检索结果-内蒙古大学图书馆

中国组织工程研究 2012年第18期16卷 3337-3340页

作者：黄洋李永翔沈继龙罗庆礼陆威霍星星安徽医科大学第一附属医院安徽省合肥市230032 安徽病原生物学省级实验室(安徽医科大学) 人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)安徽省合肥市230032

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25-T细胞中的... 详细信息

背景:调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。目的:以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25-T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25-T细胞中的表达。方法:以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25-T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25-T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25-T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。结果与结论:成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25-T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25-T细胞中高表达。

关键词：调节性T细胞 CD4+CD25-T细胞慢病毒 Foxp3 磁珠分选

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重组果糖二磷酸醛缩酶SjLAP和亮氨酸氨基肽酶SjFBPA用于日本血吸虫病的诊断和疗效考核的评价(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第5期29卷 339-347页

作者： Faustina Halm-Lai 罗庆礼钟政荣宋晓蓉陈兆武王林胡梅梅储德勇沈继龙安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230022 Cape Coast大学微生物学教研室加纳

目的评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值。方法异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/BL21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和... 详细信息

目的评价重组亮氨酸氨基肽酶(rSjLAP)和重组果糖二磷酸醛缩酶(rSjFBPA)抗原用于诊断人血吸虫感染以及疗效考核的价值。方法异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导pET-28a-rSjLAP/BL21和pET-28a-rSjFBPA/BL21表达目的蛋白,组氨酸标签亲和纯化柱纯化rSjLAP和rSjFBPA蛋白。88只BALB/c雌性小鼠随机分为4组,A、B和C组(各21只小鼠),D组(25只小鼠)。A、B和C组分别感染5、15和25条日本血吸虫尾蚴。D组为不感染对照组,在实验的第1天全部处死。A、B和C组在感染后第3、7、10、14、20、30和60天,分别处死小鼠3只,采眼球血制备血清,检测其抗体水平。采用单独或联合rSjLAP和rSjFBPA为抗原,ELISA法检测小鼠血清、急性血吸虫病(38份)和慢性血吸虫病患者(96份)血清中的抗体,以健康人(90份)血清为对照,同时检测华支睾吸虫病(33份)、卫氏并殖吸虫病(40份)和钩虫病患者(37份)血清,并检测急性血吸虫病患者吡喹酮治疗(60 mg/kg,2次/d×2 d)后1年的血清(36份)、慢性血吸虫病患者吡喹酮治疗(剂量,疗程同前)后1年(36份)和2年(64份)的血清。结果 BALB/c小鼠在感染后第10天,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用均可检测到小鼠血清中的IgG抗体;B组(0.535±0.053,0.595±0.033,0.696±0.104)和C组(0.548±0.060,0.608±0.063,0.621±0.090)早期抗体水平明显高于A组(0.415±0.038,0.455±0.056,0.498±0.077)(P<0.05)。用rSjLAP为抗原可检测急性血吸虫病和慢性血吸虫病患者血清,阳性率分别为97.4%(37/38)和87.5%(84/96)(P>0.05);用rSjFBPA为抗原检测,其阳性率分别为94.7%(36/38)和88.5%(85/96)(P>0.05);用rSjLAP和rSjFBPA联合为抗原检测,则其阳性率分别为94.7%(36/38)和85.4%(82/96)(P>0.05)。rSjLAP或联合抗原的特异性均为96.7%(87/90),而rSjFBPA的特异性为97.8%(88/90)。给予吡喹酮治疗后,rSjLAP和rSjFBPA单独或联合使用检测急性血吸虫病血清(0.236±0.212,0.287±0.191,0.235±0.120)和慢性血吸虫病患者(0.266±0.124,0.261±0.143,0.265±0.140;0.204±0.074,0.176±0.074,0.176±0.073),抗体滴度普遍下降,与对照组(0.188±0.056,0.173±0.045,0.184±0.051)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。rSjLAP和rSjFBPA单独为抗原检测华支睾吸虫病患者血清,交叉反应率为15.2%(5/33)和12.1%(4/33),两者联合则为9.2%(3/33)。rSjLAP检测卫氏并殖吸虫的交叉反应率为15.0%(6/40),rSjFBPA为12.5%(5/40),两种抗原联合检测为15.0%(6/40)。上述抗原单独或联合检测钩虫的交叉反应率均为8.1%(3/37)。上述各组阳性率与健康人群之间差异有统计学意义(P<0.05),显示该重组抗原在其他蠕虫检测中存在一定的交叉反应。结论用rSjFBPA和rSjLAP作为抗原的ELISA法诊断血吸虫病具有良好的敏感性和特异性。

