检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 345-349页

作者：程正阳苏蕊张贤李叶林朱万博余莉安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室安徽合肥230032

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行... 详细信息

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行优化,合成优化后的全长基因(ROP18u)并将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18u重组质粒;以优化后的ROP18u基因为模板,PCR扩增去除N端信号肽和前功能区序列的截短ROP18片段(ROP18uc),将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18uc重组质粒。所有重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc于30℃诱导培养4h-6h,分别检测到分子质量约为88ku和77ku的重组蛋白,该蛋白能被GST单克隆抗体和ROP18多克隆抗体识别。结论成功构建了pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc原核表达载体,密码子优化未能显著提高ROP18重组蛋白的表达量,但提高了可溶性蛋白的含量。

关键词：弓形虫 ROP18 原核表达

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猪囊尾蚴病患者IFN-γ、IL-4的免疫组织化学研究

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中国人兽共患病学报 2007年第8期23卷 792-796页

作者：王雪梅胡守锋孙新沈继龙夏惠方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观... 详细信息

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观察其IFN-γ/IL-4的表达水平。结果45例病变组织中35例有IFN-γ的表达,阳性表达率为77.78%,24例有IL-4的表达,阳性表达率为53.33%,阳性表达多定位于异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆;脑型囊尾蚴病IL-4的阳性表达强度高于皮肌型。结论猪囊尾蚴感染的病变组织中有多种类型炎细胞浸润,以异物巨细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润为主;炎细胞中IFN-γ表达较普遍,同时也有IL-4的表达。

关键词：猪囊尾蚴病 IFN-γ IL-4 免疫组织化学

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弓形虫肌动蛋白抗原表位抗体的制备及应用

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中国动物传染病学报 2024年第4期32卷 73-78页

作者：庄宝灿朱进进余莉安徽医科大学病原生物学教研室、病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗... 详细信息

制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位,并与多种属Actin进行同源比对,选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度,ELISA测定抗体效价,Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性,免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示,ELISA测定抗体效价为1∶128000,Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin,免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明,成功制备了TgActin多肽表位抗体,可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测,为后续弓形虫研究提供了便利条件。

关键词：弓形虫肌动蛋白表位抗体内参抗体免疫荧光

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淮河干流浮游动物群落结构特征

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湖泊科学 2015年第5期27卷 932-940页

作者：吴利李源玲陈延松合肥师范学院生命科学学院合肥230061 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学) 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230022

2011年3、6、9和12月对淮河干流11个采样点的浮游动物群落结构进行调查研究,共检出浮游动物79属206种,其中原生动物27属69种,占浮游动物总物种数的33.5%;轮虫35属104种,占50.5%;枝角类12属27种,占13.1%;桡足类5属6种,占2.9%.总体上看,... 详细信息

2011年3、6、9和12月对淮河干流11个采样点的浮游动物群落结构进行调查研究,共检出浮游动物79属206种,其中原生动物27属69种,占浮游动物总物种数的33.5%;轮虫35属104种,占50.5%;枝角类12属27种,占13.1%;桡足类5属6种,占2.9%.总体上看,从上游至下游,浮游动物物种数呈现逐渐减少的趋势.浮游动物的丰度和生物量分别为3527447 ind./L和2452 mg/L,轮虫和原生动物丰度是淮河干流浮游动物丰度的主体,轮虫生物量是淮河干流浮游动物生物量的主体,浮游动物及各类群丰度和生物量均表现为从上游到中游逐渐增高的趋势,而从中游到下游呈现逐渐降低的趋势.上游浮游动物多样性指数和均匀度指数高于中、下游.结果表明:淮河干流上游水质为轻污染,中、下游水质为中污染或重污染.浮游动物群落结构和环境因子的冗余分析表明,水温、溶解氧和流速是与淮河干流浮游动物群落结构相关性较强的环境因子.

关键词：浮游动物群落结构水质淮河干流

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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

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中国人兽共患病杂志 2004年第10期20卷 847-850页

作者：查任远沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj1... 详细信息

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性。

关键词：日本血吸虫病免疫诊断重组sj14-3-3 单克隆抗体

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芍药苷通过IL-13信号通路抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化

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安徽医科大学学报 2011年第4期46卷 314-320页

作者：杜明占沈继龙吴强胡向阳储德勇安徽医科大学病理学教研室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸... 详细信息

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸虫病肝纤维化的作用机制。方法 BALB/c小鼠感染血吸虫尾蚴12 d开始,药物组每天灌胃给予PAE[0.2 ml,60 mg/(kg.d)×30 d],正常和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,并于感染后第42天起所有各组灌胃给予吡喹酮[500 mg/(kg.d)×2 d]以杀虫。在感染后第8、12周末,分别处死小鼠,取血及肝脏,分别用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量;碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸(HYP)含量;苏木精-伊红(HE)和Masson胶原纤维染色法观察肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度;免疫组化染色观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、IL-13、STAT6、IL-13Rα1的表达情况;RT-PCR检测Col–Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达情况。结果感染后第8、12周时,模型组小鼠血清HA水平和肝脏HYP水平显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏虫卵肉芽肿面积和纤维化程度显著高于药物组(P<0.01);肝脏α-SMA阳性细胞的表达强度显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏IL-13表达水平显著高于药物组(P<0.01);肝脏Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA水平显著高于正常组和药物组(P<0.01)。感染后第8周时模型组小鼠STAT6、IL-13Rα1表达水平显著高于药物组(P<0.01)。结论 PAE可能通过抑制IL-13信号转导通路而抑制日本血吸虫病肝纤维化。

关键词：芍药苷血吸虫日本肝硬化白细胞介素13

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脂多糖对孤独症大鼠行为学发育的影响及病理机制

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中国康复医学杂志 2022年第9期37卷 1158-1164页

