检索结果-内蒙古大学图书馆

卵黄抗体IgY用于诊断和治疗的研究进展

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热带病与寄生虫学 2008年第4期6卷 239-242页

作者：周银娣沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室

鸡卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin)又称IgY或卵黄抗体,是用特异性抗原注射未经免疫的产蛋母鸡后,母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中,成为蛋黄中唯一存在的抗体。近年来卵黄抗体逐渐引起人们的注意,而且得到越来越广泛

关键词： IgY 特异性哺乳动物卵黄抗体交叉反应性抗体滴度弗氏完全佐剂

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猪囊尾蚴Ts2基因的免疫筛选克隆及生物信息学分析

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中国血吸虫病防治杂志 2008年第3期20卷 201-203页

作者：郑胜生汪学龙沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省人兽共患病重点实验室、教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032

目的筛选并分析猪囊尾蚴新基因,为猪囊尾蚴病患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原及有效的疫苗候选分子。方法用猪囊尾蚴病患者血清抗体筛选猪囊尾蚴cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片段进行扩增并测序,通过互联网NCBI Gen Bank和蛋白质... 详细信息

目的筛选并分析猪囊尾蚴新基因,为猪囊尾蚴病患者的免疫学诊断提供特异的重组抗原及有效的疫苗候选分子。方法用猪囊尾蚴病患者血清抗体筛选猪囊尾蚴cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片段进行扩增并测序,通过互联网NCBI Gen Bank和蛋白质分析软件进行分析。结果筛选阳性克隆,经分析具有738bp完整开放阅读框,是1个新基因,登录号EU221317,命名为Ts2。结论成功克隆了猪囊尾蚴Ts2基因片段,为进一步实验提供了条件。

关键词：囊尾蚴 cDNA文库免疫学筛选克隆

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猪囊尾蚴病患者IFN-γ、IL-4的免疫组织化学研究

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中国人兽共患病学报 2007年第8期23卷 792-796页

作者：王雪梅胡守锋孙新沈继龙夏惠方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观... 详细信息

目的观察猪囊尾蚴病患者局部病灶的病理学特征及IFN-γ/IL-4表达情况,探讨IFN-γ/IL-4在免疫调控中的作用及意义。方法对病变组织进行苏木素伊红(HE)染色观察炎性细胞浸润情况;并用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化酶(SP)免疫组织化学方法观察其IFN-γ/IL-4的表达水平。结果45例病变组织中35例有IFN-γ的表达,阳性表达率为77.78%,24例有IL-4的表达,阳性表达率为53.33%,阳性表达多定位于异物巨细胞、淋巴细胞和巨噬细胞的胞浆;脑型囊尾蚴病IL-4的阳性表达强度高于皮肌型。结论猪囊尾蚴感染的病变组织中有多种类型炎细胞浸润,以异物巨细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞浸润为主;炎细胞中IFN-γ表达较普遍,同时也有IL-4的表达。

关键词：猪囊尾蚴病 IFN-γ IL-4 免疫组织化学

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血吸虫感染对超敏性疾病与自身免疫性疾病的调控作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第12期27卷 1155-1159页

作者：余轶婧沈继龙安徽医科大学教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽省人兽共患病重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾... 详细信息

近年来，与发展中国家相比，超敏反应性疾病与自身免疫性疾病的发病率在发达国家较高，并有上升趋势。随着卫生假说（hygiene hypothesis）的提出，许多学者进行了相关研究来试图解释这个假说。一些学者在研究血吸虫感染与超敏反应性疾病及自身免疫性疾病的关系时发现了相关机制，并促使了对该假说的进一步研究。

关键词：自身免疫性疾病血吸虫感染调控作用超敏反应性疾病超敏性卫生假说发展中国家发达国家

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重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和鉴定

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中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 454-456页

作者：钟政荣沈继龙胡元生李小月罗庆礼蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗... 详细信息

目的观察两次切胶、两次电洗脱的方法纯化重组日本血吸虫14-3-3(Sj14-3-3)蛋白的效果。方法采用两次切胶、两次电洗脱的方法(与经典的切胶、电洗脱有所不同),纯化Sj14-3-3蛋白,并与柱层析纯化方法进行比较。结果采用两次切胶、两次电洗脱方法纯化的目的蛋白条带单一,浓度达3mg/ml,而柱层析法纯化的蛋白浓度仅为1mg/ml。Western blot证实纯化目的蛋白的特异性。结论两次切胶、两次电洗脱法可获得高纯度、高特异性的目的蛋白,不失为一种经济有效的蛋白纯化方法。

关键词：血吸虫 14-3-3蛋白纯化鉴定

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日本血吸虫信号蛋白14-3-3在毕赤酵母菌中的分泌表达及其抗原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第1期25卷 12-16页

作者：郑美娟李敏王志成罗飞罗庆礼储德勇李丛磊沈继龙蚌埠医学院生物化学与分子生物学实验室蚌埠233003 安徽医科大学病原生物学教研室教育部与安徽省共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,... 详细信息

