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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十五次全国学术会议暨第六次国际寄生虫学学术研讨会

作者：甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室

目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影响及其机制。方法:在优化神经干细胞... 详细信息

目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影响及其机制。方法:在优化神经干细胞系C17.2分化条件的基础上,用不同剂量的弓形虫ESAs和/或Wnt通路激活剂Wnt3a予以干预,在诱导分化后5d,检测神经干细胞特异性标记物巢蛋白(Nestin)、神经元的特异性标记物βⅢ微管蛋白(βⅢ-tubulin)及神经胶质细胞特异性标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况,以及Wnt通路中相关蛋白β-catenin、Ngn1和Ngn2的表达水平。结果:C17.2细胞在诱导分化后5d,免疫荧光检测结果显示ESAs干预组βⅢ-tubulin和GFAP的荧光信号较诱导分化组明显减弱。经不同剂量ESAs干预培养5 d,C17.2细胞内βⅢ-tubulin和GFAP的相对表达量均较诱导分化组明显下降,且呈剂量依赖性。ESAs和Wnt3a联合干预组的核内β-catenin相对表达水平明显低于Wnt3a预处理组而明显高于ESAs干预组。Wnt信号通路下游的靶基因Neurogenin(Ngn)1和2的表达量在Wnt3a和ESAs联合干预组也明显低于Wnt3a预处理组。结论:弓形虫可通过ESAs抑制C17.2神经干细胞分化,且抑制水平呈现剂量依赖性;弓形虫ESAs可显著降低Wnt/β-catenin通路中的关键分子β-catenin的表达水平,以及下游靶基因Ngn1和Ngn2的表达,推测其可能通过此信号通路干预C17.2神经干细胞分化。

关键词：弓形虫神经干细胞分化

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应用免疫磁珠分离法纯化弓形虫速殖子的研究

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安徽医科大学学报 2014年第1期49卷 9-13页

作者：楼研沈继龙程维晟刘芳陈鹤罗庆礼王林安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽医学高等专科学校病原生物学与免疫学教研室合肥230601

目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗... 详细信息

目的用免疫磁珠分离法分选弓形虫速殖子,以去除宿主细胞成分,并尽可能对虫体的生物学特性无不良影响,为弓形虫的基础与临床研究提供技术基础。方法采用弓形虫Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常规方法制备速殖子可溶性抗原,免疫家兔,获得兔抗弓形虫多克隆IgG抗体。用抗体包被的免疫磁珠对小鼠腹腔液内弓形虫速殖子进行纯化,比较其纯度、回收率、虫体活力、毒力与感染性。结果用免疫磁珠分离技术纯化弓形虫速殖子后,其纯度提高到98.2%,细胞清除率为96%,虫体回收率为73.5%;用内盐法(MTS)细胞增殖与毒性检测试剂盒检测分离后的速殖子活性为95.6%。定量分组感染小鼠后死亡时间无显著性差异。结论免疫磁珠分离的速殖子纯度、细胞清除率和虫体回收率较高,能有效去除宿主细胞,且对速殖子的活性和毒力无影响。该法操作简便快速,无需昂贵的仪器设备,具有较大的实用价值。

关键词：弓形虫速殖子纯化免疫磁珠分离

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三种重组蛋白混合抗原的间接ELISA法检测人血清弓形虫IgM和IgG抗体

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中国人兽共患病学报 2014年第4期30卷 358-363页

作者：丁邦胜李霞罗庆礼余莉沈继龙安徽省立医院合肥230001 安徽中医药大学第二附属医院合肥230061 安徽省人兽共患病重点实验室(安徽医科大学) 病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室合肥230032

目的比较弓形虫rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组蛋白作为混合抗原在弓形虫病血清免疫诊断中检测结果与进口试剂盒检测结果的差异,评价三种重组蛋白混合抗原检测在弓形虫病免疫诊断中的应用价值。方法收集经美国产Zeus Toxo-ELISA试剂盒筛... 详细信息

