检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2018年第7期34卷 583-587页

作者：崔洁王旗杨小迪孙希萌汪瑞姜辉王守祥张敏魏明夏惠陈兴智沈继龙安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室安徽省人兽共患病重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院显微形态综合实验室蚌埠233030 安徽省血吸虫病防治研究所合肥230061 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069

目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH... 详细信息

目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH-GFP)速殖子模型,观察不同剂量Hy的最佳作用效果。实验分4组:(1)A组(对照组),不加Hy;(2)B组(Mφ感染RH-GFP+100μg/mL Hy);(3)C组(Mφ感染RH-GFP+200μg/mL Hy);(4)D组(Mφ感染RH-GFP+400μg/mL Hy),分别在培养1、2和3h后利用荧光显微镜和流式细胞术观察计数感染的Mφ和游离速殖子在各药物浓度及各时间点的变化;透射电镜观察虫体超微结构的变化。结果与对照组相比,随着Hy浓度的增加和用药时间的延长,Mφ内速殖子数量明显减少,游离速殖子数量也显著减少,荧光强度逐渐降低;经药物组不同浓度Hy作用后,游离/Mφ内弓形虫的比值逐渐升高,至400μg/mL剂量作用3h后开始下降,游离与胞内速殖子比例的差异在同一时间段内均有统计学意义(P<0.05),但药物作用1h或2h各实验组之间无统计学差异(P>0.05),作用3h各浓度组之间差异有统计学意义(P<0.05),各实验组同一药物浓度下在孵育1、2和3h后效果增强(P<0.05)。透射电镜观察显示,随Hy作用时间延长,虫体逐渐出现肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,空泡形成且增多、变大,胞膜断裂,内部结构溶解溢出。结论体外实验初步显示Hy呈剂量和时间依赖性地增强对Mφ内弓形虫速殖子增殖的抑制作用,可降低宿主细胞感染率,且对胞外速殖子有一定杀伤作用。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫巨噬细胞抑制

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弓形虫钙依赖蛋白激酶CDPK3多克隆抗体的制备与初步应用

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中国病原生物学杂志 2023年第8期18卷 922-926页

作者：李丹韩萌都建安然安徽医科大学基础医学院生物化学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化... 详细信息

目的制备抗弓形虫钙依赖蛋白激酶(TgCDPK3)多克隆抗体,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定基础。方法将酶切鉴定正确的原核重组表达载体pET28a-TgCDPK3转化BL21,使用IPTG诱导表达重组TgCDPK3蛋白,利用His-Ni Beads亲和层析法纯化重组pET-28a-TgCDPK3蛋白。取纯化蛋白用弗氏佐剂乳化后通过皮下多点注射免疫新西兰大白兔,一周后加强免疫,共2次。末次免疫后1周取血,分离血清,通过ELISA测定抗体效价,Western blot检测抗血清与内源天然TgCDPK3蛋白以及重组表达蛋白TgCDPK3的反应性。同时以该抗血清为一抗采用免疫荧光法进行TgCDPK3蛋白的定位。结果pET-28a-TgCDPK3转化BL21后表达相对分子质量为59×103的His-TgCDPK3蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔,制备的抗血清抗体效价为1∶64000。Western blot检测该抗血清能识别来源于弓形虫ME-49株的TgCDPK3蛋白及外源重组TgCDPK3蛋白。免疫荧光检测显示TgCDPK3定位于弓形虫速殖子膜表面。结论成功制备TgCDPK3多克隆抗体,该抗体效价高且特异性强,可用于相关基础实验,为进一步探究TgCDPK3在弓形虫中的作用奠定了基础。

关键词：弓形虫 TgCDPK3 多克隆抗体免疫荧光

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血吸虫感染对超敏性疾病与自身免疫性疾病的调控作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1155-1159页

作者：余轶婧沈继龙安徽医科大学教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽省人兽共患病重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾... 详细信息

近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾病及自身免疫性疾病的关系时发现了相关机制，并促使了对该假说的进一步研究。

关键词：自身免疫性疾病血吸虫感染调控作用超敏反应性疾病超敏性卫生假说发展中国家发达国家

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“钉钉”课堂在来华留学生人体寄生虫学课程教学中的实践与思考

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热带病与寄生虫学 2022年第6期20卷 342-345页

作者：邓胜群吴心瑜杜忆南任翠平张超刘淼安徽医科大学病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室

“钉钉”线上教学是基于教育部门引领下的“互联网+教育”新模式，具有其他线上教学方式所没有的独特优势。全球新冠肺炎疫情背景下，安徽医科大学针对来华留学生开展了“钉钉”课堂线上教学实践。本文从“钉钉”课堂在留学生人体寄生... 详细信息

