率<24 h(P<0.05)。结论 MFB在体外能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,其强度可能与其浓度和作用时间有关。

关键词：二甲双胍丁酸盐肺腺癌增殖凋亡迁移

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丙戊酸钠对肺腺癌细胞的增殖、迁移能力的影响

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安徽医科大学学报 2020年第5期55卷 702-706页

作者：代丽丽束军朱宁张梅沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度丙戊酸钠(VPA)对肺腺癌PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养PC9细胞,实验分为对照组(无VPA处理组)和实验组(VPA处理组,浓度分别为2、4、8、16 mmol/L),检测不同浓度VPA在不同作用时间条件下对PC9... 详细信息

目的探讨不同浓度丙戊酸钠(VPA)对肺腺癌PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养PC9细胞,实验分为对照组(无VPA处理组)和实验组(VPA处理组,浓度分别为2、4、8、16 mmol/L),检测不同浓度VPA在不同作用时间条件下对PC9细胞增殖、迁移能力的影响分别使用CCK-8、划痕实验;检测不同浓度VPA对乳酸脱氢酶(LDH)活性、乳酸(LD)生成量的影响分别使用(LDH)活性检测试剂盒、LD定量试剂盒,检测VPA干预PC9细胞后上清液及细胞内的E-钙黏蛋白(E-cad)及波形蛋白(VIM)的表达水平用ELISA法。结果CCK-8结果表明,VPA可以抑制PC9细胞的增殖,并且呈现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞迁移距离小于对照组(P<0.05),划痕宽度比对照组窄。VPA浓度越高,迁移距离越短(P<0.05),划痕宽度越窄。LDH活性和LD检测结果表明,实验组LDH活性和LD生成量较对照组显著降低(P<0.05),随着VPA浓度的增加,LDH活性和LD生成量逐渐降低(P<0.05)。ELISA结果显示,实验组细胞内外E-cad蛋白浓度与对照组相比均显著增高,并且随着VPA浓度增加,E-cad浓度逐渐增高(P<0.05);实验组细胞内外VIM蛋白浓度与对照组相比均显著降低,并且随着VPA浓度增加,VIM蛋白浓度逐渐降低(P<0.05)。结论VPA在体外能够抑制PC9细胞的增殖、迁移,且有可能是通过抑制有氧糖酵解和上皮间质转化途径。

关键词：丙戊酸钠肺腺癌增殖迁移

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3-溴丙酮酸对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1174-1178页

作者：张梅束军朱宁沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A54... 详细信息

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A549细胞内的HK2活性;ELISA检测试剂盒检测不同浓度3-BrPA对A549细胞培养上清液中和细胞内MMP-9、Vimentin表达水平的影响。结果划痕实验和Transwell结果显示,3-BrPA干预组的A549细胞迁移距离、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.05);HK2活性结果显示,3-BrPA干预组A549细胞内HK2活性明显低于阴性对照组(P<0.05);ELISA实验结果显示,3-BrPA干预组MMP-9、Vimentin表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论 3-BrPA能显著抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,能显著抑制肿瘤转移相关蛋白MMP-9和Vimentin的表达水平。

关键词： 3-溴丙酮酸肺腺癌迁移侵袭

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TXNIP和CEA联合检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

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安徽医科大学学报 2015年第3期50卷 341-344页

作者：袁杰清束军王丹平沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNI... 详细信息

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNIP浓度明显低于良性胸腔积液中的含量;良恶性胸腔积液患者的血清中TXNIP浓度水平差异无统计学意义。TXNIP浓度89.57μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度76%,特异度87.5%,符合率86.96%;CEA浓度5.285μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度88%,特异度90.6%,符合率91.23%。联合试验,并联诊断的灵敏度为97.12%,特异度为79.28%;串联诊断灵敏度为66.88%,特异度98.83%。结论 TXNIP对恶性胸腔积液的诊断具有一定价值,与CEA联合检测可以提高诊断灵敏度与特异度。但是TXNIP对恶性胸腔积液的诊断价值并不优于CEA。

关键词：硫氧还蛋白结合蛋白癌胚抗原胸腔积液诊断

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不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞PEDF表达的影响

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1084-1087页

作者：金程束军娄志霞沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、... 详细信息

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、高糖B组(20 mmol/L葡萄糖)、高糖C组(30 mmol/L葡萄糖),进行A549细胞培养,分别于24、48、96 h后取样:采用半定量RT-PCR法检测不同时间点、含不同浓度葡萄糖组细胞PEDF mRNA水平,用ELISA法检测细胞培养上清液中和胞内PEDF蛋白,比较不同组间PEDF表达水平差异。结果与对照组相比,随着葡萄糖浓度的增加,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈剂量依赖性改变;随着葡萄糖作用时间的延长,除RT-PCR检测中的高糖C组,及ELISA检测中的高糖B组外,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈时间依赖性改变。结论高浓度葡萄糖、较长时间作用可能降低肺腺癌细胞PEDF的表达水平。

