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中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 73-78页

作者：庄宝灿朱进进余莉安徽医科大学病原生物学教研室、病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗... 详细信息

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度,ELISA测定抗体效价,Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性,免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示,ELISA测定抗体效价为1∶128000,Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin,免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明,成功制备了TgActin多肽表位抗体,可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测,为后续弓形虫研究提供了便利条件。

关键词：弓形虫肌动蛋白表位抗体内参抗体免疫荧光

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弓形虫致密颗粒蛋白GRA35多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2024年第2期19卷 162-165,171页

作者：韩萌李丹都建安然安徽医科大学生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人兽共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备兔多抗弓形虫致密颗粒蛋白GRA35抗体,并对其进行初步的鉴定和应用。方法利用GRA35重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗GRA35抗体。采用ELISA检测抗体效价,采用Western Blot鉴定抗体的特异性,并将获得的多克隆抗体应用于免疫荧光技术。... 详细信息

目的制备兔多抗弓形虫致密颗粒蛋白GRA35抗体,并对其进行初步的鉴定和应用。方法利用GRA35重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗GRA35抗体。采用ELISA检测抗体效价,采用Western Blot鉴定抗体的特异性,并将获得的多克隆抗体应用于免疫荧光技术。结果获得的抗体效价在1∶32000之上;经重组的外源性致密颗粒蛋白GRA35和弓形虫速殖子中的内源性致密颗粒蛋白GRA35能够被制备的多克隆抗体特异性识别;弓形虫入侵细胞时形成的纳虫泡膜与弓形虫致密颗粒蛋白GRA35共定位。结论成功获得具有较高效价和较强特异性的弓形虫致密颗粒蛋白GRA35的兔多克隆抗体,为弓形虫致密颗粒蛋白GRA35在弓形虫入侵宿主细胞时发挥的作用的进一步研究创造了条件。

关键词：弓形虫 GRA35 多克隆抗体免疫荧光

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赖氨酰氧化酶样蛋白1在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达

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安徽医科大学学报 2023年第3期58卷 386-391页

作者：戴冰心龚澧杨旭晗沈际佳刘淼安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的观察赖氨酰氧化酶(LOX)家族中的赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)及相关胶原蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达,探讨其在日本血吸虫肝纤维化形成中的作用。方法采用日本血吸虫感染的小鼠肝纤维化模型,于感染后第6、9、12周剖杀小... 详细信息

目的观察赖氨酰氧化酶(LOX)家族中的赖氨酰氧化酶样蛋白1(LOXL1)及相关胶原蛋白在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达,探讨其在日本血吸虫肝纤维化形成中的作用。方法采用日本血吸虫感染的小鼠肝纤维化模型,于感染后第6、9、12周剖杀小鼠,收集其血清和肝脏标本;以HE和天狼星红两种染色方法分别观察并评价小鼠肝脏纤维化的进展程度;同时检测小鼠血清转氨酶水平。以免疫印迹(Western blot)和荧光定量PCR(qPCR)方法分别检测肝组织LOXL1、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)及α-肌动蛋白(α-SMA)的表达并分析其含量的变化;并对血清中的可溶性和不可溶性胶原进行测定,以判断胶原交联情况。结果HE和天狼星红染色结果显示,随感染时间延长,小鼠肝纤维化也随之进展,在感染第9周肝纤维化程度最为严重,随后进入慢性肝纤维化期,纤维化程度减轻。Western blot和qPCR结果显示,LOXL1和其他纤维化指标表达情况类似,均在感染第9周时表达量明显上调;可溶性胶原含量在感染第9周时达峰值后下降,而不可溶性胶原含量则持续上升。结论LOXL1与血吸虫肝脏纤维化过程中纤维交联存在相关关系,可能在肝纤维化进程中起到促进作用。

关键词：日本血吸虫赖氨酰氧化酶样蛋白1 肝纤维化胶原交联

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城市与山村青少年肠道菌群及其代谢组学差异的研究

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安徽医科大学学报 2023年第11期58卷 1952-1956页

