检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2021年第10期56卷 1590-1594页

作者：杨旭晗杨菲沈际佳刘淼安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。... 详细信息

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。体外培养28 d雌雄合抱的成虫,应用siRNA对早老素进行干扰,10 d后,观察早老素被敲降后对血吸虫产卵量,雌雄合抱及生殖系统的影响。结果荧光定量PCR结果显示,早老素在24 d雌虫表达量明显上调,同时证实该基因在卵巢组织高表达。当早老素被敲降后,雌雄合抱率和雌虫的产卵量也有明显下降。激光共聚焦结果显示相对于对照组和Mock组,RNA干扰组的生殖细胞减少,生殖系统形态出现异常。结论早老素在日本血吸虫生殖发育和产卵中起重要调控作用。

关键词：日本血吸虫早老素 RNA干扰生殖

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刚地弓形虫致密颗粒蛋白24多克隆抗体的制备与初步应用

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 279-285页

作者：付胜男杨云王聪罗庆礼余莉安徽医科大学基础医学院微生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽... 详细信息

目的制备并鉴定鼠抗刚地弓形虫致密颗粒蛋白24(dense granule protein 24,GRA24)多克隆抗体,并探索其初步应用。方法利用MEGA-X软件比对弓形虫不同虫株GRA24编码区序列,使用Protean软件分析GRA24蛋白优势肽段,通过PCR反应扩增编码该肽段的碱基序列,并连接至p ET-28a载体中。将获得的GRA24截短蛋白原核表达质粒转化于大肠埃希菌BL21感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测蛋白表达与纯化。使用纯化的GRA24截短蛋白皮下注射免疫BALB/c小鼠获得GRA24截短蛋白多克隆抗体,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体效价,采用Western blotting检测抗体特异性,并将该抗体应用于免疫荧光试验(immunofluorescence assay,IFA)。结果SDS-PAGE结果表明成功构建重组质粒,考马斯亮蓝染色结果显示获得高纯度重组GRA24截短蛋白。ELISA结果显示,GRA24截短蛋白多克隆抗体效价在1∶208400以上;Western blotting检测发现,该抗体可识别弓形虫不同虫株内源性GRA24蛋白,特异性识别重组GRA24截短蛋白;间接IFA检测发现,弓形虫入侵宿主细胞16 h后分泌的GRA24蛋白定位于宿主细胞核中。结论成功制备广适性、高效价、强特异性的抗弓形虫GRA24多克隆抗体,可应用于Western blotting与IFA,为进一步研究GRA24功能奠定了基础。

关键词：刚地弓形虫致密颗粒蛋白24 多克隆抗体免疫荧光

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IgY-和IgG-ELISA用于日本血吸虫病循环抗原检测的效果比较

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中华预防医学杂志 2011年第9期45卷 859-860页

作者：周银娣温和汪六庆沈继龙合肥市第一人民医院检验科安徽省230032 徐州医学院病原生物学教研室安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄... 详细信息

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中去的，且是蛋黄中惟一存在的抗体，和哺乳动物的IgG相比，IgY具有高特异、高灵敏度，

关键词： IgG-ELISA 循环抗原检测日本血吸虫病卵黄免疫球蛋白特异度交叉反应抗原免疫哺乳动物

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刚地弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子基因敲除虫株的构建与鉴定

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第3期40卷 349-354页

作者：王杰温红阳陈滢安然罗庆礼沈继龙都建安徽医科大学基础医学院生化与分子生物学教研室合肥230032 人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032 安徽医科大学基础医学院感染性疾病研究中心合肥230032 病原生物学安徽省重点实验室合肥230032

目的构建并鉴定刚地弓形虫RH株巨噬细胞迁移抑制因子(Tgmif)基因敲除虫株。方法设计刚地弓形虫RH株Tgmif的单向导RNA(sgRNA)和点突变引物,将pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒定点突变为针对Tgmif基因的pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒。构建含... 详细信息

