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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十二次全国学术会议暨第三次国际寄生虫学学术研讨会

作者：闻慧琴沈继龙安徽医科大学安徽病原生物学省级实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室

目的探讨日本血吸虫病小鼠在感染及吡喹酮杀虫的不同时期,给予芍药苷对小鼠肝组织虫卵肉芽肿和纤维化是否均有影响。方法实验BALB/C小鼠随机分为三大组:杀虫前给予芍药苷组(Ⅰ)、杀虫同时给予芍药苷组(Ⅱ)及杀虫后给予芍药苷组(Ⅲ)。每...

目的探讨日本血吸虫病小鼠在感染及吡喹酮杀虫的不同时期,给予芍药苷对小鼠肝组织虫卵肉芽肿和纤维化是否均有影响。方法实验BALB/C小鼠随机分为三大组:杀虫前给予芍药苷组(Ⅰ)、杀虫同时给予芍药苷组(Ⅱ)及杀虫后给予芍药苷组(Ⅲ)。每大组又分为三小组:治疗组、对照组和正常组。除正常小鼠,以日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠,构建日本血吸

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FasL反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1300-1303页

作者：方丽陈乔尔任翠平沈际佳安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔临床医学重点学科安徽省口腔疾病研究省级实验室中央与地方共建口腔医学中心实验室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞。荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑... 详细信息

目的探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞。荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ASO在转染后不同时间对Tca8113细胞增殖的影响;FCM测定转染前后诱导Tca8113细胞的凋亡情况。结果通过荧光倒置显微镜观察及FCM检测发现在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO的浓度越高,转染效率越高。MTT结果显示ASO对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05)。结论 FasL ASO对Tca8113细胞的增殖有一定的抑制作用,能够促进其凋亡,因此FasL ASO有望成为舌鳞癌的潜在的基因治疗方法。

关键词： Fas Fas配体反义寡核苷酸技术舌鳞癌细胞

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日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

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安徽医科大学学报 2007年第1期42卷 1-4页

作者：王志成徐元宏汪学龙李敏罗飞郑美娟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室和安徽省重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译... 详细信息

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。

关键词：血吸虫日本血吸虫病/诊断寄生虫虫卵计数

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MtbAg体外激活扩增的人γδT细胞表面L-选择素的动态变化

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蚌埠医学院学报 2005年第3期30卷 192-194页

作者：武文娟沈继龙李柏青安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233003 安徽医科大学免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的:研究结核杆菌抗原(MtbAg)激活扩增的人外周血γδT细胞表面L 选择素(CD6 2L)的表达。方法:用MtbAg和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC)促使γδT细胞增殖,用CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2刺激人PBMC促使αβT细胞增殖。取新鲜PBM... 详细信息

目的:研究结核杆菌抗原(MtbAg)激活扩增的人外周血γδT细胞表面L 选择素(CD6 2L)的表达。方法:用MtbAg和rIL-2刺激人外周血单个核细胞(PBMC)促使γδT细胞增殖,用CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2刺激人PBMC促使αβT细胞增殖。取新鲜PBMC和刺激后培养3～2 1天的γδT细胞和αβT细胞,用多色荧光抗体标记,在流式细胞仪上检测γδT细胞表面CD6.2L的表达,并与αβT细胞作比较。结果:新鲜未刺激PBMC中γδT细胞CD6 2L表达率为4 3.9% ,明显低于αβT细胞的76 .6 % ;用MtbAg或CD3Ab激活后培养第6天时CD6 2L在γδT细胞的表达(90 .7% )和在αβT细胞表达(87.2 % )均达到高峰;以后CD6 2L表达逐渐下降,15～2 1天γδT细胞CD6 2L的表达在低水平(16 .2 %～10 .6 % )维持,αβT细胞表面的CD6 2L表达(2 3.6 %～17.5 % )亦在低水平维持。结论:新鲜PBMC中γδT细胞CD6 2L表达明显低于αβT细胞,但在激活后增殖过程中CD6 2L在γδT细胞的表达,与αβT细胞相似,呈现先上升再下降的趋势。

关键词：结核杆菌 γδ-细胞 L-选择素流式细胞术

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弓形虫抑制Wnt/β-catenin通路干扰C17.2神经干细胞的分化