“钉钉”线上教学是基于教育部门引领下的“互联网+教育”新模式，具有其他线上教学方式所没有的独特优势。全球新冠肺炎疫情背景下，安徽医科大学针对来华留学生开展了“钉钉”课堂线上教学实践。本文从“钉钉”课堂在留学生人体寄生虫学课程教学中的实践着手，总结“钉钉”课堂的优势及问题，提出线上教学建议，以期为来华留学生人体寄生虫学课程线上教学提供参考。

关键词：人体寄生虫学线上教学留学生 “钉钉”课堂

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贵阳猫源弓形虫株基因分型及毒力研究

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 150-154页

作者：孟德娣王林楼研房功思沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医学高等专科学校合肥230601 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同... 详细信息

目的观察流行于贵阳猫源弓形虫株基因型分布及其毒力。方法采自贵阳的2株猫源性刚地弓形虫株(CT-1,CT-2),经PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),在SAG1,SAG2,SAG3,BTUB,GRA6,c22-8,c29-2,L358,PK1和Apico十个位点进行基因分型;同时用弓形虫CT-1株1×103个速殖子分别腹腔注射SPF级KM、BALB/c、C57BL、ICR小鼠,观察其存活率及死亡时间,进行毒力分析。结果从贵阳分离出2株弓形虫株,在10个遗传位点经PCR-RFLP分析均为China 1型(ToxoDB#9)。通过进行不同品系小鼠毒力研究显示,CT-1虫株感染C57BL、BALB/c、KM和ICR小鼠死亡率分别为100%、100%、30%和20%,有显著差异;CT-1虫株对C57BL和BALB/c鼠的毒力显著高于KM和ICR小鼠(P<0.01)。结论流行我国的弓形虫分离株具有有限的遗传多态性;在生物多样性较为丰富的我国西南地区,弓形虫China 1仍为其优势基因型;该型CT-1虫株对不同品系小鼠的致死力具有显著性差异。

关键词：弓形虫基因分型 PCR-限制性片段长度多态性分析毒力

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流行于我国的优势基因型弓形虫株毒力及其棒状体蛋白ROP5和ROP18蛋白序列差异分析

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安徽医科大学学报 2018年第11期53卷 1695-1699页

作者：徐婷王聪罗庆礼沈继龙安徽卫生健康职业学院护理系池州247099 安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人畜共患病重点实验室合肥230032

目的分析流行于我国的优势基因型弓形虫株(WH3株和WH6株)毒力差异以及棒状体蛋白ROP5和ROP18蛋白序列差异,为研究其致病机制奠定基础。方法使用弓形虫WH3、WH6、RH和PRU虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察小鼠存活时间和存活率,... 详细信息

目的分析流行于我国的优势基因型弓形虫株(WH3株和WH6株)毒力差异以及棒状体蛋白ROP5和ROP18蛋白序列差异,为研究其致病机制奠定基础。方法使用弓形虫WH3、WH6、RH和PRU虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察小鼠存活时间和存活率,分析毒力强弱。同时PCR扩增4株弓形虫毒力相关效应分子棒状体蛋白ROP5和ROP18基因片段,核苷酸测序后将其转换为氨基酸序列,在蛋白水平上比较其序列差异。结果此4株弓形虫株中,WH3和RH株对BALB/c小鼠和昆明鼠均有较强的毒性,两种小鼠分别在感染后5~7 d和9~12 d均100%死亡;而WH6和PRU株对BALB/c小鼠和昆明鼠的毒性均较弱,两种小鼠在感染后45 d均100%存活,且在脑内检出包囊。棒状体蛋白家族毒力相关分子ROP5和ROP18的氨基酸序列分析发现,Chinese 1型虫株WH3和Wh6与PRU型虫株(Ⅱ型虫株)差异较小,而与毒力较强的RH型虫株(Ⅰ型虫株)差异较大。结论我国流行优势基因型弓形虫株的毒力相关分子ROP5和ROP18,与传统Ⅰ型、Ⅱ型弓形虫株存在差异,为我国弓形虫病的防治提供理论基础。

关键词：弓形虫毒力 ROP5基因 ROP18基因

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血吸虫副肌球蛋白疫苗的研究进展

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热带病与寄生虫学 2009年第3期7卷 170-173页

作者：童晶晶沈际佳安徽医科大学安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省病原生物学重点实验室

血吸虫病(schiscosomiasis)广泛流行于亚非、南美等76个国家和地区。目前,全球约2亿人受感染。6亿人受感染威胁。近50年来我国在血吸虫病防治工作上取得了巨大成就。全国血吸虫发病率从解放前的0.81/10万下降至2007年的0.06/10万。但近... 详细信息

