检索结果-内蒙古大学图书馆

第九届北京热带医学与寄生虫学论坛

作者：沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室

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弓形虫感染对中枢神经系统的损伤机制及其对宿主行为的影响

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中国人兽共患病学报 2016年第8期32卷 751-754页

作者：程正阳张贤苏蕊余莉安徽医科大学病原生物学教研室、人兽共患病安徽省重点实验室、安徽病原生物学省级实验室合肥230032

弓形虫是引起人畜共患弓形虫病的病原体,它的感染范围广泛,感染途径多样,对人类健康和畜牧业发展危害极大。弓形虫感染与人类神经系统疾病关系密切,感染者常常会表现出反应迟钝,性格缺失等行为异常,严重时还会出现精神分裂,情绪失控,自... 详细信息

弓形虫是引起人畜共患弓形虫病的病原体,它的感染范围广泛,感染途径多样,对人类健康和畜牧业发展危害极大。弓形虫感染与人类神经系统疾病关系密切,感染者常常会表现出反应迟钝,性格缺失等行为异常,严重时还会出现精神分裂,情绪失控,自主暴力等精神性问题。本文主要从弓形虫入侵中枢神经系统的机制,对中枢神经系统的影响和宿主行为学的变化3个方面进行综述。

关键词：弓形虫中枢神经系统宿主行为

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高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及VEGF、MMP-2表达的影响

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 363-368页

作者：李晓峰束军程宇徐胜沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖)、顺铂组(5、10、20、40μmol/L顺铂)和联合组(30 mmol/L葡萄糖联合5、10、20、40μmol/L顺铂),分别处理48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖率,比较不同组别间细胞增殖率的差异;对照组、葡萄糖组、甘露醇组处理24 h和48 h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞中VEGF、MMP-2的mRNA水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF、MMP-2的蛋白浓度,比较不同组别间VEGF、MMP-2的表达水平差异。结果除10 mmol/L葡萄糖组外,葡萄糖组的细胞增殖率均高于对照组(P<0.05);相同顺铂浓度下,联合组的细胞增殖率高于顺铂组(P<0.05);与对照组比较,葡萄糖组VEGF、MMP-2表达明显增强(P<0.05),且对葡萄糖浓度有一定依赖性,葡萄糖浓度为30 mmol/L时VEGF mRNA、MMP-2的mRNA和蛋白水平达最高值,40 mmol/L时VEGF蛋白浓度最高;相同干预条件,48 h细胞的VEGF、MMP-2表达水平高于24 h(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能促进肺腺癌A549细胞的增殖,增强对顺铂的耐受力及VEGF、MMP-2的表达。

关键词：葡萄糖肺腺癌生长血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-2

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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 203-207页

作者：杨小迪孙希萌王旗崔洁计永胜薛洪宝胡守锋苏胖胖李江艳孟令文乔继琛丁忆晗宋迪吴琦方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069 安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 蚌埠医学院化学教研室蚌埠233030

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×... 详细信息

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×106个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。结果弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P<0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P>0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20.0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P<0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P<0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P<0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组的(73.8±11.3)%和(64.1±14.4)%(P<0.01)。结论金丝桃素具有较强的体外抗弓形虫速殖子效果,且随剂量增高和作用时间延长抗虫效果更明显。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫速殖子体外效果

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徐州猫源弓形虫株基因型及其毒力研究

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1421-1425页

作者：朱长东程维晟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽省庐江县人民医院检验科庐江231500

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico... 详细信息

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico）进行PCR扩增,扩增产物用相应的限制性核酸内切酶水解后观察分析电泳图谱;将分离的虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察其存活时间和存活率,分析毒力强弱。选取弓形虫的毒力相关效应分子ROP16和GRA15,PCR扩增出基因序列,比较其多态性。结果共获得6株猫源弓形虫虫株,基因分型结果显示,两株为Chinese 1型（即Toxo DB#9型）,4株为Toxo DB#205型;此6株弓形虫虫株对BALB/c小鼠和昆明鼠均有较强的毒性,两种小鼠分别在感染后5～7 d和9～12 d均100%死亡。毒力相关基因GRA15和ROP16的分析显示,Chinese 1型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅰ/Ⅲ型,Toxo DB#205型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅱ型。结论徐州地区猫源弓形虫虫株具有有限遗传多态性,且均为强毒的虫株。Toxo DB#205型虫株的主要毒力效应分子ROP16Ⅱ不同于Chinese 1型虫株,这一毒力相关基因的多态性与其毒力的关系尚待深入研究。