目的构建并鉴定刚地弓形虫RH株巨噬细胞迁移抑制因子(Tgmif)基因敲除虫株。方法设计刚地弓形虫RH株Tgmif的单向导RNA(sgRNA)和点突变引物,将pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒定点突变为针对Tgmif基因的pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒。构建含有Tgmif上游1001 bp(Tgmif-up)、二氢叶酸还原酶-胸苷酸合成酶基因(dhfr-ts)和Tgmif下游1011 bp(Tgmif-down)等3个片段的Tgmif供体质粒,从Tgmif供体质粒PCR扩增获得Tgmif供体DNA。将pSAG1::Cas9-U6::sg Tgmif质粒和Tgmif供体DNA混合后电击转染野生型刚地弓形虫RH株(RH_(WT))速殖子,用乙胺嘧啶培养7 d,筛选获得稳定表达乙胺嘧啶抗性的虫株并进行单克隆筛选,PCR扩增dhfr-ts上、下游同源臂和Tgmif鉴定Tgmif基因敲除单克隆株(RH_(ΔTgmif))。提取RH_(ΔTgmif)和RH_(WT)株虫体蛋白,蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析TgMIF蛋白的表达情况。RH_(ΔTgmif)在人包皮成纤维(HFF)细胞中传代10代,吉氏染色,镜检计数100个HFF中速殖子数,评估RH_(ΔTgmif)在体外培养HFF细胞中的增殖能力,以RH_(WT)为对照。将20只BABL/c小鼠随机分为RH_(WT)组和RH_(ΔTgmif)组(10只/组),各组分别腹腔注射RH_(WT)或RH_(ΔTgmif)株速殖子(1000个/鼠),记录小鼠生存情况。弓形虫增殖能力的比较采用独立样本t检验,小鼠生存率的比较采用Log Rank检验。结果PCR检测结果显示,含Tgmif-up、dhfr-ts和Tgmif-down等3个片段的Tgmif供体DNA片段长5049 bp,与预期相符;RH_(ΔTgmif)株分别扩增出1387、1524 bp的dhfr-ts上、下游同源臂条带,RH_(WT)株无相应条带;RH_(WT)株扩增出1837 bp的Tgmif条带,RH_(ΔTgmif)株无相应条带。Western blotting分析结果显示,RH_(WT)株在相对分子质量(M_(r))12500处出现1条蛋白条带,RH_(ΔTgmif)株无相应的蛋白条带。吉氏染色镜检结果显示,100个HFF中RH_(ΔTgmif)株速殖子为(2986±69.20)个,高于RH_(WT)株的(2067±51.08)个(t=18.50,P<0.01)。体内毒力试验结果显示,RH_(WT)组小鼠在第7天出现死亡,在第9天全部死亡;RH_(ΔTgmif)组小鼠在第5天出现死亡,第7天全部死亡,两组之间的差异有统计学意义(χ^(2)=17.45,P<0.01)。结论成功构建Tgmif基因敲除弓形虫虫株RH_(ΔTgmif),RH_(ΔTgmif)株的毒力比RH_(WT)株强。

关键词：刚地弓形虫巨噬细胞迁移抑制因子基因敲除

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我国弓形虫Chinese1优势虫株感染小鼠后不同组织生物金属元素留存测定

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中国动物传染病学报 2022年

作者：王艳玲蔡亦红安徽医科大学公共卫生学院卫生检验与检疫安徽医科大学病原生物学安徽省重点实验室安徽医科大学人畜共患病安徽高校省级重点实验室

通过观察中国流行的弓形虫Chinese1优势基因型强毒株Wh3、弱毒株Wh6感染小鼠后，体内不同组织中多种微量元素的留存情况，探讨弓形虫感染与宿主生物金属元素的相互关系及对机体代谢的影响。分别建立弓形虫Chinese1优势基因型强毒株Wh3... 详细信息

通过观察中国流行的弓形虫Chinese1优势基因型强毒株Wh3、弱毒株Wh6感染小鼠后，体内不同组织中多种微量元素的留存情况，探讨弓形虫感染与宿主生物金属元素的相互关系及对机体代谢的影响。分别建立弓形虫Chinese1优势基因型强毒株Wh3和弱毒株Wh6小鼠感染模型，运用电感耦合等离子体质谱仪（ICP-MS）测定感染小鼠不同组织内的生物金属元素水平。与对照组相比，实验组各组之间微量元素均出现改变，且Wh3和Wh6组之间的改变均不相同。弓形虫入侵能打破机体微量元素稳态，影响机体生物代谢功能。

