检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2014年第9期49卷 1339-1342页

作者：蔡晓培张泓罗庆礼安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照... 详细信息

摘要采用实时荧光定量PCR技术对132例急诊重症监扩室（EICU）患者血浆DNA水平进行定量检测，根据预后将患者分为存活组（95例）、死亡组（37例），分别检测患者入EICU后即刻、24h、48h及1周血浆DNA的量；另选30例健康体检者为健康对照组。与健康对照组相比，EICU患者血浆DNA水平明显升高，各时相点血浆DNA水平升高差异均有统计学意义（P〈0．05）。EICU患者死亡组血浆DNA水平高于存活组，其中24h、48h时相点血浆DNA水平升高差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆DNA的受试者工作特征曲线（ROC）曲线下面积（AUC）较乳酸及APACHEⅡ评分的AUC大，其中48h血浆DNA的AUC最大为0．847（95％CI0．648～1．000）。

关键词：外周血血浆DNA 危重症预后

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调节性T细胞在poly I:C/D-GalN诱发的肝脏损伤中的免疫调节作用

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中国免疫学杂志 2014年第1期30卷 24-29页

作者：宋静王黎丽侯昕沈际佳安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230001 中国科学技术大学生命科学实验中心合肥230027

目的:探讨调节性T细胞在Polyinosinic-polycytidylic acid(poly I:C)/D-galactosamine(D-GalN)诱发的急性肝脏损伤中的作用及其机制。方法:建立poly I:C/D-GalN诱发的爆发性肝炎小鼠模型,观察比较野生型C57BL/6小鼠、Rag1-/-小鼠(C57BL/6背景)和过继转输调节性T细胞的Rag1-/-小鼠的血清转氨酶活性;肝脏HE染色评价小鼠肝组织病理形态学改变;实时荧光定量PCR检测肝脏TNF-α和IFN-γmRNA水平;ELISA检测血清IFN-γ和TNF-α蛋白水平。结果:poly I:C/D-GalN联合注射后,与野生型小鼠相比,Rag1-/-小鼠血清转氨酶水平明显增高,肝脏损伤更加严重,炎性因子mRNA水平和蛋白水平都显著增加。给Rag1-/-小鼠过继转输CD25+细胞后能明显降低poly I:C/D-GalN诱导的肝脏损伤。结论:调节性T细胞对poly I:C/D-GalN诱发的肝脏损伤有抑制作用,提示调节性T细胞可以负向调节天然免疫细胞。

关键词：调节性T细胞 poly I C D-GalN 急性肝损伤 IFN-γ TNF-α

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氯化锂介导经典Wnt/β-catenin信号通路在大鼠脂肪干细胞增殖和成骨中的作用

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安徽医科大学学报 2014年第5期49卷 590-594页

作者：赵璇徐燕郑桂婷沈继龙安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽医科大学附属省口腔医院牙周黏膜科安徽省口腔疾病研究中心实验室合肥230032 安徽省病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/... 详细信息

目的探讨在体外生长环境下不同浓度氯化锂对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和成骨分化的作用及其可能的机制。方法①从3周龄SD大鼠腹股沟脂垫分离出脂肪组织,使用0.1%Ⅰ型胶原酶消化后置于含10%胎牛血清DMEM培养,以0、2.5、5、10、20、40 mmol/L浓度的氯化锂作用ADSCs24、48、72 h,用MTT法测定氯化锂对细胞增殖的作用;②ADSCs加入含0、2.5、5、10、20、40 mmol/L氯化锂的成骨培养液中培养7 d后测定细胞中碱性磷酸酶(AKP)的活性;③用RT-PCR法检测成骨诱导3 d后,不同浓度氯化锂作用7 d时ADSCs中β-catenin、糖原合成激酶3β、AKP的表达。结果在体外环境培养下,低浓度氯化锂(2.5、5、10 mmol/L)促进干细胞增殖,高浓度氯化锂(20、40 mmol/L)抑制细胞增殖。5、10 mmol/L氯化锂促进ADSCs中AKP的活性,但是40 mmol/L具有明显抑制AKP活性的作用。同时,氯化锂能上调β-catenin和AKP的表达。结论氯化锂在体外对大鼠ADSCs增殖有双重影响,并且促进AKP活性和ADSCs成骨分化,具有剂量依赖性。5 mmol/L浓度的氯化锂可作为促进大鼠ADSCs增殖和成骨分化的最适浓度。

关键词： Wnt信号通路脂肪干细胞氯化锂增殖成骨分化

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匹多莫德抑制地塞米松诱导的小鼠隐性弓形虫感染的活化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第5期31卷 385-389页

