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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 179-183页

作者：王林霍星星陈兆武陈鹤余莉宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心合肥230031 Cape Coast大学微生物学教研室加纳共和国

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF... 详细信息

目的观察流行我国的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株(TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9)包囊50个(约含1×104个缓殖子)经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻(3.650±0.252)g;第10天[(1.730±0.017)g]与第14天体重差值[(-0.390±0.554)g]比较,有统计学意义(P<0.05)。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织(3.800±0.154);血液中的虫体在第7天达峰值(5.240±0.115),随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后(5.640±0.214和5.790±0.060)维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值(5.310±0.038和6.200±0.152),此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。

关键词：刚地弓形虫基因型动态分布荧光定量PCR

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Tim-2在日本血吸虫感染小鼠Th2优势应答中的作用

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1273-1277页

作者：祁瑶宋晓蓉徐元宏沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、... 详细信息

目的观察日本血吸虫感染小鼠T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-2(Tim-2)基因表达与干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的动态变化,探讨Tim-2在血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫平衡中的可能机制。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,采用RT-PCR、ELISA法检测不同感染阶段小鼠脾淋巴细胞中Tim-2和IFN-γ、IL-4水平;HE染色观察组织学改变;免疫组化法检测Tim-2在肝脏虫卵肉芽肿中的表达。结果日本血吸虫尾蚴感染后3周小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA及其培养上清中蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);而IL-4 mRNA及其培养上清中蛋白表达水平于感染6周、9周显著增高(P<0.01);HE染色显示随着血吸虫感染进程的发展,肝脏肉芽肿面积逐步增大,6周达峰值,随后有所下降;RT-PCR结果显示尾蚴感染6周的小鼠脾细胞中Tim-2基因表达较正常对照组显著增高;免疫组化法分析显示,小鼠肝脏虫卵肉芽肿Tim-2表达主要分布在虫卵及其周围。结论慢性血吸虫感染可诱导宿主全身性的Th2优势应答,Tim-2可能参与慢性感染宿主机体Th1/Th2免疫平衡的调节。

关键词： T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子 Th2优势应答血吸虫病

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抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

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安徽医科大学学报 2012年第9期47卷 1011-1014页

作者：罗庆礼周银娣沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 合肥市第一人民医院检验科合肥230032

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体... 详细信息

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。

关键词：日本血吸虫病循环抗原 14-3-3蛋白卵黄抗体

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高纯度日本血吸虫卵的分离及活性鉴定

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中国人兽共患病学报 2012年第3期28卷 209-212页

作者：钟政荣徐云侠宫继勇罗庆礼闻慧琴宋晓蓉沈继龙安徽省蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 安徽省蚌埠医学院第一附属医院神经内科蚌埠233004 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离... 详细信息

目的探讨制备高纯度、高生物活性的的日本血吸虫卵分离方法。方法将匀浆后的血吸虫感染的兔肝组织悬液分级过滤,再将滤液离心,去除组织碎片,分离的虫卵再次经过325目分样筛过滤,收集筛上虫卵,最后将收集的虫卵用密度1.070的Percoll分离液梯度离心,吸取下层Percoll液中的纯化虫卵;显微镜观察分离虫卵的纯度,吖啶橙染色观察虫卵的死活,环卵沉淀试验鉴定虫卵的分泌活性。结果每个肝脏获得约1g左右的虫卵,分离的虫卵纯度高,吖啶橙染色和环卵沉淀试验结果显示,分离的活虫卵比例高、生物活性好。结论该虫卵分离方法操作简单、用时短、效果好,分离的虫卵完全满足各种研究的需要。

关键词：日本血吸虫虫卵分离纯化活性

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不同毒力弓形虫感染对孕期小鼠巨噬细胞的极化及胎盘滋养细胞凋亡的影响

不同毒力弓形虫感染对孕期小鼠巨噬细胞的极化及胎盘滋养细胞凋亡...