弓形虫抑制Wnt/β-catenin通路干扰C17.2神经干细胞的分化

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室

目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影响及其机制。方法:在优化神经干细胞... 详细信息

目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影响及其机制。方法:在优化神经干细胞系C17.2分化条件的基础上,用不同剂量的弓形虫ESAs和/或Wnt通路激活剂Wnt3a予以干预,在诱导分化后5d,检测神经干细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)、神经元的特异性标记物βⅢ微管蛋白(βⅢ-tubulin)及神经胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,以及Wnt通路中相关蛋白β-catenin、Ngn1和Ngn2的表达水平。结果:C17.2细胞在诱导分化后5d,免疫荧光检测结果显示ESAs干预组βⅢ-tubulin和GFAP的荧光信号较诱导分化组明显减弱。经不同剂量ESAs干预培养5 d,C17.2细胞内βⅢ-tubulin和GFAP的相对表达量均较诱导分化组明显下降,且呈剂量依赖性。ESAs和Wnt3a联合干预组的核内β-catenin相对表达水平明显低于Wnt3a预处理组而明显高于ESAs干预组。Wnt信号通路下游的靶基因Neurogenin(Ngn)1和2的表达量在Wnt3a和ESAs联合干预组也明显低于Wnt3a预处理组。结论:弓形虫可通过ESAs抑制C17.2神经干细胞分化,且抑制水平呈现剂量依赖性;弓形虫ESAs可显著降低Wnt/β-catenin通路中的关键分子β-catenin的表达水平,以及下游靶基因Ngn1和Ngn2的表达,推测其可能通过此信号通路干预C17.2神经干细胞分化。

关键词：弓形虫神经干细胞分化

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弓形虫效应分子GRA15Ⅱ诱导巨噬细胞极化抗小鼠肝癌的研究

弓形虫效应分子GRA15Ⅱ诱导巨噬细胞极化抗小鼠肝癌的研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：李源玲蔡亦红 Faustina Poppoe 沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学公共卫生学院检验教研室

目的:探讨弓形虫效应分子GRA15诱导的caMφ逆转小鼠肝癌微环境中的TAMs从M2向M1极化,抑制肿瘤增殖、侵袭及转移,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路和新策略。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株中提取总RNA,扩增多态性GRA15编码基因,构建重组质粒pegfp-... 详细信息

目的:探讨弓形虫效应分子GRA15诱导的caMφ逆转小鼠肝癌微环境中的TAMs从M2向M1极化,抑制肿瘤增殖、侵袭及转移,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路和新策略。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株中提取总RNA,扩增多态性GRA15编码基因,构建重组质粒pegfp-gra15Ⅱ。体外将质粒亚克隆入慢病毒载体并感染小鼠细胞系RAW264.7,使之诱导为ca Mφ。体外分别将Lv-gra15Ⅱ-Mφ（A组）,空白病毒载体Lv-Mφ（B组）和未感染Mφ（C组）与小鼠肝癌细胞系Hepa1-6进行transwell共培养,观察上述三组Hepa1-6的增殖、迁移和侵袭能力,以及MMP-9和MMP-2表达。体内实验,取75只SPF级4-5w龄雌性C57/BL6小鼠,右腹股沟皮下成瘤。3d后随机分为3组,每组25只。A组为在皮下注射成瘤后3d、5d分别尾静脉给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-gra15Ⅱ-Mφ;B组给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-Mφ;C组给予150μl生理盐水。在皮下注射成瘤10d后无痛处死小鼠。剥离肿瘤组织,观察实体瘤体积;免疫组化检测肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）浸润和免疫抑制因子及血管生成相关因子的表达;瘤体q RT-PCR检测iN OS、TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达;ELISA检测IL-6水平的变化。结果:***15可驱动RAW264.7向ca Mφ方向极化。FCM、细胞培养上清和q RT-PCR检测均显示Lv-gra15Ⅱ-Mφ相比于Lv-Mφ和Mφ,其PD-L1,CD80,NO、TNF-α,IL-12p40和iN OS有显著升高（P<0.05）。2.体外共培养实验显示,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6迁移、侵袭,可下调其外基质相关蛋白的分泌,而对Hepa1-6凋亡无影响。q RT-PCR和蛋白水平检测均显示A组与B组和C组比较,MMP-9、MMP-2表达显著下调（P<0.05）。3.体内试验TAMs检测结果,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可减轻TAMs浸润,并且使其向M1方向偏移,抑制肿瘤的增生。实体瘤免疫组化分析显示,A组TAMs浸润显著减少（P<0.05）,IL-10,TGF-β及血管内皮生长因子（VEGF）表达下调,而MHC Ⅱ增加。q RT-PCR检测显示A组实体瘤中iN OS表达明显增加（P<0.05）,而TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达抑制。ELISA检测显示A组瘤体内的IL-6分泌下调（P<0.05）。结论:弓形虫效应分子GRA15慢病毒感染RAW264.7,可驱动后者向caMφ极化,且GRA15在宿主细胞内可稳定、持续表达。在肿瘤发生早期被动输入虫源性GRA15驱动的ca Mφ可通过调节TAMs的浸润和偏移明显抑制肿瘤在体内的进展。GRA15对宿主无明显毒副作用,具有深入研究的应用价值。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白GRA15 肝细胞性肝癌 TAMs

