检索结果-内蒙古大学图书馆

国际医学寄生虫病杂志 2007年第2期34卷 85-88页

作者：乔增培沈继龙安徽医科大学人兽共患病研究所、安徽医科大学病原生物学教研室、省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032

弓形虫是一种专性有核细胞内的寄生原虫，可以感染包括人类在内的几乎所有温血动物。弓形虫不同虫株基因组之间存在微小差异，这可能是导致不同虫株对小鼠急性毒力差异的原因。近年来，对弓形虫基因组的研究主要集中在一些编码毒力相关... 详细信息

弓形虫是一种专性有核细胞内的寄生原虫，可以感染包括人类在内的几乎所有温血动物。弓形虫不同虫株基因组之间存在微小差异，这可能是导致不同虫株对小鼠急性毒力差异的原因。近年来，对弓形虫基因组的研究主要集中在一些编码毒力相关的重要的抗原基因。各分离株基因组之间只有1％。2％的差异，这种差异在各不同虫株间较稳定。弓形虫株大多数属于Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型中的一种，只有Ⅰ型是公认的小鼠强毒株，其余两型属弱毒株。目前的观察认为弓形虫基因组的变异度要比表型的变异度小。该文综述了与虫株毒力表型密切相关的基因，如SAG1，SAG2和SAG5等。越来越多的研究表明，造成弓形虫表型差异的因素并非单一的，而是若干基因共同作用的结果。

关键词：弓形虫基因组毒力

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增强型绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫成虫体内的瞬时表达

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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 18-21页

作者：袁小松沈继龙汪学龙董慧芬蒋明森安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 武汉大学医学院病原生物学教研室

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blo... 详细信息

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blot验证转基因在成虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在成虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功的扩增出760bp和276bp的预期大小的片断,Western-blot证实了EGFP基因在成虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察到,EGFP主要定位在成虫的皮层,口吸盘和尾部尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫成虫体内并获得表达,为转基因血吸虫和基因功能的研究打下基础。

关键词：电穿孔技术增强型绿色荧光蛋白转基因血吸虫

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重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3不同剂量对免疫保护性的影响

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中华预防医学杂志 2006年第4期40卷 248-252页

作者：刘庆中胡元生沈继龙江宝玲汪学龙温州医学院附属第一医院检验科 325000 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;... 详细信息

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB／c小鼠并进行攻击感染实验。在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率。并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体。结果成功表达出rSj14- 3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28．20％、第2组43．10％、第3组40．00％;各组的减卵率分别为(按以上组序)41．80％、57．50％、55．70％。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6．8、第2组t=8．7、第3组t=7．3,各组P值均<0．01;减卵率:第1组t=11．23、第2组t=11．54、第3组t=7．99,各组P值均<0．01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:X2=8．96,P<0．05;减卵率:X2=15．69,P<0．05)、第1组与第3组间(减虫率:X2=6．52,P<0．05;减卵率:X2=12．52,P<0．05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:X2=1．20,P>0．05;减卵率:X2=0．93,P>0．05)。各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显。结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好。

关键词：血吸虫,日本 RGS蛋白质类重组蛋白质类抗体生成

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重组Sj14-3-3,SjGST及mIL-12/聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)缓释微球对小鼠免疫保护性的研究

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1017-1021页

作者：罗飞沈继龙王志成李敏郑美娟罗庆礼袁小松储德勇教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的研究聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球给药系统在血吸虫病分子疫苗中的应用,并探讨rSj14-3-3,rSjGST及mIL-12作为疫苗的协同作用,及mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th)在抗血吸虫病中的作用。方法从pET28a/Sj14-3-3和GST重组质... 详细信息

目的研究聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球给药系统在血吸虫病分子疫苗中的应用,并探讨rSj14-3-3,rSjGST及mIL-12作为疫苗的协同作用,及mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th)在抗血吸虫病中的作用。方法从pET28a/Sj14-3-3和GST重组质粒中诱导表达rSj14-3-3及rSjGST,过柱纯化。构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)mIL-12,并共同包入PLGA缓释微球。对制备的微球进行体外释放,观察其释放速度。分组免疫BALB/c小鼠,进行尾蚴攻击感染实验。在攻击感染6w后,剖杀小鼠,计算各组的减虫率。结果各组的减虫率:单独rSj14-3-3组为27.6%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12组34.9%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组37.5%,rSj14-3-3与rSjGST混合后+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组38.8%;各组减卵率分别为(按以上组序)35.3%,49.1%,50.5%,和43.1%。结论PLGA微球给药系统可诱导并调节体液与细胞免疫从而增强了疫苗的抗感染,抗生殖作用。但rSj14-3-3和rSjGST抗原之间未表现出协同作用。mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th),在BALB/c鼠抗血吸虫攻击感染发挥作用,增强了疫苗保护作用。

关键词：日本血吸虫分子疫苗 PLGA 免疫

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多重聚合酶链反应-微流芯片检测人血小板抗原系统基因型方法的建立与应用

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中华检验医学杂志 2006年第7期29卷 601-603页

作者：卞茂红刘淼杨鹏黄建尧许伟刘淑均合肥安徽医科大学第一附属医院输血科 230022 安徽医科大学病原生物学教研室合肥安徽医科大学第一附属医院血液内科实验室 230022

目的建立人血小板抗原(HPA)-2、4、5系统基因型的检测方法。方法用多重聚合酶链反应和微流芯片检测方法,通过设计9条特异性引物、优化反应体系和反应条件,在一个体系中同时扩增HPA-2、4、5系统特异性的目的基因片段,利用微流芯片快速检... 详细信息