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：刘婷婷蔡亦红李敏余莉都建汪学龙罗庆礼沈继龙张倩刘丽丽徐修才陈鹤王花孔兰婷王为为张爱梅安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室

目的：本文研究了流行于我国的Chinese Ⅰ型弓形虫感染孕中期小鼠后，小鼠巨噬细胞的极化改变及所导致的Th1/Th2偏移，以及对胎盘滋养层细胞凋亡带来的影响。　　方法：体内试验：ICR小鼠90只于妊娠第8天随机分别腹腔注射Chinese Ⅰ型或... 详细信息

目的：本文研究了流行于我国的Chinese Ⅰ型弓形虫感染孕中期小鼠后，小鼠巨噬细胞的极化改变及所导致的Th1/Th2偏移，以及对胎盘滋养层细胞凋亡带来的影响。
　　方法：体内试验：ICR小鼠90只于妊娠第8天随机分别腹腔注射Chinese Ⅰ型或Chinese Ⅱ型弓形虫速殖子200个0.1ml各30只，另外30只注射等量的无菌PBS做对照。分别于妊娠第10、12、14、16、18天颈椎脱臼处死小鼠，取腹腔巨噬细胞和胎盘。部分胎盘匀浆上清和巨噬细胞3h贴壁换液培养24h后的上清测Th1/Th2细胞因子，部分胎盘和巨噬细胞提RNA荧光定量PCR测iNOs、TNF-α、IFN-γ、Fizzi、Yml、Arg-1、IL-4、IL-10、IL-12p40。巨噬细胞蛋白用Westem-blotting验证iNOs和Arg-1。部分胎盘4％甲醛固定石蜡包埋HE染色和TUNEL。部分胎盘用流式Annexin V-EGFP测凋亡。巨噬细胞用流式抗体标记测M1、M2极化情况。巨噬细胞上清测尿素和NO。体外实验：孕鼠于孕1214天无菌操作取胎盘滋养层细胞和巨噬细胞Transwell共培养，速殖子与巨噬细胞1：1分别感染Chinese I型和Chinese II型虫株，设一组不加速殖子做对照.分别于2h, 6h, 12h. 24h收集上清和巨噬细胞，滋养层细胞做流式Annexin V-EGFP测凋亡和固定做TUNEL。巨噬细胞的上清、RNA、蛋白检测同体内实验。
　　结果：三组胎盘随着妊娠天数的增加凋亡率都上升，但同时间相比，Chinese I型组凋亡率高于Chinese II型，Chinese II型又高于对照组。Chinese II型虫株感染的小鼠腹腔巨噬细胞在孕14天开始出现高水平的NO，孕16天达高峰，孕18天消退：其他两组无NO产出。体外实验中，2h, 6h. 12h.24h的巨噬细胞上清中，Chinese I型感染的各时间点上清都出现高水平的尿素，即精氨酸酶的活性高，而Chinese II型感染的上清则比对照组稍高一点点。
　　结论：Chinese I型虫株感染后，孕鼠巨噬细胞向M2型极化，致体内免疫偏向Th2型，使得弓形虫速殖子大量繁殖，破坏宿主细胞，各种原因(营养供应或生存的稳态环境遭破坏)滋养层细胞凋亡增加;而ChineseII型感染后，孕鼠巨噬细胞向M1型极化，致体内免疫偏向Thl型，原先的妊娠Th2型的环境被迫转向Thl型，大量炎症介质产生，机体变得不耐受，也使滋养层细胞凋亡增加。

关键词：弓形虫巨噬细胞胎盘滋养层细胞凋亡孕期感染

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安徽省市售猪肉弓形虫感染阳性率及基因分型的研究

安徽省市售猪肉弓形虫感染阳性率及基因分型的研究

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王花王腾霍星星王林罗庆礼刘婷婷徐修才余莉沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室

为了评估人在摄入猪肉这一中国最普遍的肉制品后弓形虫传播给人的风险并确定其主要基因型，本文从安徽省四个地区的零售肉摊购买新鲜猪瘦肉样本416份，其中合肥101份，肥东100份，肥西114份，长丰101份。每个样本通过荧光定量PCR检测组... 详细信息

