检索结果-内蒙古大学图书馆

安徽医科大学学报 2010年第1期45卷 1-5页

作者：廖法学彭丽娜张平平杨帆刘慧敏陈伟梁坤张玉侠沈际佳安徽医科大学七年制临床医学专业合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室和安徽省病原生物学重点实验室合肥230032

目的进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定。方法收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达... 详细信息

目的进一步研究EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白在病原生物感染宿主中的功能,探讨原核表达小鼠EBI3蛋白并初步鉴定。方法收集日本血吸虫感染的C57/BL6小鼠脾细胞后提取总RNA,利用所合成引物经RT-PCR获得EBI3的cDNA,将该基因亚克隆入原核表达载体pET32a(+),转化至大肠埃希菌(***)BL21株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对包涵体进行变性、纯化和复性后获得可溶性的小鼠重组EBI3蛋白,用Western blot对其鉴定。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠获取血清,经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A-50柱纯化得到抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA检测其免疫活性。结果基因工程获得目的蛋白变性复性成功后经Western blot鉴定证实为小鼠重组EBI3蛋白,免疫小鼠后取血清,分离纯化获得抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,ELISA结果表明该蛋白具有免疫原性。结论成功地表达了小鼠重组EBI3蛋白,并制备了抗小鼠重组EBI3蛋白多克隆抗体,为进一步研究EBI3蛋白在病原生物感染宿主中的功能奠定了基础。

关键词：基因表达

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IgY-和IgG-ELISA用于日本血吸虫病循环抗原检测的效果比较

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中华预防医学杂志 2011年第9期45卷 859-860页

作者：周银娣温和汪六庆沈继龙合肥市第一人民医院检验科安徽省230032 徐州医学院病原生物学教研室安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄... 详细信息

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中去的，且是蛋黄中惟一存在的抗体，和哺乳动物的IgG相比，IgY具有高特异、高灵敏度，

关键词： IgG-ELISA 循环抗原检测日本血吸虫病卵黄免疫球蛋白特异度交叉反应抗原免疫哺乳动物

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猪囊尾蚴期特异性抗原cC1的克隆与高效可溶性原核表达

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南方医科大学学报 2010年第2期30卷 206-209页

作者：方强骆江坤崔琢齐文娟胡元生沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院第一附属医院安蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表... 详细信息

目的克隆猪囊尾蚴期特异性抗原cC1基因,并进行高效可溶性原核表达。方法利用PT-PCR从猪囊尾蚴中获得cC1编码基因,T-A克隆后,将cC1插入原核表达载体pET28a中,经酶切、测序鉴定后将其转入宿主菌*** BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,表达的融合蛋白Ni+-亲和层析柱纯化后经快速液相蛋白层析分离系统检测其纯度。采用SDS-PAGE和Western-blotting对目的蛋白进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出的片段长度为1056bp,构建的重组表达质粒经PCR、酶切验证,和预期的结果一致,测序鉴定与Genbank中cC1基因相比于423位存在1个同义突变。转化有重组质粒的E. coli BL21(DE3)经过0.05mmol/LIPTG 37℃诱导6h高效表达了占菌体蛋白总量60%的可为囊虫病患者血清识别的相对分子质量约为40000的可溶性融合蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化后纯度达94%。结论成功克隆并高效可溶性原核表达了猪囊尾蚴期特异性抗原cC1,为其进一步研究和应用奠定了基础。

关键词：猪囊尾蚴,抗原cC1 克隆原核表达条件优化

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蠕虫及虫源性分子对自身免疫性疾病的保护作用

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中国人兽共患病学报 2014年第2期30卷 186-190页

作者：宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学附属省立医院心外科安徽省心血管病研究所合肥230001 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

机体接触包括蠕虫在内的病源微生物机会减少,尤其在幼年时期免疫系统失去病源微生物的塑造和协调,是导致西方发达国家自身免疫性疾病和过敏性疾病发病率迅速增高的主要原因之一。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自... 详细信息

机体接触包括蠕虫在内的病源微生物机会减少,尤其在幼年时期免疫系统失去病源微生物的塑造和协调,是导致西方发达国家自身免疫性疾病和过敏性疾病发病率迅速增高的主要原因之一。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自身免疫性疾病的临床症状和病理过程。日益增多的流行病学及实验研究证实了蠕虫对自身免疫性疾病及过敏性疾病的保护作用,显示了优异的临床应用价值。蠕虫感染能激发强烈的Th2免疫应答,可以改善Th1介导的自身免疫性疾病的临床症状和病理过程。目前,蠕虫感染诱导的宿主Th2免疫偏移已成为感染免疫调节研究的重要模型,并显示了优异的临床应用价值,具有诱人的临床应用前景。然而其负向免疫调控的机制至今尚未明了。本文回顾近年来蠕虫及其分子调节自身免疫性疾病的国内外研究进展,着重探讨蠕虫感染及其分子发挥免疫抑制作用的可能机制。