血吸虫病(schiscosomiasis)广泛流行于亚非、南美等76个国家和地区。目前,全球约2亿人受感染。6亿人受感染威胁。近50年来我国在血吸虫病防治工作上取得了巨大成就。全国血吸虫发病率从解放前的0.81/10万下降至2007年的0.06/10万。但近几年钉螺感染率下降不明显或有反复,可能与水利工程设施的建设、洪水、气候变化等有关。农民和渔、船民感染率仍较高。目前治疗血吸虫病的常用药物为吡喹酮,另外还有环孢菌素A,青蒿素及其衍生物如蒿甲醚、

关键词：肌球蛋白小鼠全基因佐剂肌肉蛋白小家鼠非特异性免疫增强剂核酸疫苗日本血吸虫

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钠离子通道Na_v1.7在大鼠牙髓炎中的表达

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安徽医科大学学报 2013年第8期48卷 873-877页

作者：祝心威蒋勇沈继龙罗庆礼李炯陶然许乐朱凌安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔疾病研究中心实验室合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第四附属医院口腔科合肥230022

目的通过检测大鼠实验性牙髓炎牙髓中电压门控钠离子通道Nav1.7的表达,探讨Nav1.7的表达与牙痛的关系。方法大鼠切牙髓腔暴露,置入脂多糖(LPS)诱导产生牙髓炎。大鼠分为正常对照组和封LPS 1、3、5 d组,HE染色观察各组牙髓组织病理学改... 详细信息

目的通过检测大鼠实验性牙髓炎牙髓中电压门控钠离子通道Nav1.7的表达,探讨Nav1.7的表达与牙痛的关系。方法大鼠切牙髓腔暴露,置入脂多糖(LPS)诱导产生牙髓炎。大鼠分为正常对照组和封LPS 1、3、5 d组,HE染色观察各组牙髓组织病理学改变。通过免疫组化、ELISA和逆转录PCR(RT-PCR)方法检测大鼠正常牙髓和炎症牙髓中Nav1.7的表达。结果封LPS 1 d组,牙髓中未见明显炎症,而封LPS 3和5 d组牙髓中炎症反应程度逐渐上升。免疫组化结果显示,Nav1.7在所有牙髓中均有表达,封LPS 3和5 d组牙髓中Nav1.7表达量较正常对照组明显增加(P<0.05);ELISA结果与上述结果相似。RT-PCR结果显示,封LPS 3和5 d组牙髓中Nav1.7 mRNA较正常对照组有显著上调(P<0.05)。结论在牙髓炎中,Nav1.7可能以时序控制方式表达明显增多,且与牙髓炎炎症程度相关。鉴于Nav1.7在疼痛中发挥了重要作用,牙髓中Nav1.7的表达可能涉及牙痛的病理生理机制。

关键词：电压门控钠离子通道牙髓炎症 Nav 1 7

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黄山市乡村中老年人群无症状钩虫感染对肠道菌群和代谢的作用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 17-26页

作者：汪业彬沈续航邓国强胡赛敏汪飞张玲玲沈继龙黄山市疾病预防控制中心安徽黄山245700 安徽医科大学第一附属医院消化内科合肥230022 祁门县疾病预防控制中心安徽祁门245600 黄山区疾病预防控制中心安徽黄山245700 安徽省病原生物学重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的揭示轻度无症状钩虫感染对中老年人群肠道菌群与代谢的影响,为蠕虫-肠道菌群相互作用的研究提供参考。方法以2022年10月—11月安徽省黄山市祁门县、黄山区乡村土源性线虫病监测点居民检出钩虫感染者(改良加藤厚涂片法钩虫虫卵阳性)... 详细信息

