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中国人兽共患病学报 2012年第12期28卷 1247-1250,1254页

作者：王璐沙泉沈继龙安徽医科大学免疫学教研室安徽省病原生物学重点实验室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发... 详细信息

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发病率明显增加,对免疫机能低下患者造成严重的威胁。弓形虫由包囊内的缓殖子向速殖子转变是导致疾病发生的先决条件,进而速殖子又可以感染神经系统中的不同细胞。这些细胞在对抗弓形虫入侵的同时也会产生各种炎症因子对神经系统造成损伤。因而对弓形虫脑炎的抗炎免疫研究甚为重要。本文主要从神经系统和细胞两个方面探讨弓形虫脑炎的损伤及其机制。

关键词：弓形虫脑炎小神经胶质细胞

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弓形虫病的若干术语释义及实验室诊断的解读与处置策略

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第4期35卷 382-386页

作者：沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

免疫力正常的个体获得性弓形虫感染常无明显临床表现而呈慢性感染。隐性感染活化引起的弓形虫病是包括艾滋病等免疫功能受损患者常见的甚至致死性的并发感染疾病。孕妇的急性弓形虫感染可导致严重的不良妊娠结局。本文针对我国行业标准... 详细信息

免疫力正常的个体获得性弓形虫感染常无明显临床表现而呈慢性感染。隐性感染活化引起的弓形虫病是包括艾滋病等免疫功能受损患者常见的甚至致死性的并发感染疾病。孕妇的急性弓形虫感染可导致严重的不良妊娠结局。本文针对我国行业标准《弓形虫病的诊断》(WST 486-2015)的若干术语概念以及实验室检测指标判读的困惑进行试解析,并介绍了国外孕妇弓形虫感染的实验室检测以及处置方案,旨在为我国弓形虫病防治提供参考。

关键词：弓形虫病血清学诊断易感性先天性弓形虫病

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芍药苷对感染血吸虫小鼠肝纤维化的影响

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中国人兽共患病学报 2010年第2期26卷 115-119页

作者：闻慧琴沈继龙罗庆礼李小月安徽病原生物学省级实验室(安徽医科大学) 安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032

目的探讨小鼠感染日本血吸虫后经吡喹酮治疗的不同时期,给予芍药苷对肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响。方法以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠构建肝纤维化模型,随机分为(Ⅰ)杀虫前给药组、(Ⅱ)杀虫同时给药组及(Ⅲ)杀虫后给药组。除正常... 详细信息

目的探讨小鼠感染日本血吸虫后经吡喹酮治疗的不同时期,给予芍药苷对肝组织虫卵肉芽肿和纤维化的影响。方法以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠构建肝纤维化模型,随机分为(Ⅰ)杀虫前给药组、(Ⅱ)杀虫同时给药组及(Ⅲ)杀虫后给药组。除正常组外,杀虫治疗、芍药苷治疗组和对照组小鼠分别于感染后12d、42d和72d给予芍药苷和对照,并于102d、132d和162d处死。检测透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢP)、羟脯氨酸(Hyp)、虫卵肉芽肿大小、肝纤维化分级以及胶原Ⅰ的表达。结果在组Ⅰ和组Ⅲ,芍药苷明显降低血清中HA、PⅢP和肝组织中Hyp的含量,减小虫卵结节并降低肝纤维化严重程度分级,降低胶原Ⅰ的表达(P<0.05或P<0.01);在组Ⅱ,大部分指标没有明显差别(P>0.05)。结论芍药苷无论是早期或延后给药,都具有抑制虫卵肉芽肿,减少胶原的生成从而对抗小鼠血吸虫性肝纤维化的作用。

关键词：芍药苷日本血吸虫病肝纤维化胶原Ⅰ

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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 570-574页

作者：陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 详细信息

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。

关键词：弓形虫弗氏佐剂匹多莫德西咪替丁 ROP2蛋白免疫佐剂

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刚地弓形虫基因型和与基因型相关的致病机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第4期31卷 319-324页