关键词：蠕虫感染虫源性分子自身免疫性疾病免疫偏移免疫调节

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金丝桃素对小鼠巨噬细胞内刚地弓形虫速殖子的增殖抑制作用

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中国人兽共患病学报 2018年第7期34卷 583-587页

作者：崔洁王旗杨小迪孙希萌汪瑞姜辉王守祥张敏魏明夏惠陈兴智沈继龙安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室安徽省人兽共患病重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 蚌埠医学院显微形态综合实验室蚌埠233030 安徽省血吸虫病防治研究所合肥230061 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069

目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH... 详细信息

目的观察金丝桃素(Hypericin,Hy)对小鼠巨噬细胞内弓形虫的增殖抑制作用,为抗弓形虫天然药物的筛选提供线索。方法分离小鼠腹腔巨噬细胞(Macrophage,Mφ),建立体外Mφ感染稳定表达绿色荧光蛋白的弓形虫(RH-green fluorescent protein,RH-GFP)速殖子模型,观察不同剂量Hy的最佳作用效果。实验分4组:(1)A组(对照组),不加Hy;(2)B组(Mφ感染RH-GFP+100μg/mL Hy);(3)C组(Mφ感染RH-GFP+200μg/mL Hy);(4)D组(Mφ感染RH-GFP+400μg/mL Hy),分别在培养1、2和3h后利用荧光显微镜和流式细胞术观察计数感染的Mφ和游离速殖子在各药物浓度及各时间点的变化;透射电镜观察虫体超微结构的变化。结果与对照组相比,随着Hy浓度的增加和用药时间的延长,Mφ内速殖子数量明显减少,游离速殖子数量也显著减少,荧光强度逐渐降低;经药物组不同浓度Hy作用后,游离/Mφ内弓形虫的比值逐渐升高,至400μg/mL剂量作用3h后开始下降,游离与胞内速殖子比例的差异在同一时间段内均有统计学意义(P<0.05),但药物作用1h或2h各实验组之间无统计学差异(P>0.05),作用3h各浓度组之间差异有统计学意义(P<0.05),各实验组同一药物浓度下在孵育1、2和3h后效果增强(P<0.05)。透射电镜观察显示,随Hy作用时间延长,虫体逐渐出现肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,空泡形成且增多、变大,胞膜断裂,内部结构溶解溢出。结论体外实验初步显示Hy呈剂量和时间依赖性地增强对Mφ内弓形虫速殖子增殖的抑制作用,可降低宿主细胞感染率,且对胞外速殖子有一定杀伤作用。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫巨噬细胞抑制

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结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628的表达、纯化及其兔多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第1期39卷 75-80页

作者：汪欣然马文潇孙菀蔚宁星语黄蓉蓉刘淼安徽医科大学第二临床医学院安徽医科大学第一临床医学院安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室安徽合肥230032

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表... 详细信息

目的表达和纯化结核分枝杆菌休眠生存调节子蛋白Rv2628,制备并鉴定其兔多克隆抗体。方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,扩增Rv2628基因,构建重组表达质粒,转化至大肠杆菌表达菌株中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,利用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)层析柱纯化目的蛋白,以纯化Rv2628蛋白免疫新西兰大白兔获得兔多克隆抗体,分别利用Western blot法和间接ELISA验证多克隆抗体的特异性。结果成功构建pET-30a-Rv2628重组载体,IPTG诱导后Rv2628蛋白在大肠杆菌主要以包涵体形式表达,Ni-NTA层析柱纯化获得高纯度Rv2628蛋白。免疫兔后获得兔抗Rv2628多克隆抗体具有良好的抗原结合特性,且抗体效价达1∶1093500。结论成功制备高纯度Rv2628蛋白及高效价兔抗Rv2628多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌休眠生存调节子 Rv2628 多克隆抗体

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徐州猫源弓形虫株基因型及其毒力研究

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1421-1425页

作者：朱长东程维晟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽省庐江县人民医院检验科庐江231500

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico... 详细信息

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico）进行PCR扩增,扩增产物用相应的限制性核酸内切酶水解后观察分析电泳图谱;将分离的虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察其存活时间和存活率,分析毒力强弱。选取弓形虫的毒力相关效应分子ROP16和GRA15,PCR扩增出基因序列,比较其多态性。结果共获得6株猫源弓形虫虫株,基因分型结果显示,两株为Chinese 1型（即Toxo DB#9型）,4株为Toxo DB#205型;此6株弓形虫虫株对BALB/c小鼠和昆明鼠均有较强的毒性,两种小鼠分别在感染后5～7 d和9～12 d均100%死亡。毒力相关基因GRA15和ROP16的分析显示,Chinese 1型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅰ/Ⅲ型,Toxo DB#205型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅱ型。结论徐州地区猫源弓形虫虫株具有有限遗传多态性,且均为强毒的虫株。Toxo DB#205型虫株的主要毒力效应分子ROP16Ⅱ不同于Chinese 1型虫株,这一毒力相关基因的多态性与其毒力的关系尚待深入研究。