关键词：日本血吸虫病免疫诊断亮氨酸氨基肽酶果糖二磷酸醛缩酶

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芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制成纤维细胞产生胶原

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第2期29卷 93-98页

作者：杜明占沈继龙吴强胡向阳储德勇安徽医科大学病理学教研室合肥230032 安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的观察芍药苷通过白细胞介素13(IL-13)信号转导通路调控3T3成纤维细胞的细胞激活、增殖和胶原产生。方法分别用不同浓度的芍药苷(200、400、600、800和1 000 mg/L)或重组白介素13(rIL-13,6.25、12.5、50、100和200μg/L),在体外刺激... 详细信息

目的观察芍药苷通过白细胞介素13(IL-13)信号转导通路调控3T3成纤维细胞的细胞激活、增殖和胶原产生。方法分别用不同浓度的芍药苷(200、400、600、800和1 000 mg/L)或重组白介素13(rIL-13,6.25、12.5、50、100和200μg/L),在体外刺激经无血清培养基培养12 h的3T3细胞,同时设空白对照组。培养24 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测rIL-13和芍药苷对细胞增殖的影响,并根据其结果选择1个适宜的rIL-13刺激浓度。用该浓度rIL-13(100μg/L)刺激无血清培养基培养12 h的3T3细胞12 h后,再分别加入不同浓度的芍药苷(200、400、600、800和1 000 mg/L),继续培养24 h,同时设空白对照组。用CCK-8法检测细胞增殖情况,碱裂解法测定培养上清羟脯氨酸含量。蛋白质印迹(Western blotting)分析α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、白介素13受体α1(IL-13Rα1)和信号转导和转录激活因子6(STAT6)的表达情况。RT-PCR检测细胞Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)、IL-13Rα1和STAT6的mRNA水平。结果芍药苷能浓度依赖性地抑制3T3细胞增殖(r=-0.980,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.599,P<0.01)。rIL-13能明显促进3T3细胞增殖(r=0.538,P<0.05)。芍药苷(200、400、600、800和1 000mg/L)能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞增殖(1.780±0.177、1.636±0.073、0.965±0.066、0.623±0.037和0.337±0.022,r=-0.971,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=198.537,P<0.01)。芍药苷还能浓度依赖性地抑制rIL-13刺激的3T3细胞分泌羟脯氨酸(3.030±0.094、2.976±0.047、2.814±0.047、2.652±0.124和2.408±0.124,r=-0.916,P<0.01),且各浓度组间差异有统计学意义(F=13.642,P<0.01)。Western blotting分析结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞α-SMA、IL-13Rα1和STAT6蛋白的表达。RT-PCR结果显示,芍药苷能抑制rIL-13刺激的3T3细胞Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-13Rα1和STAT6 mRNA的转录水平。结论芍药苷通过IL-13/STAT6信号转导通路抑制成纤维细胞增殖、激活和胶原的产生,可能是芍药苷抗日本血吸虫病肝纤维化的机制之一。

关键词：芍药苷成纤维细胞 IL-13 IL-13Rα1 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原

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日本血吸虫表位肽-DNA颗粒性疫苗对小鼠免疫应答的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第4期29卷 319-320,F0003页

作者：汪雪峰张荣波胡友莹杜久伟陈晓军徐志鹏苏川安徽理工大学医学院病原生物学教研室淮南232001 南京医科大学病原生物学系江苏省病原生物学重点实验室南京210029