目的比较弓形虫rSAG1、rHXGPRT和rAK三种重组蛋白作为混合抗原在弓形虫病血清免疫诊断中检测结果与进口试剂盒检测结果的差异,评价三种重组蛋白混合抗原检测在弓形虫病免疫诊断中的应用价值。方法收集经美国产Zeus Toxo-ELISA试剂盒筛选的阳性血清136例,阴性血清30例。复苏、诱导、表达含有弓形虫pET-28a/SAG1,pET-28a/HXGPRT和pET-28a/AK表达载体的3个菌株,纯化3种重组蛋白。以3种混合蛋白作为诊断抗原,采用间接ELISA法,以正交叉方法优化检测条件,检测66例弓形虫IgM阳性、70例IgG例阳性血清和30阴性血清,比较混合抗原检测和Zeus Toxo-ELISA试剂盒检测结果的差异;以Zeus Toxo-ELISA弓形虫试剂盒检测结果为标准,评价重组蛋白混合抗原检测的敏感性、特异性、总符合率以及约登指数。结果 IgM:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经χ2检验,χ2值为3.12,P>0.05,差异无显著性。混合重组抗原的敏感性为89.4%,特异性为96.7%,总符合率为91.7%,约登指数为0.861。IgG:混合抗原与Zeus Toxo-ELISA试剂检测结果经χ2检验,χ2值为0.25,差异无显著意义(P>0.05)。采用混合重组抗原的敏感性为97.1%,特异性为93.3%,总符合率为96.0%,约登指数为0.904。结论本研究3种重组抗原(rSAG1+rHXGPRT+rAK)混合的间接ELISA法检测弓形虫IgM和IgG,与进口ELISA试剂检测的总符合率高,具有较高的敏感性、特异性;更经济。

关键词：弓形虫重组抗原免疫诊断间接ELISA

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不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞PEDF表达的影响

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安徽医科大学学报 2014年第8期49卷 1084-1087页

作者：金程束军娄志霞沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、... 详细信息

目的观察不同浓度葡萄糖对肺腺癌细胞株A549中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法在基础培养液中,根据加入的葡萄糖浓度分为:对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖A组(10 mmol/L葡萄糖)、高糖B组(20 mmol/L葡萄糖)、高糖C组(30 mmol/L葡萄糖),进行A549细胞培养,分别于24、48、96 h后取样:采用半定量RT-PCR法检测不同时间点、含不同浓度葡萄糖组细胞PEDF mRNA水平,用ELISA法检测细胞培养上清液中和胞内PEDF蛋白,比较不同组间PEDF表达水平差异。结果与对照组相比,随着葡萄糖浓度的增加,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈剂量依赖性改变;随着葡萄糖作用时间的延长,除RT-PCR检测中的高糖C组,及ELISA检测中的高糖B组外,各组A549细胞PEDF的表达水平有明显下降趋势(P<0.05),呈时间依赖性改变。结论高浓度葡萄糖、较长时间作用可能降低肺腺癌细胞PEDF的表达水平。

关键词：肺腺癌色素上皮衍生因子葡萄糖浓度影响

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PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2014年第10期49卷 1361-1364页

作者：娄志霞束军金程沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,... 详细信息

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子(PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF浓度的增加,PEDF对A549细胞的增殖抑制率递增(P<0.05);相同PEDF浓度(80、160、320、640 nmol/L)情况下,除了80、160 nmol/L PEDF作用24 h和48 h的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF作用时间的延长,PEDF对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P<0.05)。上述不同浓度的PEDF处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF浓度的升高呈递增趋势(P<0.05)。结论 PEDF在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF抑制细胞增殖作用可能和PEDF浓度及作用时间有关,PEDF诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF浓度有一定关系。

关键词：色素上皮衍生因子肺腺癌 A549 细胞增殖细胞凋亡

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蠕虫及虫源性分子对自身免疫性疾病的保护作用

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 186-190页

作者：宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学附属省立医院心外科安徽省心血管病研究所合肥230001 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

机体接触包括蠕虫在内的病源微生物机会减少,尤其在幼年时期免疫系统失去病源微生物的塑造和协调,是导致西方发达国家自身免疫性疾病和过敏性疾病发病率迅速增高的主要原因之一。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自... 详细信息

机体接触包括蠕虫在内的病源微生物机会减少,尤其在幼年时期免疫系统失去病源微生物的塑造和协调,是导致西方发达国家自身免疫性疾病和过敏性疾病发病率迅速增高的主要原因之一。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自身免疫性疾病的临床症状和病理过程。日益增多的流行病学及实验研究证实了蠕虫对自身免疫性疾病及过敏性疾病的保护作用,显示了优异的临床应用价值。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自身免疫性疾病的临床症状和病理过程。目前,蠕虫感染诱导的宿主Th2免疫偏移已成为感染免疫调节研究的重要模型,并显示了优异的临床应用价值,具有诱人的临床应用前景。然而其负向免疫调控的机制至今尚未明了。本文回顾近年来蠕虫及其分子调节自身免疫性疾病的国内外研究进展,着重探讨蠕虫感染及其分子发挥免疫抑制作用的可能机制。