作者：王林沈继龙安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,对人类健康和畜牧业发展造成严重危害。弓形虫属仅有刚地弓形虫一种,经多重酶切电泳分析(MLEE),PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和微卫星分型... 详细信息

弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,对人类健康和畜牧业发展造成严重危害。弓形虫属仅有刚地弓形虫一种,经多重酶切电泳分析(MLEE),PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和微卫星分型等研究发现,各地刚地弓形虫具有丰富的遗传多态性。已知不同基因型弓形虫株的致病机制不同。本文对世界各地区弓形虫株基因型及基因型与毒力间的相关性研究进展进行了综述。

关键词：刚地弓形虫基因型种群结构毒力

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血吸虫及其相关蛋白与自身免疫性疾病(英文)

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中国人兽共患病学报 2015年第1期31卷 57-63页

作者：王书书计永胜沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032 安徽医科大学免疫教研室和病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院儿内科合肥230001

自身免疫性疾病(ADs)是以特定的靶器官或多个器官系统的慢性损害和功能障碍为特征,临床上缺乏有效的治疗方法,目前发病率逐年升高,严重威胁人类健康。现有数据显示,血吸虫感染或注射血吸虫相关蛋白可能保护或减轻机体免受自身免疫性疾... 详细信息

自身免疫性疾病(ADs)是以特定的靶器官或多个器官系统的慢性损害和功能障碍为特征,临床上缺乏有效的治疗方法,目前发病率逐年升高,严重威胁人类健康。现有数据显示,血吸虫感染或注射血吸虫相关蛋白可能保护或减轻机体免受自身免疫性疾病的损害。研究学者已经建立相应的小鼠自身免疫疾病模型,证实了注射血吸虫蛋白具有诱导宿主Th2免疫偏移,下调Th17反应,并诱导旁路途经活化的巨噬细胞,从而减轻自身免疫性疾病,具有肯定的治疗效果。在这篇综述中,我们总结了血吸虫感染及血吸虫相关蛋白与减轻Th1介导的自身免疫性疾病之间的关系,力争明确其潜在的免疫保护机制。

关键词：自身免疫性疾病血吸虫 Th1Th2应答

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弓形虫的基因型及其主要效应分子的致病机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 429-435页

作者：沈继龙王林安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采用PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP)或微卫星标记分型,已从野生动物、家养禽畜和人体分离虫株中发现了232个基因型。其中,北美的弓形虫基因型以typeⅡ、typeⅢ和type12(主要见于野生动物)为主;欧洲以typeⅡ、typeⅢ和typeⅠ为主;非洲以typeⅡ和typeⅢ为主。以上称为原型克隆谱系。但南美的弓形虫表现出丰富的遗传多样性,包括BrⅠ、BrⅡ、BrⅢ和BrⅣ型等。近年研究发现,我国流行的弓形虫优势基因型为Chinese 1型(Toxo DB#9)。该型虫株兼具有原型谱系虫株关键效应分子的多态性。本文综述了世界各地包括我国在内的基因型、宿主免疫应答及其致病特点,为深入研究基因型/效应分子相关的致病机制,以及弓形虫的生物学和流行病学研究提供借鉴。

关键词：弓形虫基因型 PCR-限制性片段长度多态性分析致病机制免疫应答

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间日疟原虫安徽地域株乳酸脱氢酶基因序列同源性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 148-150页

作者：胡明洁方强吴守伟汤必奎张静焦玉萌夏惠沈继龙蚌埠医学院遗传学教研室蚌埠233030 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采... 详细信息

采集安徽省蚌埠市区、五河县、怀远县、蒙城县和利辛县2009-2010年的39例间日疟患者血样,分别提取DNA,PCR扩增间日疟原虫乳酸脱氢酶(PvLDH)基因,并克隆测序,以及Blast序列分析。结果显示,克隆的PvLDH基因片段为951 bp。序列分析发现,采自安徽地区的39例间日疟患者血样的PvLDH基因序列之间无差异(登录号为GU078391),与GenBank中其他地域株的PvLDH基因序列同源性均>99%,氨基酸序列仅分别与EJEU60134株和MIA061251株存在1个氨基酸的差异。

