检索结果-内蒙古大学图书馆

疾病控制杂志 2006年第1期10卷 24-27页

作者：熊江霞吴强周青桂淑玉汪渊安徽医科大学分子生物学实验室和安徽省基因研究重点实验室安徽合肥230032 安徽医科大学病理学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科安徽合肥230032

目的确定ESM-1mRNA在肾癌中的定位,探讨其表达在肾癌生物学特性中的意义。方法采用地高辛标记的原位杂交技术检测ESM-1mRNA在50例肾癌、30例癌旁正常肾组织中的表达状况,并分析其与临床病理特征的关系。结果ESM-1mRNA主要定位于血管内... 详细信息

目的确定ESM-1mRNA在肾癌中的定位,探讨其表达在肾癌生物学特性中的意义。方法采用地高辛标记的原位杂交技术检测ESM-1mRNA在50例肾癌、30例癌旁正常肾组织中的表达状况,并分析其与临床病理特征的关系。结果ESM-1mRNA主要定位于血管内皮细胞的胞质伴胞核中,在正常肾组织与肾癌中均有表达,部分表达在肾小管上皮和肾癌细胞。肾癌间质血管内皮的ESM-1mRNA高表达率(52.00%)显著高于正常肾组织的血管内皮(13.33%);肾透明细胞癌与颗粒细胞癌中ESM-1mRNA的表达差异有显著性,而与患者的性别、年龄、肿瘤的组织学分级、淋巴结转移和肿块大小无明显相关。结论ESM-1mRNA表达可作为新生血管内皮的标志物,可能与肾癌的血管生成及发生、发展有关。

关键词：肾肿瘤 RNA,信使原位杂交

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用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 202-205页

作者：袁小松沈继龙汪学龙胡元生罗庆礼安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RN... 详细信息

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转基因在童虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在童虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功扩增出760 bp和276 bp的预期大小的片段,Western blotting证实了EGFP基因在童虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察表明EGFP主要定位在童虫的皮层和副皮层,虫体前端尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫童虫体内并获得表达。

关键词：日本血吸虫电穿孔荧光蛋白基因转基因基因表达

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地塞米松对哮喘动物模型支气管平滑肌MLCK表达的影响

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中国药理学通报 2005年第7期21卷 872-875页

作者：桂淑玉王勇生李永怀周青胡向阳吴强汪渊安徽医科大学第一附属医院呼吸内科安徽合肥230022 安徽医科大学分子生物学实验室和安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病理解剖学教研室安徽合肥230032

目的观察地塞米松(DXM)对哮喘动物模型支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响,探讨MLCK在哮喘发病中的作用。方法24只♂SD大鼠,随机等分为正常对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以卵蛋白(OVA)诱发大鼠支气管哮喘模型。地塞米松... 详细信息

目的观察地塞米松(DXM)对哮喘动物模型支气管平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响,探讨MLCK在哮喘发病中的作用。方法24只♂SD大鼠,随机等分为正常对照组、哮喘模型组和地塞米松组。以卵蛋白(OVA)诱发大鼠支气管哮喘模型。地塞米松组大鼠于每次激发前1h给予腹腔注射地塞米松0.5mg·kg-1。用免疫组织化学法和免疫印迹法分析三组大鼠支气管平滑肌中MLCK表达。结果免疫组织化学法分析显示DXM组大鼠支气管平滑肌MLCK的表达低于哮喘模型组(P<0.05),但与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。同时,免疫印迹法检测也表明哮喘模型组大鼠smMLCK表达高于正常对照组及地塞米松组。结论MLCK参与支气管哮喘的发病,地塞米松通过下调哮喘大鼠支气管平滑肌MLCK表达,可能是糖皮质激素治疗哮喘的一种机制。

关键词：地塞米松支气管哮喘肌球蛋白轻链激酶模型

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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 316-318页

作者：钟政荣沈继龙汪学龙胡元生沈继录王家传李小月安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 详细信息

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

关键词：重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体制备鉴定分布作用机制

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糖尿病大鼠组织中微量元素分析

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安徽医科大学学报 2005年第4期40卷 319-320页

作者：解永岩顾志红陶梅张孝林朱华庆周青汪渊安徽医科大学化学教研室合肥230032 安徽医科大学分子生物学实验室和安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的研究糖尿病大鼠组织内微量元素与糖尿病的关系。方法用原子吸收分光光度法测定实验大鼠肝、骨、毛发、皮中的微量元素Cu、Fe、Mg、Zn、Ca。结果与正常对照组相比,糖尿病大鼠体重减少(P<0·01)、肝钙降低(P<0·01)、... 详细信息

目的研究糖尿病大鼠组织内微量元素与糖尿病的关系。方法用原子吸收分光光度法测定实验大鼠肝、骨、毛发、皮中的微量元素Cu、Fe、Mg、Zn、Ca。结果与正常对照组相比,糖尿病大鼠体重减少(P<0·01)、肝钙降低(P<0·01)、肝锌升高(P<0·01)、毛铜降低(P<0·05)、毛镁升高(P<0·05)、骨铁锌升高(P<0·05)、皮锌升高(P<0·01)。结论糖尿病大鼠伴有体内严重的的钙流失,锌在肝、骨、皮中,铁在骨中有代谢障碍而导致沉积。

关键词：糖尿病痕量元素大鼠

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骨桥蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义

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安徽医科大学学报 2005年第3期40卷 197-200页

作者：任传利桂淑玉卜丽佳张孝林吴强李永怀朱华庆周青汪渊安徽医科大学分子生物学实验室和生化教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学病理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