关键词：蠕虫感染虫源性分子自身免疫性疾病免疫偏移免疫调节

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贵阳猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 150-154页

作者：孟德娣王林楼研房功思沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医学高等专科学校合肥230601 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同... 详细信息

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同时用弓形虫CT-1株1×103个速殖子分别腹腔注射SPF级KM、BALB/c、C57BL、ICR小鼠,观察其存活率及死亡时间,进行毒力分析。结果从贵阳分离出2株弓形虫株,在10个遗传位点经PCR-RFLP分析均为China 1型(ToxoDB#9)。通过进行不同品系小鼠毒力研究显示,CT-1虫株感染C57BL、BALB/c、KM和ICR小鼠死亡率分别为100%、100%、30%和20%,有显著差异;CT-1虫株对C57BL和BALB/c鼠的毒力显著高于KM和ICR小鼠(P<0.01)。结论流行我国的弓形虫分离株具有有限的遗传多态性;在生物多样性较为丰富的我国西南地区,弓形虫China 1仍为其优势基因型;该型CT-1虫株对不同品系小鼠的致死力具有显著性差异。

关键词：弓形虫基因分型 PCR-限制性片段长度多态性分析毒力

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海藻酸钙-纳米羟磷灰石骨修复材料的制备及部分生物相容性测定

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华西口腔医学杂志 2014年第1期32卷 27-31页

作者：王彦梅何家才李全利沈际佳安徽医科大学附属口腔医院颌面外科安徽省口腔临床医学重点学科安徽省口腔疾病研究省级实验室中央与地方共建口腔医学中心实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓... 详细信息

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓基质干细胞(BMSCs)接种至材料上,倒置显微镜及SEM观察细胞生长情况。材料浸提液与BMSCs共培养,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测接种后1、3、5 d的相对增殖率(RGR),并评估毒性分级。新鲜犬血加入材料浸提液进行溶血试验,分光光度计测定光密度值并计算溶血率。结果制备的海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料具有多孔性,孔隙率达(88.6±4.5)%。倒置显微镜及SEM观察可见,细胞在材料周围及表面伸展充分、生长旺盛。材料浸提液培养的细胞具有较好的活力,其毒性分级为1级。溶血试验结果表明复合材料的溶血率为1.28%,满足医用生物材料的要求。结论本研究制备的复合材料具有较高的孔隙率和良好的生物相容性。

关键词：海藻酸钙纳米羟磷灰石复合材料骨髓基质干细胞生物相容性

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危重症患者血浆DNA水平及其对疾病严重程度和预后的预测价值

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安徽医科大学学报 2014年第9期49卷 1339-1342页

作者：蔡晓培张泓罗庆礼安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照... 详细信息

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照组。与健康对照组相比，EICU患者血浆DNA水平明显升高，各时相点血浆DNA水平升高差异均有统计学意义（P〈0．05）。EICU患者死亡组血浆DNA水平高于存活组，其中24h、48h时相点血浆DNA水平升高差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆DNA的受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积（AUC）较乳酸及APACHEⅡ评分的AUC大，其中48h血浆DNA的AUC最大为0．847（95％CI0．648～1．000）。

关键词：外周血血浆DNA 危重症预后

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氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用

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安徽医科大学学报 2014年第5期49卷 590-594页

作者：赵璇徐燕郑桂婷沈继龙安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽医科大学附属省口腔医院牙周黏膜科安徽省口腔疾病研究中心实验室合肥230032 安徽省病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/... 详细信息

目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/L浓度的氯化锂作用ADSCs24、48、72 h,用MTT法测定氯化锂对细胞增殖的作用;②ADSCs加入含0、2.5、5、10、20、40 mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7 d后测定细胞中碱性磷酸酶(AKP)的活性;③用RT-PCR法检测成骨诱导3 d后,不同浓度氯化锂作用7 d时ADSCs中β-catenin、糖原合成激酶3β、AKP的表达。结果在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5、5、10 mmol/L)促进干细胞增殖,高浓度氯化锂(20、40 mmol/L)抑制细胞增殖。5、10 mmol/L氯化锂促进ADSCs中AKP的活性,但是40 mmol/L具有明显抑制AKP活性的作用。同时,氯化锂能上调β-catenin和AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨分化,具有剂量依赖性。5 mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的最适浓度。

关键词： Wnt信号通路脂肪干细胞氯化锂增殖成骨分化

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