关键词：弓形虫基因型毒力 GRA15 ROP16

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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 316-318页

作者：钟政荣沈继龙汪学龙胡元生沈继录王家传李小月安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 详细信息

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

关键词：重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体制备鉴定分布作用机制

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二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外抗弓形虫速殖子的实验研究

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中国人兽共患病学报 2013年第7期29卷 692-696页

作者：陈兴智杨雯杨小迪王旗夏惠刘刚沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 鲁东大学化学与材料科学学院烟台264025 人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(... 详细信息

目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(D组),分别加入到含弓形虫速殖子(含虫体4×106个/mL)的24孔培养板中,于1h、2h、4h后收集弓形虫速殖子,以Trypan blue染色法检测弓形虫着色率;C组和A组以MTT法检测弓形虫活性,Giemsa染色法观察虫体形态和结构变化,透射电镜观察弓形虫速殖子超微结构。结果不同浓度(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5.00μg/mL)弓形虫经二(喹唑啉-4-基)二硒醚作用1h后的着色率分别为5.00%、26.70%和99.50%,作用2h后的着色率分别为22.00%、98.70%和100.00%,作用4h后的着色率分别为58.30%、100.00%和100.00%;生理盐水组1h、2h、4h后的着色率分别为1.0%、1.20%和1.70%。0.5μg/mL浓度药物组,MTT检测弓形虫活性,OD值随时间延长增长率明显低于生理盐水对照组(P<0.05);Giemsa染色观察,弓形虫速殖子随着时间的延长,逐渐出现肿胀,两端变圆,虫体坏死现象;透射电镜观察随着时间延长,逐渐出现虫体肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,越来越多和大的空泡形成,胞膜出现断裂,内部结构溶解模糊。结论二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外可部分或全部杀死弓形虫,效果与时间、剂量相关。

关键词：二(喹唑啉-4-基)二硒醚刚地弓形虫速殖子体外

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日本血吸虫信号蛋白14-3-3在毕赤酵母菌中的分泌表达及其抗原性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第1期25卷 12-16页

作者：郑美娟李敏王志成罗飞罗庆礼储德勇李丛磊沈继龙蚌埠医学院生物化学与分子生物学实验室蚌埠233003 安徽医科大学病原生物学教研室教育部与安徽省共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,... 详细信息

目的在毕赤酵母菌(Pichia pastoris)表达系统中表达日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3),并与原核表达rSj14-3-3比较其抗原性。方法以重组质粒pET28a-rSj14-3-3为模板,PCR扩增Sj14-3-3基因,将特异片段连接到pMD18-T载体,DNA序列分析后,亚克隆目的片段Sj14-3-3至酵母菌分泌表达载体pPICZαB。测序正确后,重组质粒经电转化转染至毕赤酵母菌X-33菌株,经抗生素Zeocin筛选得到高拷贝转化子。经甲醇诱导表达,取诱导上清进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)分析。用间接ELISA法比较毕赤酵母菌表达的rSj14-3-3和原核表达rSj14-3-3检测血吸虫病患者血清抗体的特异性和敏感性。结果目的基因已在酵母菌基因组中得到整合,PCR扩增得到约1 300 bp的片段。经甲醇诱导,Sj14-3-3表达并分泌到培养上清中。表达产物经SDS-PAGE测定为Mr 35 000。Western blotting结果显示,Mr 35 000蛋白可被Sj14-3-3单克隆抗体识别,表明该真核表达产物具有免疫反应性。间接ELISA检测结果表明,该重组蛋白检测36份急性血吸虫病患者血清rSj14-3-3抗体,阳性率为81%。与12份华支睪吸虫感染者血清未见交叉反应,32份健康人血清假阳性反应率为9.3%。以原核表达的rSj14-3-3为抗原,间接ELISA检测,36份急性血吸虫病患者血清的rSj14-3-3,抗体阳性率为88.9%;与12份华支睪吸虫感染者的交叉反应率为16.7%,32份健康人血清假阳性反应率为12.5%,其差异均无统计学意义(P>0.05)。结论在毕赤酵母菌中成功表达了Sj14-3-3,培养上清中产物丰度较高,且免疫反应性良好。

关键词：日本血吸虫信号蛋白14-3-3 毕赤酵母菌真核表达

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