关键词：弓形虫微量元素 Chinese 1基因型 ICP-MS

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结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第1期39卷 75-80页

作者：汪欣然马文潇孙菀蔚宁星语黄蓉蓉刘淼安徽医科大学第二临床医学院安徽医科大学第一临床医学院安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表... 详细信息

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白,以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体,分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-30a-Rv2628重组载体,IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达,Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性,且抗体效价达1∶1093500。结论成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌休眠生存调节子 Rv2628 多克隆抗体

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高良姜素对于肺腺癌细胞增殖、迁移能力的影响

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安徽医科大学学报 2021年第8期56卷 1212-1217页

作者：汪新束军代丽丽沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的探讨不同浓度高良姜素(Ga)对于人肺腺癌A549、PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养肺腺癌A549、PC9细胞,并分为对照组(DMSO溶剂对照组、0药对照组)和实验组(Ga浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L)。使用CCK-... 详细信息

目的探讨不同浓度高良姜素(Ga)对于人肺腺癌A549、PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养肺腺癌A549、PC9细胞,并分为对照组(DMSO溶剂对照组、0药对照组)和实验组(Ga浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L)。使用CCK-8实验和细胞划痕实验分别检测各组肺腺癌细胞的增殖和迁移能力;生化检测各组细胞乳酸(LD)生成量、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及ATP生成量;ELISA法检测各组细胞上清液中的E-钙黏蛋白(E-cad)和N-钙黏蛋白(E-cad)的蛋白表达水平。统计分析上述各指标的组间差异。结果CCK-8实验表明,Ga作用于肺腺癌细胞后,细胞出现一定的增殖抑制现象。细胞划痕实验表明,Ga作用于肺腺癌细胞后,细胞出现一定的迁移抑制现象。生化检测实验表明,Ga作用于肺腺癌细胞后,LD生成量、LDH活性及ATP生成量均出现降低现象。ELISA法表明,Ga作用于肺腺癌细胞后,实验组细胞上清液中E-cad蛋白表达量高于对照组,而N-cad蛋白表达量低于对照组。结论Ga在体外实验中可以抑制肺腺癌A549、PC9细胞的增殖、迁移能力,并且有可能系通过抑制糖酵解及上皮间质转化(EMT)途径实现。

关键词：高良姜素肺腺癌增殖迁移

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苯噻啶对人肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响

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安徽医科大学学报 2022年第8期57卷 1294-1299,1304页

作者：郑江霞束军汪新杨彩梅沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230011 病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的观察不同浓度苯噻啶(Pizotifen)对人肺腺癌A549和PC9细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其机制。方法取对数生长期的A549和PC9细胞,分为对照组(细胞对照组为培养基直接作用于细胞,溶剂对照组为含有0.1%DMSO的培养基作用于细... 详细信息

目的观察不同浓度苯噻啶(Pizotifen)对人肺腺癌A549和PC9细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,并初步探究其机制。方法取对数生长期的A549和PC9细胞,分为对照组(细胞对照组为培养基直接作用于细胞,溶剂对照组为含有0.1%DMSO的培养基作用于细胞)和实验组(浓度分别为10、20、30、40μmol/L的苯噻啶作用于细胞)。CCK-8法检测人肺腺癌细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell迁移实验检测其迁移能力,Transwell侵袭实验检测其侵袭能力,ELISA法检测Wnt3a/β-catenin信号通路蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果与溶剂对照组相比:CCK-8结果显示,实验组A549和PC9细胞活力降低,出现不同程度的增殖抑制现象,在20、30、40μmol/L浓度组有一定的时间依赖性(P<0.05);划痕实验结果表明,实验组划痕愈合率小于对照组,苯噻啶浓度越高,划痕愈合率越低(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组穿过小室的肺腺癌细胞数量明显低于对照组,具有浓度依赖性(P<0.05);ELISA结果显示,实验组细胞中Wnt3a、β-catenin、MMP-9蛋白浓度与对照组相比均显著降低,并且随着苯噻啶浓度增加,Wnt3a、β-catenin、MMP-9蛋白浓度逐渐降低(P<0.05);实验组细胞中E-cad蛋白浓度与对照组相比显著增高,并且随着苯噻啶浓度增加,E-cad浓度逐渐增高(P<0.05)。结论在体外细胞实验中,苯噻啶对人肺腺癌A549、PC9细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有抑制作用,抑制作用的强弱依赖于苯噻啶的浓度和作用时间。其作用机制,可能包括Wnt3a/β-catenin-EMT通路的阻断。

