检索结果-内蒙古大学图书馆

中华预防医学杂志 2006年第4期40卷 248-252页

作者：刘庆中胡元生沈继龙江宝玲汪学龙温州医学院附属第一医院检验科 325000 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;... 详细信息

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB／c小鼠并进行攻击感染实验。在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率。并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体。结果成功表达出rSj14- 3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28．20％、第2组43．10％、第3组40．00％;各组的减卵率分别为(按以上组序)41．80％、57．50％、55．70％。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6．8、第2组t=8．7、第3组t=7．3,各组P值均<0．01;减卵率:第1组t=11．23、第2组t=11．54、第3组t=7．99,各组P值均<0．01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:X2=8．96,P<0．05;减卵率:X2=15．69,P<0．05)、第1组与第3组间(减虫率:X2=6．52,P<0．05;减卵率:X2=12．52,P<0．05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:X2=1．20,P>0．05;减卵率:X2=0．93,P>0．05)。各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显。结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好。

关键词：血吸虫,日本 RGS蛋白质类重组蛋白质类抗体生成

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EBI3蛋白基因克隆、表达及其初步鉴定

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安徽医科大学学报 2010年第1期45卷 1-5页

作者：廖法学彭丽娜张平平杨帆刘慧敏陈伟梁坤张玉侠沈际佳安徽医科大学七年制临床医学专业合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室和安徽省病原生物学重点实验室合肥230032

目的进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定。方法收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达... 详细信息

目的进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定。方法收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达载体pET32a(+),转化至大肠埃希菌(***)BL21株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对包涵体进行变性、纯化和复性后获得可溶性的小鼠重组EBI3蛋白,用Western blot对其鉴定。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠获取血清,经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A-50柱纯化得到抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA检测其免疫活性。结果基因工程获得目的蛋白变性复性成功后经Western blot鉴定证实为小鼠重组EBI3蛋白,免疫小鼠后取血清,分离纯化获得抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA结果表明该蛋白具有免疫原性。结论成功地表达了小鼠重组EBI3蛋白,并制备了抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,为进一步研究EBI3蛋白在病原生物感染宿主中的功能奠定了基础。

关键词：基因表达

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弓形虫ROP16_(Ⅰ/Ⅲ)DNA疫苗不能诱导小鼠有效的保护性免疫

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中国人兽共患病学报 2015年第11期31卷 1010-1016页

作者：周芹芝李曼陈鹤都建罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省人兽共患病重点实验室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 中铁四局集团中心医院检验科合肥230000 安徽医科大学第一附属医院合肥230032

目的利用ROP16I/III基因真核表达重组质粒免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠体液免疫和细胞免疫,评估ROP16I/III作为潜在的分子疫苗的价值。方法克隆Chinese 1型弓形虫ROP16I/III,将其插入真核表达载体pEGFP-C2中构建重组质粒pEGFP-ROP16I/I... 详细信息

目的利用ROP16I/III基因真核表达重组质粒免疫BALB/c雌性小鼠,检测小鼠体液免疫和细胞免疫,评估ROP16I/III作为潜在的分子疫苗的价值。方法克隆Chinese 1型弓形虫ROP16I/III,将其插入真核表达载体pEGFP-C2中构建重组质粒pEGFP-ROP16I/III,脂质体法转染T293细胞并观察体外表达。Western blotting分析鉴定。将36只SPF级小鼠随机均分为:1PBS组;2空质粒组;3pEGFP-ROP16I/III组。每2周肌注免疫1次(100μg/只),共3次;于免疫前及每次肌注前1d和末次免疫后2周收集小鼠血清,间接ELISA法检测血清抗弓形虫IgG。于末次免疫2周后取小鼠脾脏,分离淋巴细胞培养测细胞因子。剩余小鼠腹腔注射Chinese 1型弓形虫Wh3株速殖子1 000个/只,观察小鼠攻击感染后的存活时间和存活率。结果真核表达载体构建成功,体外见到重组质粒pEGFP-ROP16I/III在T293细胞的表达;pEGFP-ROP16I/III末次免疫后血清中IgG水平及脾淋巴细胞细胞因子均无明显升高(P>0.05);攻击感染后,免疫组小鼠比对照组的存活时间无延长(P>0.05);生物信息学分析发现ROP16I/III缺乏线性B细胞表位。结论 Chinese1型弓形虫的ROP16I/III由于其分泌的定位和结构特点,不能诱导小鼠产生有效的抗Wh3株攻击感染的免疫保护。

