检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 454-456页

作者：钟政荣沈继龙胡元生李小月罗庆礼蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗... 详细信息

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗脱方法纯化的目的蛋白条带单一,浓度达3mg/ml,而柱层析法纯化的蛋白浓度仅为1mg/ml。Western blot证实纯化目的蛋白的特异性。结论两次切胶、两次电洗脱法可获得高纯度、高特异性的目的蛋白,不失为一种经济有效的蛋白纯化方法。

关键词：血吸虫 14-3-3蛋白纯化鉴定

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海藻酸钙-纳米羟磷灰石骨修复材料的制备及部分生物相容性测定

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华西口腔医学杂志 2014年第1期32卷 27-31页

作者：王彦梅何家才李全利沈际佳安徽医科大学附属口腔医院颌面外科安徽省口腔临床医学重点学科安徽省口腔疾病研究省级实验室中央与地方共建口腔医学中心实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓... 详细信息

目的制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,探讨其作为骨修复材料的可行性。方法应用化学交联及冷冻干燥技术制备海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料,通过扫描电镜(SEM)和X光衍射(XRD)对材料性能进行表征,液体置换法测定孔隙率。将第5代骨髓基质干细胞(BMSCs)接种至材料上,倒置显微镜及SEM观察细胞生长情况。材料浸提液与BMSCs共培养,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测接种后1、3、5 d的相对增殖率(RGR),并评估毒性分级。新鲜犬血加入材料浸提液进行溶血试验,分光光度计测定光密度值并计算溶血率。结果制备的海藻酸钙-纳米羟磷灰石复合材料具有多孔性,孔隙率达(88.6±4.5)%。倒置显微镜及SEM观察可见,细胞在材料周围及表面伸展充分、生长旺盛。材料浸提液培养的细胞具有较好的活力,其毒性分级为1级。溶血试验结果表明复合材料的溶血率为1.28%,满足医用生物材料的要求。结论本研究制备的复合材料具有较高的孔隙率和良好的生物相容性。

关键词：海藻酸钙纳米羟磷灰石复合材料骨髓基质干细胞生物相容性

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日本血吸虫信号蛋白14-3-3在毕赤酵母菌中的分泌表达及其抗原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第1期25卷 12-16页

作者：郑美娟李敏王志成罗飞罗庆礼储德勇李丛磊沈继龙蚌埠医学院生物化学与分子生物学实验室蚌埠233003 安徽医科大学病原生物学教研室教育部与安徽省共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,... 详细信息

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB。测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析。用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性。结果目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段。经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000。Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性。间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%。与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为9.3%。以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在毕赤酵母菌中成功表达了Sj14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好。

关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3 毕赤酵母菌真核表达

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血清IL-6与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值

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安徽医科大学学报 2020年第8期55卷 1265-1270页

作者：董晓玉马晴晴殷俊李家斌郑美娟沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省病原生物学重点实验室、安徽高校人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽医科大学附属巢湖医院检验科巢湖238000 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院感染科合肥230022

目的探讨血清白细胞介素6(IL-6)水平与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值。方法选取患者121例,分为两组:全身炎症反应综合征(SIRS)患者(95例,包括非脓毒症患者19例,脓毒症患者56例,脓毒症休克患者20例)、局部感染组(2... 详细信息

目的探讨血清白细胞介素6(IL-6)水平与中性粒细胞表型及吞噬力关系在脓毒症分期中的诊断价值。方法选取患者121例,分为两组:全身炎症反应综合征(SIRS)患者(95例,包括非脓毒症患者19例,脓毒症患者56例,脓毒症休克患者20例)、局部感染组(26例)以及20例健康者为对照组。检测患者血清细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、降钙素原(PCT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平及白细胞(WBC)计数;及外周血中性粒细胞(PBNs)表面簇分化抗原(CD)62L、CD64和CD11b分子及其吞噬功能。结果SIRS组患者血清IL-6和IL-10水平最高(P<0.01),其次为局部感染组和正常对照组(P<0.01)。脓毒症休克组IL-6水平最高(P<0.01),其次为脓毒症组和非脓毒症组(P<0.01)。脓毒症休克组与脓毒症组血清IL-10水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与低IL-6组比较,高IL-6组脓毒症患者血清hsCRP、PCT和IL-10水平亦见增高(P<0.01),PBNs CD11b指数和CD64指数也同时增高(P<0.01),高IL-6组患者中性粒细胞吞噬功能高于低IL-6组(P<0.01)。结论脓毒症患者的血清IL-6水平随着疾病进展而逐渐升高,脓毒症休克患者的血清IL-6水平最高,其次是脓毒症和非脓毒症患者。高IL-6水平脓毒症患者中性粒细胞吞噬作用增强,同时高表达CD64和CD11b。血清IL-6水平与脓毒症的诊断和分期密切相关,动态监测脓毒症患者血清IL-6可为临床诊断及分期、疾病进展提供参考依据,值得在临床推广。

关键词： IL-6 IL-10 CD64 CD11b CD62L 脓毒症

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高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

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中国人兽共患病学报 2012年第3期28卷 209-212页

作者：钟政荣徐云侠宫继勇罗庆礼闻慧琴宋晓蓉沈继龙安徽省蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 安徽省蚌埠医学院第一附属医院神经内科蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离... 详细信息