关键词：弓形虫基因型毒力 GRA15 ROP16

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miRNA-16对肺腺癌A549细胞增殖和VEGF-A表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2016年第4期51卷 489-492页

作者：徐胜束军李晓峰程宇沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRN... 详细信息

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRNA-16的表达水平,MTT法检测转染miRNA-16后细胞的增殖抑制情况,ELISA法检测转染miRNA-16后细胞VEGF-A表达水平。结果转染培养24h后,测得转染组miRNA-16表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞VEGF-A表达水平较阴性对照组和空白对照组明显降低(P<0.05)。结论 miRNA-16能引起细胞增殖抑制,并且可能与下调VEGF-A的表达有关。

关键词：肺腺癌 VEGF-A miRNA-16 细胞增殖

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弓形虫效应分子GRA15Ⅱ诱导巨噬细胞极化抗小鼠肝癌的研究

弓形虫效应分子GRA15Ⅱ诱导巨噬细胞极化抗小鼠肝癌的研究

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：李源玲蔡亦红 Faustina Poppoe 沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学公共卫生学院检验教研室

目的:探讨弓形虫效应分子GRA15诱导的caMφ逆转小鼠肝癌微环境中的TAMs从M2向M1极化,抑制肿瘤增殖、侵袭及转移,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路和新策略。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株中提取总RNA,扩增多态性GRA15编码基因,构建重组质粒pegfp-... 详细信息

目的:探讨弓形虫效应分子GRA15诱导的caMφ逆转小鼠肝癌微环境中的TAMs从M2向M1极化,抑制肿瘤增殖、侵袭及转移,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路和新策略。方法:从Ⅱ型弓形虫PRU株中提取总RNA,扩增多态性GRA15编码基因,构建重组质粒pegfp-gra15Ⅱ。体外将质粒亚克隆入慢病毒载体并感染小鼠细胞系RAW264.7,使之诱导为ca Mφ。体外分别将Lv-gra15Ⅱ-Mφ（A组）,空白病毒载体Lv-Mφ（B组）和未感染Mφ（C组）与小鼠肝癌细胞系Hepa1-6进行transwell共培养,观察上述三组Hepa1-6的增殖、迁移和侵袭能力,以及MMP-9和MMP-2表达。体内实验,取75只SPF级4-5w龄雌性C57/BL6小鼠,右腹股沟皮下成瘤。3d后随机分为3组,每组25只。A组为在皮下注射成瘤后3d、5d分别尾静脉给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-gra15Ⅱ-Mφ;B组给予重悬于150μl生理盐水的2×106 Lv-Mφ;C组给予150μl生理盐水。在皮下注射成瘤10d后无痛处死小鼠。剥离肿瘤组织,观察实体瘤体积;免疫组化检测肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）浸润和免疫抑制因子及血管生成相关因子的表达;瘤体q RT-PCR检测iN OS、TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达;ELISA检测IL-6水平的变化。结果:***15可驱动RAW264.7向ca Mφ方向极化。FCM、细胞培养上清和q RT-PCR检测均显示Lv-gra15Ⅱ-Mφ相比于Lv-Mφ和Mφ,其PD-L1,CD80,NO、TNF-α,IL-12p40和iN OS有显著升高（P<0.05）。2.体外共培养实验显示,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可抑制小鼠肝癌细胞Hepa1-6迁移、侵袭,可下调其外基质相关蛋白的分泌,而对Hepa1-6凋亡无影响。q RT-PCR和蛋白水平检测均显示A组与B组和C组比较,MMP-9、MMP-2表达显著下调（P<0.05）。3.体内试验TAMs检测结果,Lv-gra15Ⅱ-Mφ可减轻TAMs浸润,并且使其向M1方向偏移,抑制肿瘤的增生。实体瘤免疫组化分析显示,A组TAMs浸润显著减少（P<0.05）,IL-10,TGF-β及血管内皮生长因子（VEGF）表达下调,而MHC Ⅱ增加。q RT-PCR检测显示A组实体瘤中iN OS表达明显增加（P<0.05）,而TGF-β、VEGF、IL-6和IL-10表达抑制。ELISA检测显示A组瘤体内的IL-6分泌下调（P<0.05）。结论:弓形虫效应分子GRA15慢病毒感染RAW264.7,可驱动后者向caMφ极化,且GRA15在宿主细胞内可稳定、持续表达。在肿瘤发生早期被动输入虫源性GRA15驱动的ca Mφ可通过调节TAMs的浸润和偏移明显抑制肿瘤在体内的进展。GRA15对宿主无明显毒副作用,具有深入研究的应用价值。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白GRA15 肝细胞性肝癌 TAMs

