检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：蔡亦红张爱梅李敏闻慧琴陈鹤罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥 230032

弓形虫是广泛寄生于温血动物体内的专性细胞内寄生原虫.原虫在寄生生活演化过程中获得了抑制细胞凋亡的机制,以利自身的细胞内增殖, 同时也导致虫体的全身播散和迁延.宿主蛋白定量分析显示,弓形虫不同感染阶段宿主细胞蛋白表达谱不同,...

弓形虫是广泛寄生于温血动物体内的专性细胞内寄生原虫.原虫在寄生生活演化过程中获得了抑制细胞凋亡的机制,以利自身的细胞内增殖, 同时也导致虫体的全身播散和迁延.宿主蛋白定量分析显示,弓形虫不同感染阶段宿主细胞蛋白表达谱不同,但其机制不明.miRNA具有物种特异性,可以通过特异性结合mRNA,下调蛋白质的翻译.

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弓形虫基因型Chinese 1不同毒力的分离株诱导巨噬细胞偏移应答

弓形虫基因型Chinese 1不同毒力的分离株诱导巨噬细胞偏移应答

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中国动物学会原生动物学分会第十七次学术讨论会

作者：张爱梅李敏闻慧琴陈鹤罗庆礼蔡亦红沈继龙安徽医科大学病原微生物学教研室安徽省病原生物学/人兽共患病重点实验室合肥 230032

刚地弓形虫是一种有核细胞内寄生原虫,可以感染包括人类在内的多种宿主.弓形虫急性感染可诱导强烈的Th1型免疫应答,产生促炎症细胞因子如IL-6,IFN-γ和TNF-α.已知巨噬细胞能够在周围微环境的影响下发生表型的极化,以发挥特定的功能.

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刚地弓形虫缓殖子期特异抗原BSR4的重组表达与免疫特性的初步研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 170-173页

作者：陈兴智郭凯陈勇刘丽丽沈继龙焦玉萌方强孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(***)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化... 详细信息

目的重组表达刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)Prugniaud(PRU)株缓殖子期特异抗原(BSR4)基因,并检测其免疫特性。方法将已构建的重组表达质粒pET28a(+)-BSR4转化至大肠埃希菌(***)BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。分别以慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠血清和健康小鼠血清为一抗,用蛋白质印迹(Western blottting)鉴定BSR4重组蛋白的免疫反应性。用3H-TdR掺入法检测慢性感染PRU株刚地弓形虫小鼠脾淋巴细胞对不同浓度BSR4重组蛋白的特异性增殖水平,计算刺激指数(SI)。以BSR4重组蛋白为抗原,用ELISA法检测急性(抗弓形虫IgG-IgM+)和慢性(抗弓形虫IgG+IgM-)弓形虫病患者血清,以及健康人血清,各20份,评判该蛋白的免疫反应性。结果重组质粒pET28a(+)-BSR4经IPTG诱导后表达重组蛋白BSR4,经变性、复性和纯化后获得相对分子质量(Mr)45 000的可溶性蛋白。Western blotting分析结果显示,该蛋白能被慢性弓形虫感染小鼠血清识别。脾淋巴细胞增殖试验表明,1、5和25μg/ml重组蛋白BSR4刺激感染弓形虫小鼠脾淋巴细胞的SI分别为1.13、0.88和1.17,显著高于未感染组(分别为0.46、0.24和0.49,均P<0.01)。ELISA检测结果显示,BSR4抗原能被慢性弓形虫病患者血清(IgG+IgM-)特异性识别(20/20),而不能被急性弓形虫病患者血清(IgG-IgM+)识别(0/20)。结论重组BSR4蛋白具有特异的免疫原性和免疫反应性。

关键词：刚地弓形虫缓殖子表面抗原相关蛋白4 重组表达免疫原性免疫反应性

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 374-377页

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10... 详细信息

目的探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。方法取感染旋毛虫的BALB/c小鼠小肠组织,分离成虫,配制成虫悬液(1 000条/ml)。48孔板中每孔加入100μl成虫悬液,再加入各组试剂,终浓度分别为:亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00mmol/L,1.00mmol/L SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L硫酸亚铁(FeSO4)、1.00 mmol/L SNP+1.00 mmol/L L-半胱氨酸(L-cyst)、1.00 mmol/L SNP+0.15 mmol/LFeSO4+1.00 mmol/L L-cyst,设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/L SNP+100μl肌幼虫悬液),每组设3个复孔。置37℃5%CO2培养箱中孵育,第4天收集各孔成虫,镜检并作番红染色,计算各组虫体死亡率。结果 SNP 0.02 mmol/L和0.05 mmol/L组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)%和(3.2±1.0)%,这两组与空白对照组的死亡率[(1.9±0.2)%]之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为(9.9±1.8)%、(37.7±2.5)%、(50.1±3.5)%和(80.8±1.1)%,与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。SNP浓度在0.02～1.00 mmol/L范围内与旋毛虫成虫死亡率呈线性正相关(P<0.05)。在1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00 mmol/L实验组比较,成虫死亡率均有所下降,分别为(56.5±3.7)%、(72.7±5.6)%、(74.8±2.4)%和(69.8±2.3)%。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、SNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性NO 旋毛虫成虫

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弓形虫脑炎的神经系统损伤及其病理机制

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中国人兽共患病学报 2012年第12期28卷 1247-1250,1254页

作者：王璐沙泉沈继龙安徽医科大学免疫学教研室安徽省病原生物学重点实验室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发... 详细信息