为了评估人在摄入猪肉这一中国最普遍的肉制品后弓形虫传播给人的风险并确定其主要基因型，本文从安徽省四个地区的零售肉摊购买新鲜猪瘦肉样本416份，其中合肥101份，肥东100份，肥西114份，长丰101份。每个样本通过荧光定量PCR检测组织样本中弓形虫DNA及ELISA检测组织液中抗弓形虫抗体。14个组织液ELISA和荧光定量PCR同时阳性的组织接种小鼠分离虫株。最后获得1个分离株，为了观察这株的毒力，10只6周龄的小雌鼠，每只小鼠腹腔注射1000个速殖子。逐日观察并记录小鼠的死亡情况。为了确定这一猪肉中分离的弓形虫基因型，对1个分离株和7个具有较高弓形虫浓度的阳性DNA样本使用9个基因位点SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, L358, PK1, c22-8, c29-2和Apico的PCR-RFLP方法进行分型。
　　结果：416份样本中ELISA阳性的有一42个，阳性率为10.1%：荧光定量PCR阳性有75个，阳性率为18.03%0 14个荧光定量PCR和ELISA同时阳性的样本接种小鼠后分离到一个虫株((Tgpkix 171)，腹腔接种10只小鼠均在5-10天内死亡，提示该分离株为强毒株。在PCR-RFLP的分型结果中只有分离株和两个阳性DNA样本在所有位点具有完整数据。分离株(Tgpkfxl7l)属于ToxoDB#9(基因型Chinese 1)。两个阳性的DNA样本(Tgpkhf2和Tgpkhf3)属于ToxoDB#213，该基因型为首次报道。另外5个阳性DNA样本只能在部分位点被分型。
　　结论：安徽省市售猪肉弓形虫感染PCR阳性率为10.1%，同时从猪肉中分离到活的弓形虫，提示人在摄入未经检验检疫的未熟猪肉后有感染弓形虫的风险;ToxoDB#9 (Chinese 1)和ToxoDB#213基因型可能是这一区域猪肉中弓形虫的主要基因型。

关键词：猪肉弓形虫感染阳性率基因分型传播风险荧光定量PCR技术

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FasL反义寡核苷酸对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

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安徽医科大学学报 2012年第11期47卷 1300-1303页

作者：方丽陈乔尔任翠平沈际佳安徽医科大学口腔医学院安徽医科大学附属口腔医院安徽省口腔临床医学重点学科安徽省口腔疾病研究省级实验室中央与地方共建口腔医学中心实验室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞。荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑... 详细信息

目的探讨Fas配体(FasL)反义寡核苷酸(ASO)对舌鳞癌细胞系Tca8113细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成特异性的FasL ASO,并用阳离子脂质体介导转染Tca8113细胞。荧光倒置显微镜观察及流式细胞术(FCM)检测转然前后的转染效率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度ASO在转染后不同时间对Tca8113细胞增殖的影响;FCM测定转染前后诱导Tca8113细胞的凋亡情况。结果通过荧光倒置显微镜观察及FCM检测发现在脂质体的量一定的情况下,在一定范围内,ASO的浓度越高,转染效率越高。MTT结果显示ASO对Tca8113细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比,总凋亡率有明显差异(P<0.05)。结论 FasL ASO对Tca8113细胞的增殖有一定的抑制作用,能够促进其凋亡,因此FasL ASO有望成为舌鳞癌的潜在的基因治疗方法。

关键词： Fas Fas配体反义寡核苷酸技术舌鳞癌细胞

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外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

外源性一氧化氮体外杀伤旋毛虫成虫的实验研究

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王小莉王媛媛方强薛玉芹夏惠沈继龙蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室，蚌埠 233030 安徽医科大学病原生物学教研室，合肥 230032

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、... 详细信息

目的：探讨外源性一氧化氮(NO)对旋毛虫成虫的杀伤作用。
　　方法：取感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠组织，分离成虫，配制成虫悬液(1000条/ml)。48孔板中每孔加入100 μl成虫悬液，再加入各组试剂，终浓度分别为：亚硝基铁氰化钠(SNP)0.02、0.05、0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L，1.00 mmoFL SNP+0.15mmol/L血红蛋白(Hb)、1.00 mmol/LSNP+0.15 mmol/L FeSO4、1.00 mmol/L SNP+1.00mmol/LL-cyst、1.00 mmol/LSNP+0.15mmol/L FeSO4+1.00mmol/L L-cyst，设空白对照组和阳性对照组(1.00 mmol/LSNP+100 μl肌幼虫悬液)，每组设3个复孔。置37℃ 5％CO2培养箱中孵育。第4天收集各孔成虫，镜检并作番红染色，计算各组虫体死亡率。
　　结果：SNP 0.02 mmol/L和0.05mmo儿组旋毛虫死亡率分别为(1.4±1.2)％和(3.2±1.0)％，这两组与空白对照组的死亡率之间的差异无统计学意义(P>0.05)。SNP 0.10、0.20、0.50和1.00 mmol/L组虫体死亡率分别为为(9.9±1.8)％、(37.7±2.5)％、(50.1±3.5)％和(80.84±1.1)％，与空白对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。旋毛虫成虫死亡率与sNP浓度呈线性趋势(P<0.05)，且呈正相关(P<0.05)。在加入1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与仅SNP1.00mmol/L实验组比较，成虫死亡率均有所下降，分别为(56.54±3.7)％、(72±74.5±6)％、(74.8±2.4)％和(69.84±2.3)％。SNP1.00 mmol/L组与SNP+Hb、sNP+FeSO4+L-cyst组旋毛虫成虫死亡率间的差异有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：外源性NO对体外培养的旋毛虫成虫有杀伤作用，而Hb、L-cyst+FeSO4可抑制该杀伤作用。

