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中国人兽共患病学报 2006年第1期22卷 18-21页

作者：袁小松沈继龙汪学龙董慧芬蒋明森安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 武汉大学医学院病原生物学教研室

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blo... 详细信息

目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性。方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blot验证转基因在成虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在成虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功的扩增出760bp和276bp的预期大小的片断,Western-blot证实了EGFP基因在成虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察到,EGFP主要定位在成虫的皮层,口吸盘和尾部尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫成虫体内并获得表达,为转基因血吸虫和基因功能的研究打下基础。

关键词：电穿孔技术增强型绿色荧光蛋白转基因血吸虫

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重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3不同剂量对免疫保护性的影响

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中华预防医学杂志 2006年第4期40卷 248-252页

作者：刘庆中胡元生沈继龙江宝玲汪学龙温州医学院附属第一医院检验科 325000 安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;... 详细信息

目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB／c小鼠并进行攻击感染实验。在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率。并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体。结果成功表达出rSj14- 3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28．20％、第2组43．10％、第3组40．00％;各组的减卵率分别为(按以上组序)41．80％、57．50％、55．70％。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6．8、第2组t=8．7、第3组t=7．3,各组P值均<0．01;减卵率:第1组t=11．23、第2组t=11．54、第3组t=7．99,各组P值均<0．01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:X2=8．96,P<0．05;减卵率:X2=15．69,P<0．05)、第1组与第3组间(减虫率:X2=6．52,P<0．05;减卵率:X2=12．52,P<0．05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:X2=1．20,P>0．05;减卵率:X2=0．93,P>0．05)。各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显。结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好。

关键词：血吸虫,日本 RGS蛋白质类重组蛋白质类抗体生成

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重组Sj14-3-3,SjGST及mIL-12/聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)缓释微球对小鼠免疫保护性的研究

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中国人兽共患病学报 2006年第11期22卷 1017-1021页

作者：罗飞沈继龙王志成李敏郑美娟罗庆礼袁小松储德勇教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032

目的研究聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球给药系统在血吸虫病分子疫苗中的应用,并探讨rSj14-3-3,rSjGST及mIL-12作为疫苗的协同作用,及mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th)在抗血吸虫病中的作用。方法从pET28a/Sj14-3-3和GST重组质... 详细信息

目的研究聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球给药系统在血吸虫病分子疫苗中的应用,并探讨rSj14-3-3,rSjGST及mIL-12作为疫苗的协同作用,及mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th)在抗血吸虫病中的作用。方法从pET28a/Sj14-3-3和GST重组质粒中诱导表达rSj14-3-3及rSjGST,过柱纯化。构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)mIL-12,并共同包入PLGA缓释微球。对制备的微球进行体外释放,观察其释放速度。分组免疫BALB/c小鼠,进行尾蚴攻击感染实验。在攻击感染6w后,剖杀小鼠,计算各组的减虫率。结果各组的减虫率:单独rSj14-3-3组为27.6%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12组34.9%,rSj14-3-3+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组37.5%,rSj14-3-3与rSjGST混合后+PcDNA3.1(+)mIL-12PLGA微球组38.8%;各组减卵率分别为(按以上组序)35.3%,49.1%,50.5%,和43.1%。结论PLGA微球给药系统可诱导并调节体液与细胞免疫从而增强了疫苗的抗感染,抗生殖作用。但rSj14-3-3和rSjGST抗原之间未表现出协同作用。mIL-12刺激机体产生CTL和辅助性T细胞(Th),在BALB/c鼠抗血吸虫攻击感染发挥作用,增强了疫苗保护作用。

关键词：日本血吸虫分子疫苗 PLGA 免疫

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结膜吸吮线虫病的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第4期24卷 299-303页

作者：王增贤沈继龙王红岩 Domenico Otranto 安徽医科大学病原生物学教研室省部共建教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽医科大学人兽共患病研究所安徽省五河县人民医院 Faculty of Veterinary Medicine University of BariCasamassima Km370010 ValenzanoBariItaly

本文对结膜吸吮线虫的生物学和致病等的研究进行了综述,包括:结膜吸吮线虫病的分布、该虫形态结构及生活史、致病机制、临床诊断、治疗和预防等。

关键词：结膜吸吮线虫病流行分布媒介冈田绕眼果蝇变色伏绕眼果蝇

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日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3的免疫诊断价值评估

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安徽医科大学学报 2006年第6期41卷 635-638页

作者：李敏沈继龙罗庆礼王志成郑美娟罗飞李丛磊安徽医科大学人兽共患病研究所病原生物学教研室教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法,比较其与可溶性虫卵抗原(SEA)ELISA和间接血凝试验(IHA)检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及... 详细信息

目的探讨重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)间接ELISA用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法表达并利用纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA法,比较其与可溶性虫卵抗原(SEA)ELISA和间接血凝试验(IHA)检测急慢性日本血吸虫病患者的阳性率及其它寄生虫患者和正常人血清的交叉反应。结果rSj14-3-3-ELISA、SEA-ELISA和IHA3种方法的敏感性分别为90·8%、94·2%和90·0%,特异性分别为87·0%,84·8%和84·8%,差异无显著性(P>0·05)。结论rSj14-3-3抗原间接ELISA法具有可用于日本血吸虫病免疫诊断的价值。