关键词：苯噻啶人肺腺癌信号通路上皮-间质转化

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铁冬青酸对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

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安徽医科大学学报 2022年第11期57卷 1782-1789页

作者：杨彩梅束军郑江霞沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230011 病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的观察铁冬青酸(RA)对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制。方法以人肺腺癌A549和PC9细胞作为研究对象,分为细胞对照组、空白对照组、溶剂组和20、40、60、80μmol/L铁冬青酸实验组。使用CCK-8实验和划痕实验... 详细信息

目的观察铁冬青酸(RA)对人肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其机制。方法以人肺腺癌A549和PC9细胞作为研究对象,分为细胞对照组、空白对照组、溶剂组和20、40、60、80μmol/L铁冬青酸实验组。使用CCK-8实验和划痕实验分别检测人肺腺癌细胞的增殖能力和水平迁移能力;用Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验分别检测各组A549和PC9细胞的纵向迁移能力和侵袭能力;用ELISA检测各组细胞上清液中酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)和转录激活蛋白3(STAT3)的蛋白表达量,用RT-PCR法检测各组细胞中JAK2和STAT3的mRNA表达水平。分析上述各指标的组间差异。结果RA作用于肺腺癌细胞后,与对照组相比,实验组人肺腺癌A549和PC9细胞活力下降(P<0.05),肺腺癌细胞的迁移面积减少(P<0.05),穿过聚碳酸酯膜和基质胶的细胞数量均减少(P<0.05),细胞上清液中JAK2和STAT3蛋白表达量降低(P<0.05),JAK2和STAT3的mRNA表达水平降低(P<0.05),且上述指标的降低呈浓度依赖性,组间差异有统计学意义(P<0.05);对照组与溶剂组人肺腺癌A549和PC9细胞活力组间差异无统计学意义。结论RA在体外实验中对于人肺腺癌A549和PC9细胞的增殖、迁移和侵袭能力具有抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;其作用机制可能与细胞JAK2/STAT3通路的负向调控有关。

关键词：铁冬青酸人肺腺癌细胞增殖迁移侵袭酪氨酸蛋白激酶2 转录激活蛋白3

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GRA15_(Ⅱ)在小鼠肿瘤微环境中促进巨噬细胞极化抗肝癌

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 36-47页

作者：余焱霞张远王艳玲蔡亦红安徽医科大学公共卫生学院卫生检验与检疫合肥230032 安徽医科大学病原生物学安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PC... 详细信息

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)与肿瘤的转归密切相关,探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子(GRA15_(Ⅱ))在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞(Mφ)极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠,注射LV-gra15_(Ⅱ)重组慢病毒后,采用实时荧光定量PCR、酶联免疫法、免疫组化、流式细胞术和共聚焦显微镜分析肿瘤微环境中的免疫应答情况。结果显示,GRA15_(Ⅱ)可在体外诱导M2样Mφ向M1表型偏移。而且,在荷瘤小鼠注射LV-gra15_(Ⅱ)后,肿瘤体积明显减小,进一步分析发现,在肿瘤微环境中GRA15_(Ⅱ)主要通过TRAF6途径激活NF-κB,诱导TAM从M2向M1偏移,且NO、IL-12、TNF-α的表达上调,发挥Th1免疫应答。GRA15_(Ⅱ)能够抑制肿瘤生长,此研究为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略,为开发新的药物提供实验室基础。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白肝细胞癌巨噬细胞极化

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