作者：沈续航苏时雨关静沈继龙陈熙安徽医科大学第一附属医院消化内科合肥230022 病原生物学安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的调查城市与山村青少年肠道菌群及代谢产物的差异,探究不同生活环境和行为方式的青少年肠道微生态及其对健康的意义,旨在指导青少年建立更为科学健康的生活饮食方式。方法收集合肥市中学生粪便标本(n=14)和绩溪县山村中学生粪便标本(... 详细信息

目的调查城市与山村青少年肠道菌群及代谢产物的差异,探究不同生活环境和行为方式的青少年肠道微生态及其对健康的意义,旨在指导青少年建立更为科学健康的生活饮食方式。方法收集合肥市中学生粪便标本(n=14)和绩溪县山村中学生粪便标本(n=18),两组学生年龄均在13.0~13.5岁。对粪便样本进行16S核糖体DNA鉴定(16S rDNA)、非靶向代谢产物检测(LC-MS),然后进行生物信息学分析。结果城乡两地青少年肠道菌群差异显著,城市学生以Lachnoclostridium菌、粪厌氧棒状杆菌(Anaerostipes)菌属占优势,这些细菌占比增高与肠癌、动脉粥样硬化以及抑郁症等疾病有关;而在山村青少年,优势细菌是瘤胃球菌属(Ruminococcaceae UCG-002)、巴恩斯菌属(Barnesiella)和真杆菌属(Eubacterium)等,这些细菌与胆汁酸、短链脂肪酸、脂质代谢、碳水化合物分解等代谢相关,对维持免疫平衡和生理功能发挥重要作用。两组代谢产物也存在显著的差异,主要表现在花生四烯酸代谢、血小板激活、5-羟色胺代谢、维生素吸收、初级胆汁酸代谢等通路上。结论城市和山村青少年肠道菌群和代谢产物具有显著差异;山村青少年因生活饮食方式更合理而拥有更健康的肠道菌群分布和代谢产物。

关键词：城乡人群青少年肠道菌群 16S rDNA LC-MS 代谢组学

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DAPK2调控I型干扰素启动子的初步研究

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中国动物传染病学报 2023年

作者：孙悦潘利洁孙文泽朱进进庄宝灿沈继龙余莉曹苑苑安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室

为揭示RLR信号通路中激酶对I型干扰素的调控作用，本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控I型干扰素信号通路的激酶：DAPK2；并对其调控特异性，激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明，通过使用不同的荧... 详细信息

为揭示RLR信号通路中激酶对I型干扰素的调控作用，本研究利用双荧光素酶报告系统及qRT-PCR实验鉴定出一个可以负调控I型干扰素信号通路的激酶：DAPK2；并对其调控特异性，激酶活性以及调控位置进行了探索。结果表明，通过使用不同的荧光素酶启动子以及qRT-PCR试验发现，DAPK2可以特异性地负调控RLR信号通路中I型干扰素的产生，并且主要集中在IRF3介导的通路上，对NF-κB控制的炎症因子无明显调控作用。利用不同阶段的信号蛋白激活IFN-β启动子发现DAPK2的作用位点在VISA和TBK1之间。其激酶活性突变体对RLR通路调控作用的缺失表明DAPK2的调控作用依赖其激酶活性。本研究为DAPK2在未来应用于治疗病毒引起的动物传染病提供了可能的药物靶标及理论指导。

关键词： RLR DAPK2 I型干扰素天然免疫

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弓形虫棒状体蛋白ROP18表位肽抗体的制备与初步应用

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 48-54页

作者：朱进进程正阳余莉安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备... 详细信息

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备抗ROP18血清,通过ELISA鉴定其效价,Western blot鉴定其特异性,并将这两种抗体应用于免疫荧光和免疫共沉淀技术。间接ELISA结果显示两种抗体效价分别为1∶16 000、1∶64 000;Western blot结果显示,两种抗体均能够特异性识别弓形虫速殖子中的内源性天然ROP18蛋白和外源重组ROP18蛋白;免疫荧光检测到ROP18定位于弓形虫速殖子顶端及感染细胞的纳虫泡膜上;免疫共沉淀未能成功下拉目标蛋白。成功获得ROP18的两种表位肽多克隆抗体,效价高且特异性强,并成功应用于免疫荧光定位,为进一步探究ROP18在弓形虫中的功能和作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 ROP18 免疫荧光免疫共沉淀