关键词：外源性一氧化氮体体外培养杀伤实验旋毛虫成虫

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匹多莫德对小鼠弓形虫感染活化的防治作用研究

匹多莫德对小鼠弓形虫感染活化的防治作用研究

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：霍星星都建蔡亦红伦照荣吕芳丽王勇沈继龙王林陈鹤徐修才张爱梅宋晓蓉罗庆礼徐元宏余莉安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室中山大学生命科学院寄生生物国家重点实验室中山大学中山医学院病原生物学教研室南京医科大学病原生物学教研室

目的：免疫功能正常的人体感染弓形虫常呈现为隐性感染状态，而当免疫功能缺陷或受到抑制时，弓形虫隐性感染活化常导致严重后果。随着医学界对本病认识的加深、人们饮食习惯的改变和宠物饲养的增多，加之艾滋病、肿瘤化疗、器官移植以... 详细信息

目的：免疫功能正常的人体感染弓形虫常呈现为隐性感染状态，而当免疫功能缺陷或受到抑制时，弓形虫隐性感染活化常导致严重后果。随着医学界对本病认识的加深、人们饮食习惯的改变和宠物饲养的增多，加之艾滋病、肿瘤化疗、器官移植以及自身性免疫性疾病患者的增加，弓形虫感染和弓形虫病的发病率有增高的趋势。近年来的研究表明，匹多莫德(Pidotimod，PT)具有明显的正相免疫调节作用。本研究试图通过细胞毒制剂和免疫抑制剂环磷酰胺(cY)建立隐性弓形虫感染活化的模型;利用匹多莫德恢复免疫抑制小鼠的免疫功能;观察不同处理组宿主虫血症以及存活时间的变化，检测匹多莫德对小鼠CD4+T细胞亚群以及相关细胞因子的网络调节。本文旨在探讨匹多莫德对于临床隐形弓形虫感染活化的预防和治疗作用。
　　方法：BALB/c小鼠经口灌胃给予弓形虫包囊，6W后形成稳定的弓形虫隐性感染。随机分成实验组和对照组。实验组腹腔注射免疫抑制剂CY诱导免疫抑制动物模型，实验组又分为PT处理组和非PT处理组，对照组给予生理盐水。所有小鼠SPF级环境饲养，观察不同处理组小鼠的存活时间。隔天每组麻醉处死三只小鼠。取外周血提取全血DNA，荧光定量PCR检测弓形虫核酸，监测虫血症，比较匹多莫德对隐性感染活化时的虫血症变化的影响;流式细胞技术(FCM)检测不同处理组小鼠脾淋巴细胞CD4+T细胞亚群，分析匹多莫德对免疫抑制状态下T细胞免疫应答的调节作用：Real time PCR检测鼠脾淋巴细胞转录因子的mRNA表达水平;流式微球阵列技术(CBA)检测血清Th1，Th2以及Th17细胞相关细胞因子，比较匹多莫德对免疫抑制状态下细胞因子表达谱的影响;取不同处理组小鼠脑组织，观察匹多莫德对免疫抑制状态下脑组织病理变化以及荧光定量PCR检测弓形虫核酸比较不同处理组小鼠脑组织虫荷的差异。
　　结果：同时给予匹多莫德干预的小鼠(PT+CY组)相对于单用免疫抑制剂处理组(NS+CY组)的小鼠存活时间明显延长;虫血症明显延迟出现;脑部病理学评分以及脑组织虫荷明显降低;脾淋巴细胞CD4+T细胞亚群、Th1细胞亚群及相应的转录因子T-bet明显恢复。在小鼠血清细胞因子表达谱中，IL-2、IFN-γ和TNF-α表达量明显得到恢复;而Th2、Th17细胞亚群及其相关细胞因子、转录因子恢复不明显。与此同时匹多莫德干预的小鼠调节性T细胞亦有所恢复。
　　结论：免疫调节剂匹多莫德能够明显恢复免疫抑制小鼠的Th1免疫应答，恢复前炎性细胞因子表达，从而推迟弓形虫虫血症的再次出现，延长免疫抑制小鼠的存活时间，明显改善因隐性感染活化引起的脑组织病理损害。