关键词：弓形虫 ROP16Ⅰ/Ⅲ 分子疫苗

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乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1247-1251,1257页

作者：朱宁束军张梅沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230022

目的探讨不同浓度乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin(GF)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验分为对照组(无GF处理组)和实验组(GF处理组,浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L),分别使用CCK-8、... 详细信息

目的探讨不同浓度乳酸脱氢酶抑制剂Galloflavin(GF)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验分为对照组(无GF处理组)和实验组(GF处理组,浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L),分别使用CCK-8、划痕实验、Transwell法检测不同浓度GF在不同作用时间条件下对A549细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;分别使用乳酸脱氢酶活性检测试剂盒、乳酸定量试剂盒检测不同浓度GF对乳酸脱氢酶活性、乳酸生成量的影响。结果 CCK-8结果表明,GF对A549细胞具有增殖抑制作用,并且在一定浓度和时间范围内呈现出依赖性(P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞迁移率小于对照组(P<0.05),随着GF浓度的增加,迁移率逐渐降低(P<0.05)。Transwell结果表明,实验组细胞侵袭细胞数小于对照组(P<0.05),随着GF浓度的增加,侵袭细胞数逐渐减少(P<0.05)。乳酸脱氢酶活性检测结果表明,实验组乳酸脱氢酶活性较对照组显著降低(P<0.05),随着GF浓度的增加,乳酸脱氢酶活性逐渐降低(P<0.05)。乳酸检测结果表明,实验组乳酸生成量较对照组显著减少(P<0.05),随着GF浓度的增加,乳酸生成量逐渐减少(P<0.05)。结论 GF在体外能够抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能是通过抑制乳酸脱氢酶活性从而抑制肺癌细胞糖酵解。

关键词： Galloflavin 肺腺癌增殖迁移侵袭

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早老素在日本血吸虫生殖发育中的作用

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安徽医科大学学报 2021年第10期56卷 1590-1594页

作者：杨旭晗杨菲沈际佳刘淼安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。... 详细信息

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。体外培养28 d雌雄合抱的成虫,应用siRNA对早老素进行干扰,10 d后,观察早老素被敲降后对血吸虫产卵量,雌雄合抱及生殖系统的影响。结果荧光定量PCR结果显示,早老素在24 d雌虫表达量明显上调,同时证实该基因在卵巢组织高表达。当早老素被敲降后,雌雄合抱率和雌虫的产卵量也有明显下降。激光共聚焦结果显示相对于对照组和Mock组,RNA干扰组的生殖细胞减少,生殖系统形态出现异常。结论早老素在日本血吸虫生殖发育和产卵中起重要调控作用。

关键词：日本血吸虫早老素 RNA干扰生殖

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弓形虫致密颗粒蛋白GRA35多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2024年第2期19卷 162-165,171页

作者：韩萌李丹都建安然安徽医科大学生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人兽共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备兔多抗弓形虫致密颗粒蛋白GRA35抗体,并对其进行初步的鉴定和应用。方法利用GRA35重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗GRA35抗体。采用ELISA检测抗体效价,采用Western Blot鉴定抗体的特异性,并将获得的多克隆抗体应用于免疫荧光技术。... 详细信息

目的制备兔多抗弓形虫致密颗粒蛋白GRA35抗体,并对其进行初步的鉴定和应用。方法利用GRA35重组蛋白免疫新西兰兔,获得抗GRA35抗体。采用ELISA检测抗体效价,采用Western Blot鉴定抗体的特异性,并将获得的多克隆抗体应用于免疫荧光技术。结果获得的抗体效价在1∶32000之上;经重组的外源性致密颗粒蛋白GRA35和弓形虫速殖子中的内源性致密颗粒蛋白GRA35能够被制备的多克隆抗体特异性识别;弓形虫入侵细胞时形成的纳虫泡膜与弓形虫致密颗粒蛋白GRA35共定位。结论成功获得具有较高效价和较强特异性的弓形虫致密颗粒蛋白GRA35的兔多克隆抗体,为弓形虫致密颗粒蛋白GRA35在弓形虫入侵宿主细胞时发挥的作用的进一步研究创造了条件。

关键词：弓形虫 GRA35 多克隆抗体免疫荧光

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高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及VEGF、MMP-2表达的影响