关键词：肺腺癌色素上皮衍生因子葡萄糖浓度影响

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日本血吸虫Mago nashi基因的表达及其抗体的制备

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中国地方病学杂志 2008年第2期27卷 158-161页

作者：赵志荣雷黎沈际佳安徽省马鞍山市疾病预防控制中心防疫科 243000 安徽医科大学病原生物学教研室

目的获得日本血吸虫Mago nashi（sjMago）基因的原核表达蛋白并制备多克隆抗体。方法以童虫cDNA文库为模板，PCR方法扩增该基因，将其亚克隆人原核表达载体pET28a（＋）中，IFrG诱导表达重组蛋白，用含重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免... 详细信息

目的获得日本血吸虫Mago nashi（sjMago）基因的原核表达蛋白并制备多克隆抗体。方法以童虫cDNA文库为模板，PCR方法扩增该基因，将其亚克隆人原核表达载体pET28a（＋）中，IFrG诱导表达重组蛋白，用含重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔，制备该蛋白的多克隆抗体，分别用Western blot和ELISA法鉴定抗体的特异性和效价。结果成功重组SjMago基因的原核表达质粒，经IPTG诱导表达相对分子质量约17×10^3的目的蛋白，免疫家兔获得多克隆抗体，用间接ELISA法检测多克隆抗体的效价为1：40960，Westernblot证实有特异性目的蛋白条带存在。结论成功获得了原核表达的SjMago基因，制备出特异性的多克隆抗体，为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：血吸虫,日本基因表达克隆抗体

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PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2014年第10期49卷 1361-1364页

作者：娄志霞束军金程沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,... 详细信息

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF浓度的增加,PEDF对A549细胞的增殖抑制率递增(P<0.05);相同PEDF浓度(80、160、320、640 nmol/L)情况下,除了80、160 nmol/L PEDF作用24 h和48 h的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF作用时间的延长,PEDF对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P<0.05)。上述不同浓度的PEDF处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF浓度的升高呈递增趋势(P<0.05)。结论 PEDF在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF抑制细胞增殖作用可能和PEDF浓度及作用时间有关,PEDF诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF浓度有一定关系。

关键词：色素上皮衍生因子肺腺癌 A549 细胞增殖细胞凋亡

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miRNA-16对肺腺癌A549细胞增殖和VEGF-A表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2016年第4期51卷 489-492页

作者：徐胜束军李晓峰程宇沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRN... 详细信息

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRNA-16的表达水平,MTT法检测转染miRNA-16后细胞的增殖抑制情况,ELISA法检测转染miRNA-16后细胞VEGF-A表达水平。结果转染培养24h后,测得转染组miRNA-16表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞VEGF-A表达水平较阴性对照组和空白对照组明显降低(P<0.05)。结论 miRNA-16能引起细胞增殖抑制,并且可能与下调VEGF-A的表达有关。

关键词：肺腺癌 VEGF-A miRNA-16 细胞增殖

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敏感性PCR检测猪肉弓形虫方法的建立与应用

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中国人兽共患病学报 2010年第10期26卷 895-899页

作者：余莉朱新伊胡元生张俊玲罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学第三附属医院检验科合肥230031

目的建立一种敏感快速的猪肉弓形虫PCR检测方法,并用来检测市售猪肉弓形虫的感染情况。方法采用不同数量的弓形虫模拟感染猪肉样本,分别以529 bp重复序列、B1基因、SAG1、SAG2、SAG3作为目标检测基因,对其敏感性进行评价,在此基础上运... 详细信息

目的建立一种敏感快速的猪肉弓形虫PCR检测方法,并用来检测市售猪肉弓形虫的感染情况。方法采用不同数量的弓形虫模拟感染猪肉样本,分别以529 bp重复序列、B1基因、SAG1、SAG2、SAG3作为目标检测基因,对其敏感性进行评价,在此基础上运用敏感的靶标检测100份市售猪肉样本中弓形虫的感染情况。结果 529 bp重复序列的敏感性最高,用此靶标检测合肥市售猪肉,弓形虫阳性率为17%。结论 529 bp重复序列基因是一个可用于肉制品中弓形虫PCR检测的理想靶标。

关键词：弓形虫 PCR 猪肉

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