关键词：隐形弓形虫匹多莫德免疫抑制感染活化临床治疗

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我国弓形虫分离株SAG3基因的比较及其毒力分析

我国弓形虫分离株SAG3基因的比较及其毒力分析

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2012年安徽省医学会微生物与免疫学、热带病与寄生虫病学会换届改选与学术研讨会

作者：王林蔡亦红张爱梅沈继龙黄开泉宋晓蓉徐修才余莉罗庆礼陈兆武霍星星安徽病原生物学省级实验室，人兽共患病安徽省重点实验室，安徽医科大学病原生物学教研室，合肥 230032 安徽中医学院第一附属医院检验中心，合肥 230031 安徽病原生物学省级实验室，人兽共患病安徽省重点实验室，安徽医科大学病原生物学教研室，合肥 230032 安徽医科大学附属省立医院安徽中医学院第一附属医院检验中心，合肥 230031

目的：探明流行我国刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)基因型分布及其对小鼠毒力，观察我国强毒株在感染小鼠体内的动态分布，以期为我国刚地弓形虫种群进化研究和弓形虫病的诊断防治提供思路。　　方法：采用PCR-RFLP和DNA序列分析对来源... 详细信息

目的：探明流行我国刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)基因型分布及其对小鼠毒力，观察我国强毒株在感染小鼠体内的动态分布，以期为我国刚地弓形虫种群进化研究和弓形虫病的诊断防治提供思路。
　　方法：采用PCR-RFLP和DNA序列分析对来源于国内不同地域的12株刚地弓形虫以及基因型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型虫株的SAG3基因进行比较分析;弓形虫TgCatwh1、1gCatwh3、TgCatwh6、TgCatys2、TgCatsx1和TgCatgd1速殖子1×103个腹腔感染SPF级KM小鼠，观察小鼠的存活率和死亡时间;同时取TgCatwh3感染小鼠，于感染后第2、4、6、8天，荧光定量PCR方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。
　　结果：来源于国内不同地域的12株刚地弓形虫SAG3经PCR-RFLP分型只显示为一种带型，与基因Ⅲ型虫株一致;SAG3基因序列分析显示我国12个弓形虫虫株的NciI酶切位点与国外报道的VEG株一致，同属于基因Ⅲ型，与PCR-RFLP分析结果结果相吻合。除酶切位点外，12个弓形虫株与ToxoDB注册的GT1株及ME49和VEG株进行序列比对分析发现，不同基因型弓形虫株SAG3基因有个别碱基的差异，可能为地理隔离所致的遗传变异。弓形虫TrgCatwh3、TgCatys2、TgCatsx1和TgCatgd株速殖子1×103个腹腔感染KM小鼠，小鼠于5-10天内死亡，腹腔冲洗液涂片可见大量速殖子，为强毒株;弓形虫TgCatwhl和TgCatwh6速殖子经腹腔感染KM小鼠，小鼠只出现一过性的炎症反应，存活小鼠脑组织压片可见大量包囊，为弱毒株。感染后第2天，TgCatwh3虫体即出现在淋巴结和肝组织中，拷贝数分别为2.56±0.097和3.24±0.297，感染后第4天见于血液(4.35±0.507)、心(4.97±0.318)和脑组织(4.89±0.395);血液中虫体随时间推移逐渐增多，第6天时显著增多(P<0.05)，第8天达到高峰(7.75±0.299);心和脑组织中虫体量各时间点之间没有显著性差异(P>0.05)，并以恒定水平持续到实验结束。
　　结论：我国刚地弓形虫具有有限的基因型，即使在相同的基因型内也存在不同毒力的虫株;弓形虫强毒株经腹腔感染KM小鼠，虫体首先侵入腹腔内器官，然后通过血液循环到达全身各器官。

关键词：刚地弓形虫基因型分布毒力分析 DNA序列 SAG3基因

来源：评论

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