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黄山市乡村中老年人群无症状钩虫感染对肠道菌群和代谢的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 17-26页

作者：汪业彬沈续航邓国强胡赛敏汪飞张玲玲沈继龙黄山市疾病预防控制中心安徽黄山245700 安徽医科大学第一附属医院消化内科合肥230022 祁门县疾病预防控制中心安徽祁门245600 黄山区疾病预防控制中心安徽黄山245700 安徽省病原生物学重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的揭示轻度无症状钩虫感染对中老年人群肠道菌群与代谢的影响,为蠕虫-肠道菌群相互作用的研究提供参考。方法以2022年10月—11月安徽省黄山市祁门县、黄山区乡村土源性线虫病监测点居民检出钩虫感染者(改良加藤厚涂片法钩虫虫卵阳性)... 详细信息

目的揭示轻度无症状钩虫感染对中老年人群肠道菌群与代谢的影响,为蠕虫-肠道菌群相互作用的研究提供参考。方法以2022年10月—11月安徽省黄山市祁门县、黄山区乡村土源性线虫病监测点居民检出钩虫感染者(改良加藤厚涂片法钩虫虫卵阳性)为感染组,以钩虫虫卵阴性者为对照组。采集受检者新鲜粪样,提取肠道菌群DNA,扩增16S rRNA基因并测序。计算基于丰度的覆盖估计值(ACE)、PD-wholetree、Chao指数和Shannon指数等多样性指数,采用主坐标分析(PCoA)和不加权算术平均对方法(UPGMA)层次聚类分析的β多样性分析,比较感染组和对照组肠道菌群分布的差异,通过指示值分析筛选两组的指示性菌群。用甲醇-水萃取粪样中的代谢物,进行气相色谱-质谱(GC-MS)和液相色谱-质谱(LC-MS)双平台非靶向测序的代谢组学分析,用正交偏最小二乘方判别分析(OPLS-DA)建立筛选感染组与对照组差异代谢物的模型,制作火山图。根据P值、变量权重值和差异倍数筛选差异代谢产物。通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库检索差异代谢物的相关代谢通路,对差异代谢物进行富集分析。两个代谢物之间的线性相关程度采用Pearson相关分析。结果研究对象共22人,其中感染组11人,对照组11人。感染组平均年龄72.2岁,均为轻度无症状带虫者;对照组平均年龄53.1岁。测序共获得1755649条16S rRNA序列,经序列质控和拼接后聚类为1245条扩增序列变体。共鉴定出15个门22个纲58个目94个科191个属389个菌种。多样性指数分析结果显示,感染组肠道菌群多样性的ACE、PD-wholetree、Chao和Shannon指数分别为188.768、16.533、192.667和5.195,对照组分别为167.829、15.294、157.371和4.898,两组间差异均无统计学意义(t=1.266、0.952、1.266、0.962,均P>0.05)。PcoA分析结果显示,感染组与对照组的肠道菌群有不同程度的重叠,但仍可分为两个不同的类群。UPGMA层次聚类分析结果显示,感染组和对照组均先在本组中聚类,再与另一组聚类,两组间仅有1例重叠。多元变量统计分析显示,感染组的优势菌群有7个,分别为普雷沃菌、普氏粪杆菌、变栖克雷伯菌、Parasutteralla、粪球菌、梭菌UCG-014和肠杆菌;对照组的优势菌仅1种,为普通拟杆菌。指示值分析结果显示,感染组指示值居前的菌群依次是普雷沃菌、克雷伯菌、拟杆菌、小杆菌、肠杆菌、粪球菌、UCG-002、粪杆菌;对照组则依次为变形菌门的CladeⅠa和CladeⅢ、布劳特菌、另枝菌、Lachnoclostridium、嗜胆菌和苏黎世杆菌。建立的OPLS-DA模型能有效区分感染组和对照组的粪样代谢物,共鉴定出400个有差异粪样代谢物,其中156个显著上升,244个显著下降。KEGG富集分析结果显示,差异粪样代谢物显著富集在蛋白质的消化与吸收(P=0.000)、中心碳代谢(P=0.000)、矿物质吸收(P=0.000)、氨酰基-tRNA合成(P=0.000)、神经活性的配体-受体相互作用(P=0.003)等代谢通路上。粪样代谢物中delta 2-三己胺与(22E)-3β-羟基-5α-胆甾-7,22-二烯酸(r=0.935,P<0.01)等15对代谢物呈正相关关系,棕榈酰溶血磷脂酰乙醇胺与氨基戊酸甜菜碱(r=-0.500,P<0.05)等9对代谢物呈负相关关系。结论安徽省黄山市乡村中老年人群无症状钩虫感染可影响肠道菌群的组成和代谢,有利于营造有益菌的共生和定植环境。