目的揭示轻度无症状钩虫感染对中老年人群肠道菌群与代谢的影响,为蠕虫-肠道菌群相互作用的研究提供参考。方法以2022年10月—11月安徽省黄山市祁门县、黄山区乡村土源性线虫病监测点居民检出钩虫感染者(改良加藤厚涂片法钩虫虫卵阳性)为感染组,以钩虫虫卵阴性者为对照组。采集受检者新鲜粪样,提取肠道菌群DNA,扩增16S rRNA基因并测序。计算基于丰度的覆盖估计值(ACE)、PD-wholetree、Chao指数和Shannon指数等多样性指数,采用主坐标分析(PCoA)和不加权算术平均对方法(UPGMA)层次聚类分析的β多样性分析,比较感染组和对照组肠道菌群分布的差异,通过指示值分析筛选两组的指示性菌群。用甲醇-水萃取粪样中的代谢物,进行气相色谱-质谱(GC-MS)和液相色谱-质谱(LC-MS)双平台非靶向测序的代谢组学分析,用正交偏最小二乘方判别分析(OPLS-DA)建立筛选感染组与对照组差异代谢物的模型,制作火山图。根据P值、变量权重值和差异倍数筛选差异代谢产物。通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库检索差异代谢物的相关代谢通路,对差异代谢物进行富集分析。两个代谢物之间的线性相关程度采用Pearson相关分析。结果研究对象共22人,其中感染组11人,对照组11人。感染组平均年龄72.2岁,均为轻度无症状带虫者;对照组平均年龄53.1岁。测序共获得1755649条16S rRNA序列,经序列质控和拼接后聚类为1245条扩增序列变体。共鉴定出15个门22个纲58个目94个科191个属389个菌种。多样性指数分析结果显示,感染组肠道菌群多样性的ACE、PD-wholetree、Chao和Shannon指数分别为188.768、16.533、192.667和5.195,对照组分别为167.829、15.294、157.371和4.898,两组间差异均无统计学意义(t=1.266、0.952、1.266、0.962,均P>0.05)。PcoA分析结果显示,感染组与对照组的肠道菌群有不同程度的重叠,但仍可分为两个不同的类群。UPGMA层次聚类分析结果显示,感染组和对照组均先在本组中聚类,再与另一组聚类,两组间仅有1例重叠。多元变量统计分析显示,感染组的优势菌群有7个,分别为普雷沃菌、普氏粪杆菌、变栖克雷伯菌、Parasutteralla、粪球菌、梭菌UCG-014和肠杆菌;对照组的优势菌仅1种,为普通拟杆菌。指示值分析结果显示,感染组指示值居前的菌群依次是普雷沃菌、克雷伯菌、拟杆菌、小杆菌、肠杆菌、粪球菌、UCG-002、粪杆菌;对照组则依次为变形菌门的CladeⅠa和CladeⅢ、布劳特菌、另枝菌、Lachnoclostridium、嗜胆菌和苏黎世杆菌。建立的OPLS-DA模型能有效区分感染组和对照组的粪样代谢物,共鉴定出400个有差异粪样代谢物,其中156个显著上升,244个显著下降。KEGG富集分析结果显示,差异粪样代谢物显著富集在蛋白质的消化与吸收(P=0.000)、中心碳代谢(P=0.000)、矿物质吸收(P=0.000)、氨酰基-tRNA合成(P=0.000)、神经活性的配体-受体相互作用(P=0.003)等代谢通路上。粪样代谢物中delta 2-三己胺与(22E)-3β-羟基-5α-胆甾-7,22-二烯酸(r=0.935,P<0.01)等15对代谢物呈正相关关系,棕榈酰溶血磷脂酰乙醇胺与氨基戊酸甜菜碱(r=-0.500,P<0.05)等9对代谢物呈负相关关系。结论安徽省黄山市乡村中老年人群无症状钩虫感染可影响肠道菌群的组成和代谢,有利于营造有益菌的共生和定植环境。

关键词：肠道蠕虫肠道菌群 16S rRNA 代谢组学

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猪囊尾蚴cDNA文库的筛选与重组蛋白的初步鉴定

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中国人兽共患病学报 2008年第7期24卷 644-646,650页

作者：郑胜生汪学龙沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学)合肥230032

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中免疫学筛选阳性蛋白的编码基因,以期获得囊尾蚴病新的免疫学诊断候选分子。方法免疫学筛选cDNA文库,用PCR法扩增出猪囊尾蚴候选蛋白基因编码序列,T载体连接,鉴定后将其亚克隆入pET28a(+)载体中,经酶切、测序证... 详细信息

目的从猪囊尾蚴cDNA文库中免疫学筛选阳性蛋白的编码基因,以期获得囊尾蚴病新的免疫学诊断候选分子。方法免疫学筛选cDNA文库,用PCR法扩增出猪囊尾蚴候选蛋白基因编码序列,T载体连接,鉴定后将其亚克隆入pET28a(+)载体中,经酶切、测序证实正确后,转化入大肠杆菌BL21并用IPTG对该重组菌诱导表达,SDS-PAGE和Western blot方法观察表达结果。结果通过cDNA文库免疫筛选、测序和EXPASY软件分析,其一个684bp ORF DNA序列为新基因(命名为Ts1),录入号为EU009656;将Ts1基因克隆入pET28a(+)载体中诱导表达,可得到一分子量约28.0kDa融合蛋白,并能被囊尾蚴病人血清识别。结论本试验成功筛选、克隆出一个新囊尾蚴编码基因,并在原核细胞中表达,为进一步验证其免疫诊断价值奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴免疫学筛选克隆表达鉴定

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