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弓形虫致密颗粒蛋白GRA15Ⅱ原核表达及对巨噬细胞偏移的影响

弓形虫致密颗粒蛋白GRA15Ⅱ原核表达及对巨噬细胞偏移的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：胡晓东李源玲王聪徐元宏沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学第一附属医院检验科

目的:构建能够表达弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15 的工程菌,获得纯化的目的蛋白刺激巨噬细胞,借以观察弓形虫基因型相关的效应分子对巨噬细胞偏移的影响。方法:从Ⅱ型弓形虫 PRU 株中提取总 RNA,扩增该基因型弓形虫的 GRA15 编码基因,连接 T... 详细信息

目的:构建能够表达弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15 的工程菌,获得纯化的目的蛋白刺激巨噬细胞,借以观察弓形虫基因型相关的效应分子对巨噬细胞偏移的影响。方法:从Ⅱ型弓形虫 PRU 株中提取总 RNA,扩增该基因型弓形虫的 GRA15 编码基因,连接 T 载体,构建重组质粒;将重组质粒转化至 XL-Blue（Top10）感受态大肠杆菌,扩增培养,提取菌种质粒测序;重组质粒与表达载体经双酶切、连接得到 pet28a-gra15Ⅱ;将 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 DH5α感受态大肠杆菌中扩增培养,提取质粒测序。将测序正确的 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 BL21 感受态大肠杆菌中,挑取单克隆扩增培养,得到目的工程菌;加 IPTG 诱导工程菌进行蛋白表达。经 Western Blot鉴定、纯化后得到目的蛋白 GRA15。体外分别用 GRA15（A 组）、LPS（B 组）、PBS（C 组）、小牛血清白蛋白（D 组）分别刺激小鼠巨噬细胞 RAW264.7,观察细胞形态的变化;分别收集各组细胞上清与贴壁巨噬细胞。ELISA 检测细胞上清中IL-10、IL-12、Arg-1 和 iN OS 的表达;qR T-PCR 检测巨噬细胞 IL-10、IL-12、Arg-1和 iN OS 的 mRNA 表达。结果:1.通过原核表达及分离纯化成功得到目的蛋白 GRA15。经 Western blotting鉴定,确认 GRA15。2.体外细胞刺激实验显示,GRA15（A 组）与 LPS（B 组）中 RAW264.7 发生了显著变化,具体表现为细胞外形由圆形变为多边形、有伪足伸出。3. A 组与 B 组结果见到,GRA15 和 LPS 可驱动巨噬细胞向经典途径活化为M1;C 组与 D 组对巨噬细胞偏移方向未见显著影响。ELISA 显示,A 组与 B 组的细胞上清中 iN OS 与 IL-12 含量均显著高于 C 组与 D 组,而四组细胞上清中 IL-10与 Arg-1 含量无显著差别;qRT-PCR 结果显示,A 组与 B 组细胞中 iN OS 与 IL-12的 mRNA 明显上调、C 组与 D 组无明显变化,而四组细胞中 IL-10 与 Arg-1 的 mRNA较低且均无显著变化。结论:通过体外原核表达获得了弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15。 GRA15 可驱使RAW264.7 向 M1 方向发生偏移。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白GRA15 蛋白原核表达小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7