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 363-368页

作者：李晓峰束军程宇徐胜沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖)、顺铂组(5、10、20、40μmol/L顺铂)和联合组(30 mmol/L葡萄糖联合5、10、20、40μmol/L顺铂),分别处理48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖率,比较不同组别间细胞增殖率的差异;对照组、葡萄糖组、甘露醇组处理24 h和48 h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞中VEGF、MMP-2的mRNA水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF、MMP-2的蛋白浓度,比较不同组别间VEGF、MMP-2的表达水平差异。结果除10 mmol/L葡萄糖组外,葡萄糖组的细胞增殖率均高于对照组(P<0.05);相同顺铂浓度下,联合组的细胞增殖率高于顺铂组(P<0.05);与对照组比较,葡萄糖组VEGF、MMP-2表达明显增强(P<0.05),且对葡萄糖浓度有一定依赖性,葡萄糖浓度为30 mmol/L时VEGF mRNA、MMP-2的mRNA和蛋白水平达最高值,40 mmol/L时VEGF蛋白浓度最高;相同干预条件,48 h细胞的VEGF、MMP-2表达水平高于24 h(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能促进肺腺癌A549细胞的增殖,增强对顺铂的耐受力及VEGF、MMP-2的表达。

关键词：葡萄糖肺腺癌生长血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-2

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弓形虫棒状体蛋白ROP18表位肽抗体的制备与初步应用

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中国动物传染病学报 2023年第1期31卷 48-54页

作者：朱进进程正阳余莉安徽医科大学微生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备... 详细信息

设计并制备兔抗弓形虫棒状体蛋白ROP18的特异性表位肽抗体,并对其进行鉴定及初步应用。运用在线蛋白质分析软件Bepi Pred 1.0 Server预测和分析ROP18的抗原表位,人工合成选定的两段优势表位肽,与载体蛋白BSA偶联后分别免疫新西兰兔制备抗ROP18血清,通过ELISA鉴定其效价,Western blot鉴定其特异性,并将这两种抗体应用于免疫荧光和免疫共沉淀技术。间接ELISA结果显示两种抗体效价分别为1∶16 000、1∶64 000;Western blot结果显示,两种抗体均能够特异性识别弓形虫速殖子中的内源性天然ROP18蛋白和外源重组ROP18蛋白;免疫荧光检测到ROP18定位于弓形虫速殖子顶端及感染细胞的纳虫泡膜上;免疫共沉淀未能成功下拉目标蛋白。成功获得ROP18的两种表位肽多克隆抗体,效价高且特异性强,并成功应用于免疫荧光定位,为进一步探究ROP18在弓形虫中的功能和作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 ROP18 免疫荧光免疫共沉淀

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日本血吸虫信号蛋白14-3-3的虫体免疫定位

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2003年第6期21卷 330-332页

作者：刘庆中沈继龙汪学龙温州医学院附属第一医院检验科温州325000 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的　研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。　方法　从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和... 详细信息

目的　研究抗重组日本血吸虫信号蛋白 1 4 3 3(rSj1 4 3 3)单克隆抗体对天然Sjl4 3 3的结合活性 ,观察Sj1 4 3 3在虫体内的定位。　方法　从阳性钉螺体内逸出尾蚴 ,感染家兔 ,分别于感染后 1 5d和 4 2d剖杀 ,静脉灌注法收集童虫和成虫制备冰冻切片。利用rSj1 4 3 3单克隆抗体 ,间接免疫荧光法探讨信号蛋白 1 4 3 3虫体内的分布。　结果　免疫荧光染色结果显示 ,rSj1 4 3 3单克隆抗体可特异性地结合天然Sj1 4 3 3抗原表位 ,背景清晰 ,Sj1 4 3 3广泛分布在雌、雄成虫的皮层、皮下层、肌层和实质层 ,前三种组织中特异性荧光呈线状分布 ,实质中特异性荧光弥散 ;童虫中Sj1 4 3 3也广泛的分布在皮层、皮下层、肌层和实质层。　结论　免疫荧光染色成功地确定了Sj1 4 3 3蛋白在成虫和 1

关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3 虫体免疫定位单克隆抗体 Sj14-3-3 成虫童虫

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Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1273-1277页

作者：祁瑶宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、... 详细信息

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。

关键词： T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子 Th2优势应答血吸虫病

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