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB。测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析。用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性。结果目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段。经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000。Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性。间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%。与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为9.3%。以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在毕赤酵母菌中成功表达了Sj14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好。

关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3 毕赤酵母菌真核表达

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人巨噬细胞金属弹力酶催化域基因的克隆及表达

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安徽医科大学学报 2007年第3期42卷 269-271页

作者：鲍德明胡乃中沈际佳石海许建明安徽医科大学第一附属医院消化内科安徽省高校消化疾病重点实验室合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的克隆人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)基因,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达HMEcd基因融合蛋白。方法用RT-PCR方法提取人胃癌组织总RNA并扩增出HMEcd cDNA,克隆入pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-HM Ecd,双酶切鉴定及DNA测序... 详细信息

目的克隆人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)基因,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达HMEcd基因融合蛋白。方法用RT-PCR方法提取人胃癌组织总RNA并扩增出HMEcd cDNA,克隆入pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-HM Ecd,双酶切鉴定及DNA测序正确后再将HMEcd cDNA亚克隆至pET-28a(+)载体,构建原核表达载体pET-28a(+)-HM Ecd,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果RT-PCR获得预期的HMEcd cDNA,双酶切鉴定及DNA测序证实将HM Ecd基因分别正确插入克隆载体和原核表达载体中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定证实表达出HMEcd融合蛋白。结论成功表达出HMEcd基因融合蛋白,为进一步功能实验研究奠定基础。

关键词：基质金属蛋白酶类基因表达克隆,分子

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循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

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安徽医科大学学报 2007年第4期42卷 351-354页

作者：余轶婧沈继龙罗庆礼乔增培安徽医科大学病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室(省部共建)省重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学人兽共患病研究所合肥230032

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比... 详细信息

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。

关键词：血吸虫病,日本/诊断 14-3-3蛋白质类抗原,蠕虫/分析抗体,蠕虫/分析

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日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶在虫卵阶段的定位

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安徽医科大学学报 2007年第1期42卷 1-4页

作者：王志成徐元宏汪学龙李敏罗飞郑美娟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室和安徽省重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译... 详细信息

目的探讨谷胱甘肽-S-转移酶(Sj26GST)在虫卵阶段的表达、定位和重组蛋白(rSj26GST)的免疫诊断价值。方法从感染日本血吸虫尾蚴6周的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和免疫印迹(Western blotting)法检测Sj26GST基因在虫卵阶段的转录和翻译;同时用兔肝做免疫组化观察Sj26GST在虫卵内的分布。利用纯化的rSj26GST和日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA),采用间接ELISA法检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清。结果RT-PCR从血吸虫虫卵中扩增670bp的基因片断,Western blotting证明在虫卵阶段Sj26GST的表达;同时免疫组化显示Sj26GST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。rSj26GST检测急、慢性血吸虫病患者和正常人血清的阳性率分别为92%、80%和0;用SEA检测以上标本,阳性率分别为96%、84%和2%。结论Sj26GST是SEA的主要组分之一,能刺激机体产生高滴度的抗体;rSj26GST为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性,具有实用价值。

关键词：血吸虫日本血吸虫病/诊断寄生虫虫卵计数

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GST-颗粒溶解素融合蛋白的纯化及其抗菌活性分析

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蚌埠医学院学报 2007年第3期32卷 265-267页

作者：闵宏林沈继龙陈勇李柏青安徽医科大学病原生物学教研室蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室(蚌埠医学院) 安徽蚌埠233030

目的:纯化大肠埃希菌表达的GST-颗粒溶解素融合蛋白,并分析其体外抗菌活性。方法:将IPTG诱导处理后的细菌破碎,分离含有可溶性GST-颗粒溶解素融合蛋白的细菌裂解液,并通过GSH-琼脂糖珠亲和层析柱纯化。同时采用MTT法分析该纯化蛋白的抗... 详细信息

目的:纯化大肠埃希菌表达的GST-颗粒溶解素融合蛋白,并分析其体外抗菌活性。方法:将IPTG诱导处理后的细菌破碎,分离含有可溶性GST-颗粒溶解素融合蛋白的细菌裂解液,并通过GSH-琼脂糖珠亲和层析柱纯化。同时采用MTT法分析该纯化蛋白的抗菌活性。结果:GST-颗粒溶解素融合蛋白能以可溶性形式在大肠埃希菌中表达,采用亲和层析法可获得分子量为44kDa的单一蛋白条带。经抗菌活性分析,表明纯化产物对金黄色葡萄球菌和甲型溶血性链球菌具有显著抑制作用,而对伤寒沙门菌和大肠埃希菌BL21的抗菌活性不明显。结论:成功纯化GST-颗粒溶解素融合蛋白,该蛋白对革兰阳性菌具有高效抗菌活性。

关键词：大肠埃希菌颗粒溶解素融合表达纯化抗菌作用

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