采用已构建的日本血吸虫Si22．6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗（PDDV）及其混合疫苗免疫C57BL／6小鼠。36只小鼠随机均分6组，即18K对照组（[K]18-空质粒PDDV）、PBS对照组、C组（C-PDDV）、T组（T-PDDV）、B组（B-PDDV）和C-... 详细信息

采用已构建的日本血吸虫Si22．6抗原CTL、Th和B细胞表位肽-DNA颗粒性疫苗（PDDV）及其混合疫苗免疫C57BL／6小鼠。36只小鼠随机均分6组，即18K对照组（[K]18-空质粒PDDV）、PBS对照组、C组（C-PDDV）、T组（T-PDDV）、B组（B-PDDV）和C-T-B组（C-PDDV、T-PDDV和B-PDDV等量混合），每鼠分别在第0、3和6周麻醉下经尾脊部皮下注射100μlPDDV（含10μgDNA和28μg肽），对照组注射等量的空质粒DNA和[K]18肽或PBS。末次免疫后7d，脱颈处死，制备脾细胞悬液，经日本血吸虫成虫抗原（SWA）刺激后根据，^3H标记的胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR）检测脾细胞增殖反应，ELISA法检测脾细胞培养上清中γ干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-4（IL-4）的含量。EUSA结果显示，T组小鼠脾细胞中IFN-γ的含量[（76．0±11．2）ps／ml]，高于PBS[（13．0±2．1）pg／ml]和18K对照组[（14．0±3．2）pg／ml]（P〈0．01），T组和C—T-B组小鼠脾细胞中IL-4的水平分别为（152．0±21．1）和（86．0±12．2）pg／ml，高于其他组（P〈0．01或P〈0．05）。T组小鼠脾细胞经SWA刺激后，增殖反应明显高于PBS和18K对照组（p〈0．01）；而C-T-B组小鼠脾细胞的增殖反应与PBS和18K对照组相比．差异无统计学意义（P〉0．05）。说明T-PDDV和C-T-B混合PDDV诱导的免疫应答强于单价的C-PDDV和B-PDDV。

关键词：日本血吸虫颗粒性肽-DNA混合疫苗小鼠免疫应答

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芍药苷通过IL-13信号通路抑制日本血吸虫病小鼠肝脏纤维化

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安徽医科大学学报 2011年第4期46卷 314-320页

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸... 详细信息

目的观察芍药苷(PAE)对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化及白介素13(IL-13)信号转导通路中的IL-13、信号转导蛋白和转录激活子6(STAT6)、白介素-13受体α1(IL-13Rα1)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)mRNA表达的影响,探讨PAE预防血吸虫病肝纤维化的作用机制。方法 BALB/c小鼠感染血吸虫尾蚴12 d开始,药物组每天灌胃给予PAE[0.2 ml,60 mg/(kg.d)×30 d],正常和模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠,并于感染后第42天起所有各组灌胃给予吡喹酮[500 mg/(kg.d)×2 d]以杀虫。在感染后第8、12周末,分别处死小鼠,取血及肝脏,分别用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量;碱裂解法测量肝脏羟脯氨酸(HYP)含量;苏木精-伊红(HE)和Masson胶原纤维染色法观察肝虫卵性肉芽肿面积和评价肝纤维化程度;免疫组化染色观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、IL-13、STAT6、IL-13Rα1的表达情况;RT-PCR检测Col–Ⅰ、Col-ⅢmRNA的表达情况。结果感染后第8、12周时,模型组小鼠血清HA水平和肝脏HYP水平显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏虫卵肉芽肿面积和纤维化程度显著高于药物组(P<0.01);肝脏α-SMA阳性细胞的表达强度显著高于正常组和药物组(P<0.01);肝脏IL-13表达水平显著高于药物组(P<0.01);肝脏Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA水平显著高于正常组和药物组(P<0.01)。感染后第8周时模型组小鼠STAT6、IL-13Rα1表达水平显著高于药物组(P<0.01)。结论 PAE可能通过抑制IL-13信号转导通路而抑制日本血吸虫病肝纤维化。