目的建立人血小板抗原(HPA)-2、4、5系统基因型的检测方法。方法用多重聚合酶链反应和微流芯片检测方法,通过设计9条特异性引物、优化反应体系和反应条件,在一个体系中同时扩增HPA-2、4、5系统特异性的目的基因片段,利用微流芯片快速检测HPA-2、4、5系统基因型;并把分型结果与采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)获得的结果进行比较。结果对35名健康单采血小板者进行HPA-2、4、5系统分型的结果为:33名为2a／2a型,2名为28／2b型;34名为4a／4a型,1名为4a／4b型;29名为5a／5a型,6名为,5a／5b型。未发现2b／2b、4b／4b及5b／5b纯合子个体。该结果与PCR-SSP方法获得的结果完全一致。结论该方法可快速、准确地用于血小板血型抗原基因分型,尤其适合于大样本检测。

关键词：抗原,人血小板聚合酶链反应微流芯片

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多重聚合酶链反应用于人血小板抗原-2、-4、-5系统基因分型的研究

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检验医学 2006年第2期21卷 125-128页

作者：卞茂红黄建尧杨鹏刘淑均许伟沈际佳安徽医科大学第一附属医院输血科安徽合肥230022 安徽医科大学第一附属医院血液内科实验室安徽合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032

目的建立用于检测人血小板抗原(HPA)-2、-4、-5系统基因型的多重聚合酶链反应(PCR)。方法在一个反应体系中同时扩增HPA-2、-4、-5系统特异性目的基因片段。用琼脂糖凝胶电泳确定HPA-2、-4、-5系统基因型;再用多重PCR对75名健康的单采血... 详细信息

目的建立用于检测人血小板抗原(HPA)-2、-4、-5系统基因型的多重聚合酶链反应(PCR)。方法在一个反应体系中同时扩增HPA-2、-4、-5系统特异性目的基因片段。用琼脂糖凝胶电泳确定HPA-2、-4、-5系统基因型;再用多重PCR对75名健康的单采血小板者进行HPA-2、-4-、5系统基因分型,分型结果与PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)获得的结果进行比较。结果HPA-2、-4、-5系统分型的结果为:70名为2 a/2 a型,5名为2 a/2b型;73名为4 a/4 a型,2名为4 a/4b型;66名为5 a/5 a型,9名为5 a/5b型。未发现2b/2b、4b/4b及5b/5b纯合子个体。多重PCR结果与PCR-SSP方法获得的结果一致。结论多重PCR具有操作简便、快速、准确等特点,可以用于血小板血型抗原基因分型。

关键词：人血小板抗原基因分型多重聚合酶链反应

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结膜吸吮线虫病的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第4期24卷 299-303页

作者：王增贤沈继龙王红岩 Domenico Otranto 安徽医科大学病原生物学教研室省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学人兽共患病研究所安徽省五河县人民医院 Faculty of Veterinary Medicine University of BariCasamassima Km370010 ValenzanoBariItaly

本文对结膜吸吮线虫的生物学和致病等的研究进行了综述,包括:结膜吸吮线虫病的分布、该虫形态结构及生活史、致病机制、临床诊断、治疗和预防等。

关键词：结膜吸吮线虫病流行分布媒介冈田绕眼果蝇变色伏绕眼果蝇

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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3的免疫诊断价值评估

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安徽医科大学学报 2006年第6期41卷 635-638页

作者：李敏沈继龙罗庆礼王志成郑美娟罗飞李丛磊安徽医科大学人兽共患病研究所病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法,比较其与可溶性虫卵抗原(SEA)ELISA和间接血凝试验(IHA)检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及... 详细信息

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法,比较其与可溶性虫卵抗原(SEA)ELISA和间接血凝试验(IHA)检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及其它寄生虫患者和正常人血清的交叉反应。结果rSj14-3-3-ELISA、SEA-ELISA和IHA3种方法的敏感性分别为90·8%、94·2%和90·0%,特异性分别为87·0%,84·8%和84·8%,差异无显著性(P>0·05)。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法具有可用于日本血吸虫病免疫诊断的价值。

关键词：血吸虫病,日本/诊断 14-3-3蛋白质类酶联免疫吸附测定

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三氧化二砷对鼠恶性黑素瘤B_(16)细胞凋亡的影响

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蚌埠医学院学报 2006年第3期31卷 233-234页

作者：马佳沈继龙黄桦陈素莲陈治文安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室安徽合肥230032 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的... 详细信息

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的早期凋亡率分别为7.18%、21.1%、3.59%,晚期凋亡率分别为2.63%、5.35%、6.34%,总凋亡率分别为9.81%、26.45%、9.93%。结论:B16细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率对As2O3有浓度依赖关系,高浓度的As2O3使B16细胞出现坏死。

关键词：黑素瘤三氧化二砷细胞凋亡细胞株

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血清前白蛋白检测在晚期血吸虫病诊断中的临床意义

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临床输血与检验 2006年第3期8卷 193-194页

作者：罗江龙罗庆礼方静沈继龙安徽省东至县血防专科医院 247230 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室病原生物学教研室

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血... 详细信息

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血清PA水平在不同的血吸虫性肝损害程度的差异均有显著性(P<0.05);而血清ALB水平在血吸虫性肝损害程度级与级间的差异无显著性(P>0.05),而在级与级间的差异有显著性(P<0.05)。结论检测PA较ALB能更灵敏地反映血吸虫性肝损害程度,并对晚血肝损害的早期诊断、病情判断和预后有一定的参考价值。

关键词：前白蛋白白蛋白晚期血吸虫病免疫比浊

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