作者：王月段博阳余莉吴德唐久来安徽医科大学第一附属医院儿科安徽省合肥市230022 安徽医科大学第四附属医院安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽高校省级重点实验室

目的:探讨发育早期感染对孤独症症状的影响,建立丙戊酸钠SD大鼠孤独症样模型,分析发育早期脂多糖暴露对其孤独症样行为的影响及病理机制。方法:随机选取9只SD孕鼠中的6只于孕12.5天给予丙戊酸钠600mg/kg腹腔注射建立孤独症模型,另外3只... 详细信息

目的:探讨发育早期感染对孤独症症状的影响,建立丙戊酸钠SD大鼠孤独症样模型,分析发育早期脂多糖暴露对其孤独症样行为的影响及病理机制。方法:随机选取9只SD孕鼠中的6只于孕12.5天给予丙戊酸钠600mg/kg腹腔注射建立孤独症模型,另外3只孕鼠作为对照组,给予生理盐水腹腔注射。模型组孕鼠产仔后,第20天随机挑选一半仔鼠作为丙戊酸钠加脂多糖组,给予脂多糖2mg/kg腹腔注射,另一半生理盐水腹腔注射作为丙戊酸钠组,注射生理盐水的孕鼠的子代为对照组。采用随机数字法在3组中随机选取仔鼠各8只,在生后43天进行旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验和三箱社交实验。生后50天3组仔鼠额叶脑组织进行HE染色和透射电镜病理检测,海马组织进行HE染色。结果:旷场实验、埋珠实验、Y型迷宫实验、三箱实验结果显示,丙戊酸钠组较对照组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、关闭臂探索时间少、社交性和社交偏好性降低(P<0.05);丙戊酸钠加脂多糖组较丙戊酸钠组的活动总距离长、跨格子数多、埋珠个数多、关闭臂进入次数少、关闭臂探索路程少、社交性和社交偏好性降低(P<0.05)。HE和电镜结果显示,丙戊酸钠加脂多糖组细胞核膜破裂,较丙戊酸钠组细胞结构损伤更为严重。结论:发育早期脂多糖注射会使孤独症大鼠模型孤独症样行为加重,提示感染可能是导致孤独症谱系障碍儿童症状恶化的原因之一,值得临床关注。

关键词：孤独症谱系障碍脂多糖类丙戊酸钠动物行为学

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sIL-13Rα2抑制IL-13介导的NIH-3T3胶原I的合成及血吸虫病肝组织中sIL-13Rα2/IL-13的表达(英文)

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中国人兽共患病学报 2009年第8期25卷 715-721页

作者：李静王维李小月储德勇闻慧琴周银娣张诗海罗庆礼沈继龙安徽省病原生物学省级实验室教育部省部共建重要遗传病因资源利用重点实验室安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的研究在成纤维细胞NIH-3T3中IL-13可溶性受体sIL-13Rα2对IL-13的抑制作用,为进一步研究sIL-13Rα2对日本血吸虫感染小鼠体内肝纤维化的治疗作用奠定基础。方法用ELISA和RT-PCR检测感染日本血吸虫的BALB/c小鼠0、6、8、10和12w不同... 详细信息

目的研究在成纤维细胞NIH-3T3中IL-13可溶性受体sIL-13Rα2对IL-13的抑制作用,为进一步研究sIL-13Rα2对日本血吸虫感染小鼠体内肝纤维化的治疗作用奠定基础。方法用ELISA和RT-PCR检测感染日本血吸虫的BALB/c小鼠0、6、8、10和12w不同感染时期肝脏组织IL-13和sIL-13Rα2表达和转录水平。构建sIL-13Rα2表达质粒转染成纤维细胞NIH-3T3,用IL-13(50ng/mL)刺激转染后成纤维细胞NIH-3T3,用RT-PCR和Western blotting分别检测该细胞分泌的Ⅰ型胶原。结果感染后小鼠肝脏肉芽肿组织中IL-13和sIL-13Rα2的蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐增高,第8wIL-13水平达到高峰(16.1586pg/mL),随后逐渐降低但仍高于正常水平(3.4146pg/mLP=0.017);第10wsIL-13Rα2的分泌达到高峰(4827.426pg/mL),以后逐渐减低,但仍高于正常水平(4057.112pg/mLP=0.021)。IL-13和sIL-13Rα2的mRNA转录趋势和ELISA检测结果相符合,均随感染时间的延长而增高,分别在第8w和第10w达到最高峰,随后逐渐降低但仍高于正常组小鼠(P=0.033;P=0.025)。实验组(sIL-13Rα2=2mg/mL)Ⅰ型胶原mRNA转录水平较正常对照组减低8.83%(P=0.012);蛋白水平较对照组减低7.41%(P=0.031)。结论sIL-13Rα2在NIH-3T3细胞中对IL-13有抑制作用,提示sIL-13Rα2在治疗血吸虫病肝纤维化中具有潜在价值。

关键词： sIL-13Rα2 IL-13 NIH-3T3 日本血吸虫病肝纤维化

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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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日本血吸虫感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2的表达

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中国人兽共患病学报 2011年第7期27卷 597-600,609页

作者：王维郑胜生祁瑶闻惠琴刘丽丽沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧... 详细信息

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧光显微镜下观察:肝肉芽肿内可见似"咖啡豆样"散在分布的IL-13Rα2免疫阳性信号,巨噬细胞膜内缘呈异常增强的环状荧光。结论巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞,IL-13Rα2是血吸虫病重要的免疫病理调节分子。

关键词：血吸虫病肉芽肿巨噬细胞 IL-13Rα2 CD68 免疫荧光染色技术

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