目的研究骨桥蛋白(OPN)在结直肠癌中的表达,探索其与结直肠癌转移的关系。方法应用SP免疫组化技术、原位杂交技术检测60例结直肠癌(32例淋巴结转移癌,28例无淋巴结转移癌)和13例正常肠黏膜中的OPN表达。结果骨桥蛋白在80.0%(48/60)结直... 详细信息

目的研究骨桥蛋白(OPN)在结直肠癌中的表达,探索其与结直肠癌转移的关系。方法应用SP免疫组化技术、原位杂交技术检测60例结直肠癌(32例淋巴结转移癌,28例无淋巴结转移癌)和13例正常肠黏膜中的OPN表达。结果骨桥蛋白在80.0%(48/60)结直肠癌中、84.3%(27/32)淋巴结转移癌中和75.0%(21/28)无淋巴结淋巴结转移癌中表达,正常黏膜不表达;骨桥蛋白的表达水平同肿瘤的分化程度、淋巴结转移、Dukes分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。骨桥蛋白mRNA在81.7%(49/60)结直肠癌、90.6%(29/32)淋巴结转移癌中表达,正常黏膜不表达;骨桥蛋白mRNA的表达水平同肿瘤的分化程度、淋巴结转移、Dukes分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。骨桥蛋白及其mRNA在结直肠癌中的表达与正常黏膜的表达差异有统计学意义,且两者具有较好的相关性(P<0.01)。结论骨桥蛋白在结直肠癌的发生和转移可能起重要的作用,可能为结直肠癌的治疗提供新的靶点。

关键词：结直肠肿瘤免疫组织化学原位杂交肿瘤转移自由词骨桥蛋白

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重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测

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安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 147-149页

作者：蔡娟都建汪学龙沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽省六安市人民医院检验科六安237005

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,... 详细信息

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。

关键词：弓形虫病/诊断抗体原虫酶联免疫吸附测定

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一个弱毒株弓形虫新基因的发现

一个弱毒株弓形虫新基因的发现

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2005年寄生虫学国际学术研讨会暨中国动物学会寄生虫专业委员会第十次学术研讨会

作者：王家传蒋作君沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

弓形虫是细胞内的寄生原虫,对免疫功能受损者和孕妇造成危害严重,而在免疫功能正常的人群感染后多呈无症状的带虫状态。免疫血清诊断是当前弓形虫感染实验室诊断的主要手段,目前尚无实用的分子疫苗。有关弓形虫强毒RH株的抗原及抗感染... 详细信息

弓形虫是细胞内的寄生原虫,对免疫功能受损者和孕妇造成危害严重,而在免疫功能正常的人群感染后多呈无症状的带虫状态。免疫血清诊断是当前弓形虫感染实验室诊断的主要手段,目前尚无实用的分子疫苗。有关弓形虫强毒RH株的抗原及抗感染免疫机制较多,而事实上,人体和大部分动物感染均为弱毒虫株。为了筛选弱毒株相关抗原,我们用弓形虫成囊株(Prugniaud株)感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原和保护性抗原基因。以成囊株弓形虫包囊

关键词：弓形虫弱毒株 cDNA文库

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日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

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临床输血与检验 2005年第1期7卷 4-7页

作者：胡元生沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的　从日本血吸虫成虫 c DNA中扩增出信号蛋白 Sj1 4-3 -3编码基因 ,并亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1( +) ,旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法　提取日本血吸虫成虫总 RNA,分离m RNA,RT-PCR法制备c DNA,并扩增出 Sj1 4-3 -3编... 详细信息

目的　从日本血吸虫成虫 c DNA中扩增出信号蛋白 Sj1 4-3 -3编码基因 ,并亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1( +) ,旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗。方法　提取日本血吸虫成虫总 RNA,分离m RNA,RT-PCR法制备c DNA,并扩增出 Sj1 4-3 -3编码基因 ,通过线性 TA克隆载体 p GEM-T连接 ,亚克隆至真核表达载体 pc DNA3 .1 ( +) ,经转染至 COS-7细胞中表达 ,Western blotting鉴定。结果　RT-PCR产物、p GEM-T-Sj1 4-3 -3及 pc DNA3 .1 ( +) -Sj1 4-3 -3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段 ,经 SDS-PAGE及 Western blotting鉴定后的分子量为 2 9k D。结论　真核表达重组质粒 pc DNA3 .1( +) -Sj1 4-3 -3在 COS-7细胞中的表达产物是一分子量为 2 9k D的蛋白 ,并能被抗 Sj1 4-3

关键词：日本血吸虫 14-3-3信号蛋白真核表达

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一个具有诊断价值的弓形虫基因的发现

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临床输血与检验 2005年第3期7卷 184-186页

作者：王家传蒋作君沈继龙汪学龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性... 详细信息

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列测定,结果送GenBank进行同源性分析。根据序列测定结果,选取其中1个具有完整开放阅读框架的基因进行分析。结果获得4个持续阳性反应克隆。测序和同源性分析显示,WT1为弓形虫P30基因;WT4为弓形虫N-乙酰磷酸丙糖转移酶基因;WT9与已知的基因无同源性。WT12克隆基因与一未知的弓形虫基因有很高的同源性,且具有1个513bp大小的完整开放阅读框架,其蛋白质结构和功能预测可能是个跨膜信号蛋白。结论筛选得到的1个阳性克隆有望成为早期诊断抗原基因,值得进一步研究。

关键词：弓形虫 cDNA文库免疫学筛选阳性克隆分析

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