关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶同源性分析

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日本血吸虫成虫可溶性蛋白和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白抑制小鼠结肠炎的研究（英文）

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2019年第2期37卷 127-136页

作者：武艺李路徐永伟邢瑞欣胡静王书书沈继龙徐元宏陈熙安徽医科大学第一附属医院消化内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法 24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、 Sj SWP... 详细信息

目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法 24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、 Sj SWP治疗组(SjSWP组)。PBS、 rSjcystatin、 SjSWP组用0.1 ml 5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导结肠炎,灌肠后6、 24 h分别腹腔注射100μl PBS、 50μg r Sjcystatin、 50μg SjSWP;健康对照组在相应时间点用等量的PBS灌肠及腹腔注射。TNBS灌肠72 h后无痛处死各组小鼠,检测宏观评分、结肠长度、髓过氧化物酶活性和显微镜下微观评分来评估炎症参数和病理改变。流式细胞仪检测小鼠脾脏中Th1和Th2及T调节细胞(Tregs)的比例。ELISA检测小鼠结肠组织匀浆上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4 (IL-4)、 IL-13、 IL-10等炎性细胞因子的水平。多组计量资料分析采用单因素方差分析,多组均数间的两两比较用Student-Newman-Keuls检验。结果 TNBS诱导的结肠炎小鼠表现出明显的炎症和病理学特征,表现为体质量下降,便血、腹泻、结肠缩短、溃疡,以及炎性细胞因子IFN-γ、炎性细胞浸润和髓过氧化物酶活性的增加。与PBS组相比, rSjcystatin和SjSWP的干预治疗可以显著改善TNBS诱导的结肠炎症,表现为宏观评分(改善结肠糜烂、黏连、溃疡和缩短)和微观评分(减少组织损伤和炎症)的降低。健康对照组、 PBS组、 rSjcystatin组和SjSWP组小鼠结肠的宏观评分分别为0、 9.8±0.8、 4.3±1.0和4.5±1.4,微观评分分别为0、 6.0±0.4、 2.2±0.5和2.8±0.6,rSjcystatin组、 SjSWP组与PBS组相比差异均有统计学意义(F=57.8、 34.1, P <0.01), rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P> 0.05)。健康对照组、 PBS组、 rSjcystatin组和SjSWP组髓过氧化物酶分别为0.3±0.0、 1.4±0.1、 0.6±0.1和0.6±0.1 (F=32.5, P <0.01);脾脏Tregs比例分别为(4.4±0.7)%、(8.2±3.1)%、(18.4±2.1)%和(13.4±1.9)%(F=8.3, P <0.01);结肠组织匀浆上清中IFN-γ、 IL-10水平分别为(952.0±61.1)、(1 684.6±158.3)、(1 092.0±81.9)、(1 001.6±111.2) pg/ml,(322.8±27.4)、(399.3±77.9)、(860.6±153.6)、(892.0±113.8) pg/ml (F=9.6、 8.3, P <0.05);与PBS组相比, rSjcystatin与SjSWP组的INF-γ、髓过氧化物酶活性明显减低, Tregs应答增强, IL-10分泌增多,差异均有统计学意义(P <0.01), rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论 SjSWP及rSjcystatin均可通过上调小鼠Treg和Th2介导的免疫应答,减轻小鼠实验性结肠炎,抑制导致结肠炎发病的Th1免疫应答。

关键词：日本血吸虫可溶性成虫蛋白半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结肠炎免疫调节

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增强型绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫成虫体内的瞬时表达

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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 18-21页

作者：袁小松沈继龙汪学龙董慧芬蒋明森安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 武汉大学医学院病原生物学教研室

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blo... 详细信息

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blot验证转基因在成虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在成虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功的扩增出760bp和276bp的预期大小的片断,Western-blot证实了EGFP基因在成虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察到,EGFP主要定位在成虫的皮层,口吸盘和尾部尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫成虫体内并获得表达,为转基因血吸虫和基因功能的研究打下基础。

关键词：电穿孔技术增强型绿色荧光蛋白转基因血吸虫

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