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。

关键词：日本血吸虫虫卵分离纯化活性

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血清HSP90α和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及预后价值

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安徽医科大学学报 2022年第7期57卷 1034-1040页

作者：董晓玉钟涛叶元滋郑美娟沈继龙安徽医科大学附属巢湖医院检验科巢湖238000 安徽医科大学第一附属医院输血科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院病理科合肥230022 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学重点实验室合肥230032

目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清HSP90α水平的差异;分析HSP90... 详细信息

目的探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法收集109例肺癌患者为实验组;36例肺部炎症患者为参照组;以及30例健康体检者为对照组,比较三组间血清HSP90α水平的差异;分析HSP90α与临床参数的关系;从癌症基因图谱(TCGA)数据库下载数据分析HSP90AA1在癌组织中的表达,同时探讨HSP90AA1与患者临床病理资料的相关性及对预后的影响。结果实验组血清HSP90α水平高于参照组和对照组(P<0.05);HSP90α诊断肺癌的ROC曲线下面积是0.898(P<0.05);肺鳞癌组、小细胞癌组HSP90α表达高于腺癌组(P<0.05);肺癌患者治疗缓解期HSP90α表达降低,病情进展期HSP90α表达显著升高(P<0.05);TCGA数据分析显示HSP90AA1表达癌组织高于癌旁组织,且肺鳞癌癌组织HSP90AA1表达高于肺腺癌(P<0.05);HSP90AA1表达与肺癌患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤残余均无关;K-M生存分析单因素、多因素Cox回归分析显示HSP90AA1高表达降低肺癌患者的整体生存率(OS),HSP90AA1表达水平是肺癌患者的独立预后因素。结论肺癌患者血清HSP90α及癌组织HSP90AA1水平升高,癌组织高表达HSP90AA1是患者的独立预后因素;HSP90α和HSP90AA1可作为肺癌的一种辅助诊断指标;其表达水平对肺癌患者疗效观察及生存状态预测具有临床应用价值。

关键词：肺癌热休克蛋白90a HSP90AA1 腺癌鳞癌

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基于CRISPR/Cas9技术的弓形虫rop16_(I/III)缺陷虫株的构建及毒力鉴定

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中国人兽共患病学报 2017年第1期33卷 22-26,31页

作者：王聪程维晟刘芳张焰 FaustinaPappoe 罗庆礼闻慧琴邓芳徐元宏沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学附属省立肿瘤医院检验科合肥230001

目的构建并鉴定弓形虫RH株rop16_(I/III)缺陷虫株。方法利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株。运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒。此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段。pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株。PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株。吉姆萨染色分别比较RH株和RHΔrop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵。并比较RH株和RHΔrop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率。结果经测序比对,成功构建了pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒。PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RHΔrop16株有Rop16_(I/III)蛋白表达。吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RHΔrop16虫株。毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16_(I/III)缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10d均全部死亡,两组间无统计学差异。结论利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16_(I/III)缺陷的弓形虫RH虫株,rop16_(I/III)基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响。

关键词：刚地弓形虫 rop16(I/III) CRISPR/Cas9 RH株基因缺陷

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人巨噬细胞金属弹力酶催化域基因的克隆及表达

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安徽医科大学学报 2007年第3期42卷 269-271页

作者：鲍德明胡乃中沈际佳石海许建明安徽医科大学第一附属医院消化内科安徽省高校消化疾病重点实验室合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的克隆人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)基因,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达HMEcd基因融合蛋白。方法用RT-PCR方法提取人胃癌组织总RNA并扩增出HMEcd cDNA,克隆入pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-HM Ecd,双酶切鉴定及DNA测序... 详细信息

目的克隆人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)基因,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达HMEcd基因融合蛋白。方法用RT-PCR方法提取人胃癌组织总RNA并扩增出HMEcd cDNA,克隆入pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-HM Ecd,双酶切鉴定及DNA测序正确后再将HMEcd cDNA亚克隆至pET-28a(+)载体,构建原核表达载体pET-28a(+)-HM Ecd,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果RT-PCR获得预期的HMEcd cDNA,双酶切鉴定及DNA测序证实将HM Ecd基因分别正确插入克隆载体和原核表达载体中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定证实表达出HMEcd融合蛋白。结论成功表达出HMEcd基因融合蛋白,为进一步功能实验研究奠定基础。

关键词：基质金属蛋白酶类基因表达克隆,分子

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危重症患者血浆DNA水平及其对疾病严重程度和预后的预测价值

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安徽医科大学学报 2014年第9期49卷 1339-1342页

作者：蔡晓培张泓罗庆礼安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照... 详细信息

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照组。与健康对照组相比，EICU患者血浆DNA水平明显升高，各时相点血浆DNA水平升高差异均有统计学意义（P〈0．05）。EICU患者死亡组血浆DNA水平高于存活组，其中24h、48h时相点血浆DNA水平升高差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆DNA的受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积（AUC）较乳酸及APACHEⅡ评分的AUC大，其中48h血浆DNA的AUC最大为0．847（95％CI0．648～1．000）。

关键词：外周血血浆DNA 危重症预后

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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 316-318页

作者：钟政荣沈继龙汪学龙胡元生沈继录王家传李小月安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 详细信息

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

关键词：重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体制备鉴定分布作用机制

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