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新疾病防控形势下人体寄生虫学教学内容改革方向

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热带病与寄生虫学 2018年第4期16卷 236-237页

作者：计永胜姚湧刘淼沈际佳汪学龙安徽医科大学人体寄生虫学教研室人兽共患病安徽省重点实验室病原生物学安徽省重点实验室

目的探讨在新的疫病流行和防控形势下人体寄生虫学的授课策略。方法通过文献搜集分析概述我省现阶段寄生虫病流行的新特点,讨论《人体寄生虫学》课堂教学中的新策略。结果和结论随着社会发展和经济结构的改变,我省寄生虫病已经形成了传... 详细信息

目的探讨在新的疫病流行和防控形势下人体寄生虫学的授课策略。方法通过文献搜集分析概述我省现阶段寄生虫病流行的新特点,讨论《人体寄生虫学》课堂教学中的新策略。结果和结论随着社会发展和经济结构的改变,我省寄生虫病已经形成了传统土源性寄生虫病流行率逐年下降,食源性寄生虫病和输入性寄生虫病流行率逐年上升的新趋势。教学主体需要和疾病预防控制、检验检疫相关部门合作,逐步建立国际科研教学新模式,更新教学方式和内容,顺应新时代的教学需求。

关键词：寄生虫学教学疾病防控

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siRNA抑制弓形虫次黄嘌呤-黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的表达

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安徽医科大学学报 2008年第4期43卷 376-380页

作者：余莉李霞郜玉峰罗庆礼乔增培沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室教育部省部共建重点实验室(安徽医科大学)合肥230032 安徽中医学院第二附属医院检验科合肥230061 安徽医科大学第一附属医院感染病科合肥230022

目的探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的基因的表达调节作用。方法以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶——次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓... 详细信息

目的探讨小干扰RNA(siRNA)在弓形虫体内的对目的基因的表达调节作用。方法以弓形虫嘌呤代谢过程中的关键酶——次黄嘌呤、黄嘌呤、鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HXGPRT)编码基因为靶标,合成3对siRNA,以电穿孔的方式将不同的浓度的siRNA转染弓形虫。采用荧光定量PCR及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别检测弓形虫HXGPRT mRNA及酶合成量。结果在针对HXGPRT编码基因设计的3对21nt的siRNA中,有1对(siRNA415)能明显降低HXGPRT mRNA水平及酶合成量。在转染后24h,4μmol/LsiRNA415电转弓形虫的HXGPRT mRNA水平及[3H]-次黄嘌呤摄入量分别降为模拟电转弓形虫的0.36±0.04及0.51±0.03倍(P<0.05)。结论21nt的siRNA在弓形虫体内能有效抑制目的基因的表达。siRNA在弓形虫体内的应用将为阐明未知基因的功能和抗弓形虫药物的筛选提供有力的工具。

关键词：嘌呤类/代谢次黄嘌呤磷酸核糖转移酶 RNA 小分子干扰

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循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

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安徽医科大学学报 2007年第4期42卷 351-354页

作者：余轶婧沈继龙罗庆礼乔增培安徽医科大学病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室(省部共建)省重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学人兽共患病研究所合肥230032

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比... 详细信息

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。

关键词：血吸虫病,日本/诊断 14-3-3蛋白质类抗原,蠕虫/分析抗体,蠕虫/分析

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染色法鉴别旋毛形线虫成虫死活的实验观察

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蚌埠医学院学报 2011年第10期36卷 1041-1042,1046页

作者：王小莉李亮方强崔洁郭凯沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠学院食品与生物工程系安徽蚌埠233000

目的:探讨快速鉴别旋毛形线虫成虫死活的染色方法。方法:分别以0.5%番红、1.0%中性红和0.5%甲基蓝3种染液,对死或活旋毛形线虫成虫进行染色。结果:0.5%番红、1.0%中性红染液能使死亡旋毛形线虫成虫着色;旋毛形线虫活成虫对3种染液均不... 详细信息

目的:探讨快速鉴别旋毛形线虫成虫死活的染色方法。方法:分别以0.5%番红、1.0%中性红和0.5%甲基蓝3种染液,对死或活旋毛形线虫成虫进行染色。结果:0.5%番红、1.0%中性红染液能使死亡旋毛形线虫成虫着色;旋毛形线虫活成虫对3种染液均不着色。结论:0.5%番红、1.0%中性红染液染色均可快速鉴别旋毛形线虫成虫死活。

关键词：旋毛形线虫成虫番红中性红甲基蓝

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