关键词：芍药苷血吸虫日本肝硬化白细胞介素13

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日本血吸虫感染鼠巨噬细胞IL-13Rα2的表达

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中国人兽共患病学报 2011年第7期27卷 597-600,609页

作者：王维郑胜生祁瑶闻惠琴刘丽丽沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧... 详细信息

目的检测IL-13的诱骗受体IL-13Rα2在血吸虫病巨噬细胞的表达,为从细胞水平探讨Th2型免疫性疾病分子病理机制奠定基础。方法建立日本血吸虫病鼠模型,采用免疫荧光标记法分别检测肝肉芽肿和原代巨噬细胞IL-13Rα2蛋白的表达情况。结果荧光显微镜下观察:肝肉芽肿内可见似"咖啡豆样"散在分布的IL-13Rα2免疫阳性信号,巨噬细胞膜内缘呈异常增强的环状荧光。结论巨噬细胞是IL-13Rα2阳性表达细胞,IL-13Rα2是血吸虫病重要的免疫病理调节分子。

关键词：血吸虫病肉芽肿巨噬细胞 IL-13Rα2 CD68 免疫荧光染色技术

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卡波氏肉瘤相关疱疹病毒亚型分析研究

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中华全科医学 2012年第11期10卷 1774-1775页

作者：张莹欧阳新星曾先聪俞海洋李进刘淑均王林定安徽医科大学微生物学教研室合肥市230032 中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室武汉市430071 中国科学院研究生院北京市100039 安徽省合肥市蜀山区疾病预防控制中心检验科 230039 安徽医科大学第一附属医院输血科合肥市230022 安徽医科大学病原与免疫学实验室

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒为双链DNA病毒,基因组全长为160～170 kb。该病毒基因最早于1994年由美国哥伦比亚大学病理学家Chang等用代表性差异分析法首先在艾滋病患者并发的卡波氏肉瘤组织中发现。常用于KSHV亚型分析的基因片段有:ORF26、O... 详细信息

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒为双链DNA病毒,基因组全长为160～170 kb。该病毒基因最早于1994年由美国哥伦比亚大学病理学家Chang等用代表性差异分析法首先在艾滋病患者并发的卡波氏肉瘤组织中发现。常用于KSHV亚型分析的基因片段有:ORF26、ORF75、K1、K15等。基于ORF26分型,最初采用的是330 bp和233 bp的ORF26基因片段,可将KSHV分为A、B、C三个亚型。目前,根据K1基因的多态性,主要将KSHV分为A、B、C、D、E、F亚型,各亚型在氨基酸水平上具有15%～30%的区别。目前,已知的K15有3个等位基因,分别是:P亚型、M亚型和N亚型。其中,N亚型与M型的核苷酸水平差异则高达90%。基于ORF75可以将KSHV分为A、B、C及N亚型。其中,A亚型主要流行于经典的KS患者,而B、C亚型主要见于非洲地区,同时所有亚型都在美国AIDS相关的KS患者中有发现。

关键词：卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 ORF26 K1 K15 亚型分析

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IgY-和IgG-ELISA用于日本血吸虫病循环抗原检测的效果比较

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中华预防医学杂志 2011年第9期45卷 859-860页

作者：周银娣温和汪六庆沈继龙合肥市第一人民医院检验科安徽省230032 徐州医学院病原生物学教研室安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄... 详细信息

目前，血吸虫病循环抗原的检测敏感度和特异度均不理想，交叉反应有待解决[1]。免疫检测体系中，探针的特异度和亲和力是影响检测效果的主要因素。IgY是卵黄免疫球蛋白的简称，是用特异性抗原免疫产蛋母鸡后母鸡血液中的抗体转移到蛋黄中去的，且是蛋黄中惟一存在的抗体，和哺乳动物的IgG相比，IgY具有高特异、高灵敏度，