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弓形虫的基因型及其主要效应分子的致病机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第6期33卷 429-435页

作者：沈继龙王林安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 安徽中医药大学第一附属医院检验中心合肥230031

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采... 详细信息

弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种广泛寄生于人和温血动物有核细胞内的顶复门原虫(Apicomplexan),具有复杂的生活史和致病机制。Toxoplasma属下仅此一个虫种,但对其种群遗传结构的研究表明,世界各地的弓形虫存在着丰富的遗传多样性。采用PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP)或微卫星标记分型,已从野生动物、家养禽畜和人体分离虫株中发现了232个基因型。其中,北美的弓形虫基因型以typeⅡ、typeⅢ和type12(主要见于野生动物)为主;欧洲以typeⅡ、typeⅢ和typeⅠ为主;非洲以typeⅡ和typeⅢ为主。以上称为原型克隆谱系。但南美的弓形虫表现出丰富的遗传多样性,包括BrⅠ、BrⅡ、BrⅢ和BrⅣ型等。近年研究发现,我国流行的弓形虫优势基因型为Chinese 1型(Toxo DB#9)。该型虫株兼具有原型谱系虫株关键效应分子的多态性。本文综述了世界各地包括我国在内的基因型、宿主免疫应答及其致病特点,为深入研究基因型/效应分子相关的致病机制,以及弓形虫的生物学和流行病学研究提供借鉴。

关键词：弓形虫基因型 PCR-限制性片段长度多态性分析致病机制免疫应答

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碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶和整合子的检测

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中国抗生素杂志 2015年第5期40卷 377-381页

作者：张琪程训民沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 淮北市人民医院检验科淮北235000

目的了解碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶和整合子的携带情况。方法从我院临床标本分离的65株鲍曼不动杆菌中筛选出碳青霉烯类抗生素耐药株,测定其对15种抗生素的敏感性;用EDTA协同试验筛选金属β-内酰胺酶,改良Hodge试... 详细信息

目的了解碳青霉烯类抗生素耐药鲍曼不动杆菌中碳青霉烯酶和整合子的携带情况。方法从我院临床标本分离的65株鲍曼不动杆菌中筛选出碳青霉烯类抗生素耐药株,测定其对15种抗生素的敏感性;用EDTA协同试验筛选金属β-内酰胺酶,改良Hodge试验初筛碳青霉烯酶;PCR扩增碳青霉烯酶基因和整合酶基因,并测序分析。结果 65株鲍曼不动杆菌中筛选34株碳青霉烯类抗生素耐药株,对米诺环素、头孢哌酮/舒巴坦、阿米卡星和复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为8.8%、47.1%、73.5%和82.4%,对其余11种抗生素耐药率均为100.0%。EDTA协同试验结果均为阴性,改良Hodge试验28株(82.4%)结果阳性。基因扩增和测序结果表明34株细菌中25株(73.5%)产OXA-23型碳青霉烯酶,13株(38.2%)产KPC-2型碳青霉烯酶。21株(61.8%)Ⅰ类整合酶基因阳性,其中17株检测出2300bp的可变区基因盒,序列对比显示为aac A4、aad A1和cat B8基因盒。未检出OXA-24、OXA-58、IMP、VIM型酶和Ⅱ类整合酶基因。结论产OXA-23型和KPC-2型碳青霉烯酶是我院2013年临床分离鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因之一;Ⅰ类整合子广泛存在于碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌,但可变区不携带OXA-23型和KPC-2型碳青霉烯酶编码基因。

关键词：鲍曼不动杆菌耐药性碳青霉烯酶整合子

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