弓形虫是引起人兽共患寄生虫病的重要病原之一。人体的获得性感染主要是由于误食了含有包囊或卵囊的食物或水。在免疫力正常人体主要表现为慢性隐性感染。随着AIDS、器官移植患者、肿瘤放化疗以及大量免疫抑制剂的应用,弓形虫脑炎的发病率明显增加,对免疫机能低下患者造成严重的威胁。弓形虫由包囊内的缓殖子向速殖子转变是导致疾病发生的先决条件,进而速殖子又可以感染神经系统中的不同细胞。这些细胞在对抗弓形虫入侵的同时也会产生各种炎症因子对神经系统造成损伤。因而对弓形虫脑炎的抗炎免疫研究甚为重要。本文主要从神经系统和细胞两个方面探讨弓形虫脑炎的损伤及其机制。

关键词：弓形虫脑炎小神经胶质细胞

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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1273-1277页

作者：祁瑶宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、... 详细信息

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。

关键词： T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子 Th2优势应答血吸虫病

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抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

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安徽医科大学学报 2012年第9期47卷 1011-1014页

作者：罗庆礼周银娣沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 合肥市第一人民医院检验科合肥230032

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体... 详细信息

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。

关键词：日本血吸虫病循环抗原 14-3-3蛋白卵黄抗体

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高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

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中国人兽共患病学报 2012年第3期28卷 209-212页

作者：钟政荣徐云侠宫继勇罗庆礼闻慧琴宋晓蓉沈继龙安徽省蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 安徽省蚌埠医学院第一附属医院神经内科蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离... 详细信息

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。

关键词：日本血吸虫虫卵分离纯化活性

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不同毒力弓形虫感染对孕期小鼠巨噬细胞的极化及胎盘滋养细胞凋亡的影响

不同毒力弓形虫感染对孕期小鼠巨噬细胞的极化及胎盘滋养细胞凋亡...

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：刘婷婷蔡亦红李敏余莉都建汪学龙罗庆礼沈继龙张倩刘丽丽徐修才陈鹤王花孔兰婷王为为张爱梅安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室

目的：本文研究了流行于我国的Chinese Ⅰ型弓形虫感染孕中期小鼠后，小鼠巨噬细胞的极化改变及所导致的Th1/Th2偏移，以及对胎盘滋养层细胞凋亡带来的影响。　　方法：体内试验：ICR小鼠90只于妊娠第8天随机分别腹腔注射Chinese Ⅰ型或... 详细信息

目的：本文研究了流行于我国的Chinese Ⅰ型弓形虫感染孕中期小鼠后，小鼠巨噬细胞的极化改变及所导致的Th1/Th2偏移，以及对胎盘滋养层细胞凋亡带来的影响。
　　方法：体内试验：ICR小鼠90只于妊娠第8天随机分别腹腔注射Chinese Ⅰ型或Chinese Ⅱ型弓形虫速殖子200个0.1ml各30只，另外30只注射等量的无菌PBS做对照。分别于妊娠第10、12、14、16、18天颈椎脱臼处死小鼠，取腹腔巨噬细胞和胎盘。部分胎盘匀浆上清和巨噬细胞3h贴壁换液培养24h后的上清测Th1/Th2细胞因子，部分胎盘和巨噬细胞提RNA荧光定量PCR测iNOs、TNF-α、IFN-γ、Fizzi、Yml、Arg-1、IL-4、IL-10、IL-12p40。巨噬细胞蛋白用Westem-blotting验证iNOs和Arg-1。部分胎盘4％甲醛固定石蜡包埋HE染色和TUNEL。部分胎盘用流式Annexin V-EGFP测凋亡。巨噬细胞用流式抗体标记测M1、M2极化情况。巨噬细胞上清测尿素和NO。体外实验：孕鼠于孕1214天无菌操作取胎盘滋养层细胞和巨噬细胞Transwell共培养，速殖子与巨噬细胞1：1分别感染Chinese I型和Chinese II型虫株，设一组不加速殖子做对照.分别于2h, 6h, 12h. 24h收集上清和巨噬细胞，滋养层细胞做流式Annexin V-EGFP测凋亡和固定做TUNEL。巨噬细胞的上清、RNA、蛋白检测同体内实验。
　　结果：三组胎盘随着妊娠天数的增加凋亡率都上升，但同时间相比，Chinese I型组凋亡率高于Chinese II型，Chinese II型又高于对照组。Chinese II型虫株感染的小鼠腹腔巨噬细胞在孕14天开始出现高水平的NO，孕16天达高峰，孕18天消退：其他两组无NO产出。体外实验中，2h, 6h. 12h.24h的巨噬细胞上清中，Chinese I型感染的各时间点上清都出现高水平的尿素，即精氨酸酶的活性高，而Chinese II型感染的上清则比对照组稍高一点点。
　　结论：Chinese I型虫株感染后，孕鼠巨噬细胞向M2型极化，致体内免疫偏向Th2型，使得弓形虫速殖子大量繁殖，破坏宿主细胞，各种原因(营养供应或生存的稳态环境遭破坏)滋养层细胞凋亡增加;而ChineseII型感染后，孕鼠巨噬细胞向M1型极化，致体内免疫偏向Thl型，原先的妊娠Th2型的环境被迫转向Thl型，大量炎症介质产生，机体变得不耐受，也使滋养层细胞凋亡增加。

关键词：弓形虫巨噬细胞胎盘滋养层细胞凋亡孕期感染

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