关键词： IgG-ELISA 循环抗原检测日本血吸虫病卵黄免疫球蛋白特异度交叉反应抗原免疫哺乳动物

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染色法鉴别旋毛形线虫成虫死活的实验观察

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蚌埠医学院学报 2011年第10期36卷 1041-1042,1046页

作者：王小莉李亮方强崔洁郭凯沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠学院食品与生物工程系安徽蚌埠233000

目的:探讨快速鉴别旋毛形线虫成虫死活的染色方法。方法:分别以0.5%番红、1.0%中性红和0.5%甲基蓝3种染液,对死或活旋毛形线虫成虫进行染色。结果:0.5%番红、1.0%中性红染液能使死亡旋毛形线虫成虫着色;旋毛形线虫活成虫对3种染液均不... 详细信息

目的:探讨快速鉴别旋毛形线虫成虫死活的染色方法。方法:分别以0.5%番红、1.0%中性红和0.5%甲基蓝3种染液,对死或活旋毛形线虫成虫进行染色。结果:0.5%番红、1.0%中性红染液能使死亡旋毛形线虫成虫着色;旋毛形线虫活成虫对3种染液均不着色。结论:0.5%番红、1.0%中性红染液染色均可快速鉴别旋毛形线虫成虫死活。

关键词：旋毛形线虫成虫番红中性红甲基蓝

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抗肠道病毒71型外壳蛋白1卵黄抗体的制备和鉴定

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徐州医学院学报 2011年第5期31卷 300-305页

作者：汪六庆胡元生沈继龙刘宜升徐州医学院病原生物学教研室江苏徐州221002 合肥市第一人民医院检验科安徽合肥223002 安徽医科大学病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽合肥230032

目的克隆肠道病毒71型（EV71）BrCr株外壳蛋白1（VP1）基因,构建原核表达载体PET28a/VP1,表达VP1重组蛋白,以VP1免疫产蛋母鸡,获得抗VP1的鸡免疫球蛋白（IgY）.方法培养Vero细胞,利用Vero细胞增殖肠道病毒EV71 BrCr株,提取病毒总RNA,... 详细信息

目的克隆肠道病毒71型（EV71）BrCr株外壳蛋白1（VP1）基因,构建原核表达载体PET28a/VP1,表达VP1重组蛋白,以VP1免疫产蛋母鸡,获得抗VP1的鸡免疫球蛋白（IgY）.方法培养Vero细胞,利用Vero细胞增殖肠道病毒EV71 BrCr株,提取病毒总RNA,利用RT-PCR扩增出VP1目的基因,目的基因插入克隆载体pGEM-T,提取重组质粒,经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切获得目的基因,插入原核表达载体pET-28a,重组子同时BamHⅠ,EcoRⅠ双酶切和测序鉴定,转化入感受态工程菌*** BL21（DE3）,获得阳性重组工程菌,经IPTG诱导获得表达融合蛋白,试剂盒纯化蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,用VP1蛋白免疫开产母鸡,收集鸡蛋,利用EGG stractTM IgY Purification System试剂盒提取卵黄抗体IgY,间接ELISA测滴度,SDS-PAGE和Western blotting验证其表达量和免疫活性.结果本实验成功扩增出肠道病毒EV71 BrCr株VP1基因,获得了含重组表达质粒pET28a/VP1的阳性工程菌株,经IPTG诱导能高效表达VP1蛋白,VP1经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,利用纯化后VP1蛋白免疫产蛋母鸡,提取的IgY经ELISA 鉴定后其滴度为1：104,SDS-PAGE和Western blotting证实为抗VP1的特异性IgY.结论成功的从EV71 BrCr株扩增出VP1基因,构建了PET28a/VP1表达载体,获得高效表达融合蛋白,免疫产蛋母鸡后制备高效价抗VP1蛋白的特异性IgY.

关键词：人肠道病毒71型外壳蛋白1 卵黄抗体 IgY

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