作者：王为为霍星星孔兰婷张倩陈鹤李敏沈继龙安徽病原生物学省级实验室.安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察匹多莫德(PT)对经地塞米松(Dem)诱导小鼠隐性弓形虫感染活化的抑制作用。方法96只BALB/c小鼠每鼠灌胃感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,感染后4周随机均分为3组:Dem组(A组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃生理盐水200μl... 详细信息

目的观察匹多莫德(PT)对经地塞米松(Dem)诱导小鼠隐性弓形虫感染活化的抑制作用。方法96只BALB/c小鼠每鼠灌胃感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,感染后4周随机均分为3组:Dem组(A组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃生理盐水200μl;Dem+PT组(B组)腹腔注射地塞米松6 mg/(kg·d),同时灌胃匹多莫德100 mg/(kg·d);对照组(C组)腹腔注射生理盐水200μl,同时灌胃生理盐水200μl。上述药物使用时均溶于200μl生理盐水中。3组小鼠均连续注射和灌胃5周。自治疗开始后每周各组随机处死3只小鼠,取小鼠眼窦血、脑组织和脾组织备用。荧光定量PCR检测小鼠虫血症出现时间,以及脑组织虫荷和弓形虫DNA拷贝数。流式细胞术(FCM)对小鼠脾单个核细胞Th1、Th2和调节性T细胞(Treg)进行检测。使用微量样本多指标流式蛋白定量术试剂盒(CBA)检测小鼠血清中Th1和Th2类细胞因子的表达情况。结果 A组小鼠在受治第2周时,虫血症再次出现,5周内有50%小鼠出现虫血症,死亡17只。而B组小鼠在受治第3周时,虫血症再次出现,5周内有25%小鼠出现虫血症,死亡7只。C组小鼠未见虫血症出现,生存状态良好。A组小鼠连续给予Dem 21 d后,脑组织中弓形虫DNA拷贝数为(209±12)×109,而B组接受PT治疗后弓形虫DNA拷贝数为(62±10)×109,前者显著高于后者(P<0.01);FCM检测显示,小鼠给予Dem 21 d后,小鼠脾脏Th1、Th2和Treg细胞占CD4+细胞百分比,A组的分别为(4.0±1.5)%、(0.6±0.1)%和(5.0±0.9)%,B组分别为(6.1±1.0)%、(0.5±0.2)%和(7.0±1.2)%,A组和B组小鼠Th1和Treg细胞百分比差异有统计学意义(P<0.01)。血清细胞因子检测结果显示,小鼠血清Th1型细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),A组的[(2.2±0.7)pg/ml、(20.1±5.0)pg/ml]均低于B组的[(3.6±0.6)pg/ml、(32.0±8.0)pg/ml](P<0.01)。Th2型相关细胞因子白细胞介素-4(IL-4)和IL-10,A组的[(2.6±0.4)pg/ml、(39.0±6.0)pg/ml]与B组的[(2.7±0.7)pg/ml、(40.0±8.0)pg/ml]相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论匹多莫德能够显著激活地塞米松诱导的免疫抑制,抑制地塞米松诱导的小鼠弓形虫隐性感染活化,其免疫调节机制有Th1和Treg细胞的参与。

关键词：弓形虫隐性感染匹多莫德地塞米松

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慢性弓形虫感染小鼠小胶质细胞的活化与炎症因子的表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第3期31卷 176-179,184页

作者：张义华王璐汪学龙沈继龙张倩孔兰婷王为为陈鹤安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽医科大学免疫学教研室合肥230032

目的探讨慢性弓形虫感染小鼠小胶质细胞的活化与炎症因子的表达。方法将30只ICR小鼠随机分成慢性弓形虫感染组和健康对照组,每组15只,感染组小鼠每只经口服感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,对照组喂饮等量生理盐水0.3 ml。感染后60 d,分离... 详细信息