关键词：肠道蠕虫肠道菌群 16S rRNA 代谢组学

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结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第1期39卷 75-80页

作者：汪欣然马文潇孙菀蔚宁星语黄蓉蓉刘淼安徽医科大学第二临床医学院安徽医科大学第一临床医学院安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表... 详细信息

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白,以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体,分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-30a-Rv2628重组载体,IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达,Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性,且抗体效价达1∶1093500。结论成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌休眠生存调节子 Rv2628 多克隆抗体

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雌蚊如何选择最佳雄配?

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 321-328页

作者：李奕彤李东刘晓菲王英刘婷婷徐艳秋邓胜群安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室、动物源性传染病安徽省重点实验室、人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032 陆军军医大学军事预防医学系热带医学教研室重庆400038 安徽医科大学第二附属医院内分泌科安徽合肥230601

全球80%以上的人口面临病媒传播疾病风险,其中蚊媒传染病是全球核心公共卫生问题之一。阻止蚊媒传染病传播的关键是控制蚊虫。本文从蚊虫体型、嗅觉、视觉、触觉和听觉等方面阐述雌蚊的择偶偏好,探究雌蚊选择最佳雄配的机制,为蚊媒传染... 详细信息

全球80%以上的人口面临病媒传播疾病风险,其中蚊媒传染病是全球核心公共卫生问题之一。阻止蚊媒传染病传播的关键是控制蚊虫。本文从蚊虫体型、嗅觉、视觉、触觉和听觉等方面阐述雌蚊的择偶偏好,探究雌蚊选择最佳雄配的机制,为蚊媒传染病的控制提供新思路。

关键词：蚊虫性选择交配系统蚊媒传染病

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弓形虫钙依赖蛋白激酶CDPK3多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 922-926页

作者：李丹韩萌都建安然安徽医科大学基础医学院生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化... 详细信息

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化重组pET-28a-TgCDPK3蛋白。取纯化蛋白用弗氏佐剂乳化后通过皮下多点注射免疫新西兰大白兔,一周后加强免疫,共2次。末次免疫后1周取血,分离血清,通过ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗血清与内源天然TgCDPK3蛋白以及重组表达蛋白TgCDPK3的反应性。同时以该抗血清为一抗采用免疫荧光法进行TgCDPK3蛋白的定位。结果pET-28a-TgCDPK3转化BL21后表达相对分子质量为59×103的His-TgCDPK3蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备的抗血清抗体效价为1∶64000。Western blot检测该抗血清能识别来源于弓形虫ME-49株的TgCDPK3蛋白及外源重组TgCDPK3蛋白。免疫荧光检测显示TgCDPK3定位于弓形虫速殖子膜表面。结论成功制备TgCDPK3多克隆抗体,该抗体效价高且特异性强,可用于相关基础实验,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 TgCDPK3 多克隆抗体免疫荧光

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