关键词：血吸虫病,日本/诊断 14-3-3蛋白质类酶联免疫吸附测定

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三氧化二砷对鼠恶性黑素瘤B_(16)细胞凋亡的影响

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蚌埠医学院学报 2006年第3期31卷 233-234页

作者：马佳沈继龙黄桦陈素莲陈治文安徽医科大学病原生物学教研室安徽合肥230032 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室安徽合肥230032 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233030

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的... 详细信息

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对鼠恶性黑素瘤B16细胞诱导凋亡的影响。方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的As2O3诱导B16细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率。结果:As2O3浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L时,B16细胞的早期凋亡率分别为7.18%、21.1%、3.59%,晚期凋亡率分别为2.63%、5.35%、6.34%,总凋亡率分别为9.81%、26.45%、9.93%。结论:B16细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率对As2O3有浓度依赖关系,高浓度的As2O3使B16细胞出现坏死。

关键词：黑素瘤三氧化二砷细胞凋亡细胞株

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血清前白蛋白检测在晚期血吸虫病诊断中的临床意义

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临床输血与检验 2006年第3期8卷 193-194页

作者：罗江龙罗庆礼方静沈继龙安徽省东至县血防专科医院 247230 安徽医科大学教育部省部共建重点实验室病原生物学教研室

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血... 详细信息

目的探讨晚期血吸虫病(简称晚血)患者血清前白蛋白(PA)的变化及其对晚血的诊断价值。方法采用免疫比浊法检测177例晚血患者血清PA水平;同时采用溴甲酚绿法测定血清白蛋白(ALB),比较不同肝损害程度患者血清PA和ALB的水平及其差异。结果血清PA水平在不同的血吸虫性肝损害程度的差异均有显著性(P<0.05);而血清ALB水平在血吸虫性肝损害程度级与级间的差异无显著性(P>0.05),而在级与级间的差异有显著性(P<0.05)。结论检测PA较ALB能更灵敏地反映血吸虫性肝损害程度,并对晚血肝损害的早期诊断、病情判断和预后有一定的参考价值。

关键词：前白蛋白白蛋白晚期血吸虫病免疫比浊

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用电穿孔法将绿色荧光蛋白基因导入日本血吸虫童虫并表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第4期23卷 202-205页

作者：袁小松沈继龙汪学龙胡元生罗庆礼安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RN... 详细信息

目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫童虫体内异源表达,以及电穿孔技术在血吸虫基因转化中应用的可能性。方法应用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入机械转化的日本血吸虫童虫体内,提取分离体外培养48 h童虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转基因在童虫体内的存在、转录和翻译。同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在童虫体内进行定位。结果PCR和RT-PCR分别成功扩增出760 bp和276 bp的预期大小的片段,Western blotting证实了EGFP基因在童虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察表明EGFP主要定位在童虫的皮层和副皮层,虫体前端尤为明显。结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫童虫体内并获得表达。

关键词：日本血吸虫电穿孔荧光蛋白基因转基因基因表达

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重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 316-318页

作者：钟政荣沈继龙汪学龙胡元生沈继录王家传李小月安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特... 详细信息

目的制备重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体(McAb),并检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。方法将筛选出分泌抗人14-3-3zeta的杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔,制备腹水McAb,用辛酸-饱和硫酸铵沉淀法纯化,并鉴定其效价、纯度、浓度、特异性以及与天然抗原的亲和力,再用此单抗检测14-3-3蛋白在人体组织器官的分布。结果腹水及纯化后的单克隆抗体的效价分别为1∶107和1∶106。纯化后的纯度达97%,浓度为5mg/ml,能识别天然的人14-3-3蛋白,并能有效地识别兔和鼠脑组织的14-3-3蛋白。在人脑、肾、肺、肝、胃、卵巢、乳腺、结肠、胰腺等组织器官中,均检出14-3-3蛋白。结论已成功制备出重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体,并应用于实际检测,为研究14-3-3蛋白在机体生理和病理情况下的作用机制奠定了基础。

关键词：重组人14-3-3zeta亚型单克隆抗体制备鉴定分布作用机制

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重组弓形虫14-3-3抗原用于弓形虫血清抗体的检测

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安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 147-149页

作者：蔡娟都建汪学龙沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽省六安市人民医院检验科六安237005

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,... 详细信息

目的　探讨重组弓形虫信号转导蛋白14- 3- 3(Toxo14- 3- 3)在弓形虫病免疫诊断中的价值。方法　根据弓形虫Beverly株猫肠上皮细胞增殖阶段的14- 3 -3编码基因,设计合成引物,自RH株速殖子基因组克隆Toxo14- 3 -3的ORF,克隆pET 28a质粒,转化大肠杆菌,获得表达产物并纯化融合蛋白,以此抗原包被反应板进行ELISA检测,并与粗制抗原及市售试剂进行比较。结果　对400份血清标本的平行检测,Toxo14 -3 -3抗原、粗制抗原和市售试剂盒的阳性率分别为2 5%、3 0%和3 .25%,三者之间差异无显著性(P>0 .05);三者之间的符合率为99 0%、98.8%和99 .0%,差异无显著性(P>0. 05 )。结论　重组Toxo14 -3- 3抗原检测弓形虫血清抗体具有潜在价值。

关键词：弓形虫病/诊断抗体原虫酶联免疫吸附测定

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