目的探讨慢性弓形虫感染小鼠小胶质细胞的活化与炎症因子的表达。方法将30只ICR小鼠随机分成慢性弓形虫感染组和健康对照组,每组15只,感染组小鼠每只经口服感染弓形虫TgCtwh6株包囊30个,对照组喂饮等量生理盐水0.3 ml。感染后60 d,分离脑组织,应用免疫组化法分析小胶质细胞的数量和形态变化,逆转录PCR(RT-PCR)检测脑组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和α肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,免疫荧光标记和蛋白质印迹法(Western blotting)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果免疫组化法检测结果显示,感染组小鼠的皮层区和海马区的离子钙接头分子(Iba-1)阳性细胞数(即小胶质细胞)(16.5±0.8和17.9±1.1)显著高于对照组(8.4±0.2和10.3±0.8)(P<0.05),且细胞呈明显活化状态,胞体增大,分支增多。RT-PCR结果显示,弓形虫感染组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA转录水平(0.862±0.169、0.407±0.158和0.305±0.073)均显著高于对照组(0.149±0.030、0.037±0.008和0.001±0.001)(P<0.05)。慢性弓形虫感染小鼠的脑组织中iNOS蛋白表达水平(0.252±0.164)显著高于对照组(0.043±0.004)(P<0.05)。免疫荧光标记结果显示,iNOS蛋白均由小胶质细胞表达。结论慢性弓形虫感染小鼠脑内小胶质细胞显著活化,IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子和iNOS水平升高。

关键词：刚地弓形虫慢性感染小胶质细胞炎症因子

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西咪替丁伍用弓形虫ROP2蛋白免疫小鼠诱导免疫反应的初步研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 99-103页

作者：陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察西咪替丁伍用弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)免疫小鼠诱导的免疫反应。方法 80只BALB/c小鼠随机分为A组、B组、C组和D组,各组分别经皮下注射PBS、弓形虫ROP2蛋白+PBS、弓形虫ROP2蛋白+福氏佐剂和弓形虫ROP2蛋白+西咪替丁[200 mg/(kg.... 详细信息

目的观察西咪替丁伍用弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)免疫小鼠诱导的免疫反应。方法 80只BALB/c小鼠随机分为A组、B组、C组和D组,各组分别经皮下注射PBS、弓形虫ROP2蛋白+PBS、弓形虫ROP2蛋白+福氏佐剂和弓形虫ROP2蛋白+西咪替丁[200 mg/(kg.d)]免疫BALB/c小鼠,每次ROP2蛋白免疫剂量为100μg/只(200μl),共免疫3次,每次间隔2周。于首次免疫前和每次免疫后2周,采血分离血清。末次免疫后2周,每组小鼠随机处死8只,无菌分离脾细胞,CCK-8法测定淋巴细胞增殖活性。流式细胞术检测小鼠全血T细胞亚群。ELISA法检测小鼠血清IgG抗体和γ干扰素(IFN-γ)水平。各组剩余12只小鼠经腹腔感染弓形虫RH株速殖子(5×104个/鼠),观察攻击感染后小鼠生存时间。结果末次免疫后2周,A、B、C和D组小鼠的血清IFN-γ水平分别为(659.750±239.962)、(872.750±197.011)、(1 600.750±480.680)和(1 494.375±451.655)pg/ml,血清特异性IgG抗体水平分别为0.504±0.078、0.592±0.160、1.068±0.111和1.046±0.147,脾细胞增殖活性分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,外周血CD4+/CD8+比值分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,C和D组均显著高于A和B组(前3个指标,均P<0.01;后者,均P<0.05),D组与C组的差异均无统计学意义(P>0.05)。各免疫组弓形虫攻击感染后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为96、108、132和132 h,C组和D组小鼠平均存活时间显著长于A组和B组(P<0.05),D组与C组的相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论西咪替丁可增强ROP2蛋白诱导的细胞免疫和体液免疫反应。

关键词：刚地弓形虫西咪替丁棒状体蛋白2 免疫反应蛋白疫苗

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某医院2012-2013年242株肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶及整合子耐药基因检测

某医院2012-2013年242株肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶及整合子耐药基...

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纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛

作者：郭普贺晓珊梅传忠李兴武刘双成沈继龙蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠医学院医学检验系安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原学教研室

目的了解肺炎克雷伯菌主要的β-内酰胺酶和整合子耐药基因型,明确其耐药特性。方法回顾性分析我院2012年1月至2013年5月临床分离的242株肺炎克雷伯菌药敏结果,聚合酶链反应(PCR)检测其β-内酰胺酶及整合子耐药基因。结果242株肺炎克雷... 详细信息

目的了解肺炎克雷伯菌主要的β-内酰胺酶和整合子耐药基因型,明确其耐药特性。方法回顾性分析我院2012年1月至2013年5月临床分离的242株肺炎克雷伯菌药敏结果,聚合酶链反应(PCR)检测其β-内酰胺酶及整合子耐药基因。结果242株肺炎克雷伯菌对16种抗生素存在不同程度的耐药,其中氨曲南、头孢唑啉、氨苄西林/舒巴坦、头孢曲松和头孢他啶耐药率较高,分别为76.86%、65.70%、63.64%、62.40%和59.92%;亚胺培南、丁胺卡那、厄他培南和哌拉西林/他唑巴坦较为敏感,分别为17.77%、18.88%、18.88%和23.55%。PCR结果显示,ESBLs基因阳性155株,占64.05%,主要为TEM型和SHV型,两者均存在的菌株有114株,占产ESBLs基因菌株的73.55%(114/155)。其次为KPC基因86株,占35.54%;此外AmpC基因43株,占17.77%,全部为DHA型。整合子基因128株,占52.89%,以整合子1(intI-1)为主,共检出120株,占49.59%。结论我院肺炎克雷伯菌耐药情况严重,主要的耐药基因型为TEM型、SHV型、KPC和intI-1。

关键词：肺炎克雷伯菌耐药基因聚合酶链反应(PCR)

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弓形虫ESA诱导小鼠产生的CD8^+ T细胞对早期黑色素瘤生长的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第2期31卷 95-98页

作者：焦玉萌方强夏惠王雪梅陶志勇陈兴智沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三... 详细信息

目的观察弓形虫排泄分泌抗原(TgESA)对B16F10黑色素瘤接种小鼠CD8+T细胞的影响,以及CD8+T细胞对B16F10黑色素瘤的作用。方法取RH株弓形虫速殖子体外培养12 h后,收集培养液,离心取上清,获得弓形虫ESA。15只C57BL/6小鼠随机分为A、B和C三组(每组5只)。B组和C组每鼠右腋窝皮下接种B16F10黑色素瘤细胞2×105个,A组注射等量无菌PBS。接种后第7天,C组每只小鼠腹腔注射TgESA 100μl。接种后第13天,处死小鼠,无菌取脾。流式细胞仪检测各组小鼠CD3+CD8+T细胞所占脾细胞比例;采用免疫磁珠分选B组和C组脾细胞中的CD8+T细胞,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测两组CD8+T细胞对B16F10细胞的杀伤作用,分别设效靶细胞比为2.5∶1、5∶1和10∶1。另取30只C57BL/6小鼠随机分为E、F和G三组(每组10只),每鼠接种B16F10细胞2×105个。接种同时,F组和G组小鼠分别尾静脉注射分离自B组和C组的CD8+T细胞(2×105个/鼠)。观察小鼠瘤体生长情况,记录各组小鼠死亡数和死亡时间,共观察35 d。结果流式细胞仪检测结果显示,A、B和C组脾脏CD3+CD8+T细胞占脾细胞的比例分别为(13.86±0.13)%、(14.18±0.27)%和(15.74±0.28)%,C组显著高于其他两组(P<0.05)。LDH释放试验结果显示,不同效靶细胞比时,C组的CD8+T细胞杀伤活性均显著高于B组(均P<0.05)。G组的平均出瘤时间[(14.9±1.2)d]晚于F组[(11.9±0.7)d]和E组[(9.4±1.2)d](P<0.05)。3组小鼠自出瘤后瘤体均不断增长,但增长速度无明显差异,G组的瘤体面积始终小于其他两组(均P<0.05)。E、F和G组小鼠分别于B16F10细胞接种后第26、29和30天开始出现死亡,至观察终点(第35天),3组小鼠存活的数量分别为3、5和7只。结论TgESA可上调B16F10黑色素瘤小鼠CD8+T细胞的数量和杀伤功能,上调的CD8+T细胞具有早期延缓肿瘤生长的作用。

关键词：刚地弓形虫排泄分泌抗原 CD8+ T细胞黑色素瘤

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刚地弓形虫基因型和与基因型相关的致病机制研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2013年第4期31卷 319-324页

作者：王林沈继龙安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,对人类健康和畜牧业发展造成严重危害。弓形虫属仅有刚地弓形虫一种,经多重酶切电泳分析(MLEE),PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和微卫星分型... 详细信息

弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的呈世界性分布的人兽共患寄生虫病,对人类健康和畜牧业发展造成严重危害。弓形虫属仅有刚地弓形虫一种,经多重酶切电泳分析(MLEE),PCR-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)和微卫星分型等研究发现,各地刚地弓形虫具有丰富的遗传多态性。已知不同基因型弓形虫株的致病机制不同。本文对世界各地区弓形虫株基因型及基因型与毒力间的相关性研究进展进行了综述。

关键词：刚地弓形虫基因型种群结构毒力

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三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 570-574页

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-r... 详细信息

目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。

关键词：弓形虫弗氏佐剂匹多莫德西咪替丁 ROP2蛋白免疫佐剂

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