检索结果-内蒙古大学图书馆

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2017年第4期35卷 382-386页

作者：沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032

免疫力正常的个体获得性弓形虫感染常无明显临床表现而呈慢性感染。隐性感染活化引起的弓形虫病是包括艾滋病等免疫功能受损患者常见的甚至致死性的并发感染疾病。孕妇的急性弓形虫感染可导致严重的不良妊娠结局。本文针对我国行业标准... 详细信息

免疫力正常的个体获得性弓形虫感染常无明显临床表现而呈慢性感染。隐性感染活化引起的弓形虫病是包括艾滋病等免疫功能受损患者常见的甚至致死性的并发感染疾病。孕妇的急性弓形虫感染可导致严重的不良妊娠结局。本文针对我国行业标准《弓形虫病的诊断》(WST 486-2015)的若干术语概念以及实验室检测指标判读的困惑进行试解析,并介绍了国外孕妇弓形虫感染的实验室检测以及处置方案,旨在为我国弓形虫病防治提供参考。

关键词：弓形虫病血清学诊断易感性先天性弓形虫病

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弓形虫棒状体蛋白ROP18的优化表达

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中国病原生物学杂志 2017年第4期12卷 345-349页

作者：程正阳苏蕊张贤李叶林朱万博余莉安徽医科大学病原生物学教研室人兽共患病安徽省重点实验室安徽病原生物学省级实验室安徽合肥230032

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行... 详细信息

目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行优化,合成优化后的全长基因(ROP18u)并将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18u重组质粒;以优化后的ROP18u基因为模板,PCR扩增去除N端信号肽和前功能区序列的截短ROP18片段(ROP18uc),将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18uc重组质粒。所有重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc于30℃诱导培养4h-6h,分别检测到分子质量约为88ku和77ku的重组蛋白,该蛋白能被GST单克隆抗体和ROP18多克隆抗体识别。结论成功构建了pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc原核表达载体,密码子优化未能显著提高ROP18重组蛋白的表达量,但提高了可溶性蛋白的含量。

关键词：弓形虫 ROP18 原核表达

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基于CRISPR/Cas9技术的弓形虫rop16_(I/III)缺陷虫株的构建及毒力鉴定

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中国人兽共患病学报 2017年第1期33卷 22-26,31页

作者：王聪程维晟刘芳张焰 FaustinaPappoe 罗庆礼闻慧琴邓芳徐元宏沈继龙安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽医科大学附属省立肿瘤医院检验科合肥230001

目的构建并鉴定弓形虫RH株rop16_(I/III)缺陷虫株。方法利用CRISPR-Cas9技术进行构建基因缺陷虫株。运用E-CRISPR数据库设计gRNA,并使用定点突变试剂盒突变pSAG1::Cas9-U6::sgUPRT质粒上的gRNA,构建pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒。此外将rop16上游序列、乙胺嘧啶抗性基因、rop16下游序列3个片段连接成donorDNA,克隆于pUC19质粒上,PCR扩增donor DNA片段。pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和donor DNA片段电穿孔转染弓形虫,电转后悬液接种于HFF-1细胞中,3μmol/L乙胺嘧啶筛选电转后的虫株。PCR和Western blotting鉴定克隆化筛选虫株。吉姆萨染色分别比较RH株和RHΔrop16株对HFF-1细胞的增殖与入侵。并比较RH株和RHΔrop16株分别感染昆明小鼠后小鼠的生存和死亡率。结果经测序比对,成功构建了pSAG1::Cas9-U6::sgrop16质粒和pUC19-donorDNA质粒。PCR鉴定结果显示,DHFR编码(编码乙胺嘧啶抗性基因)序列成功插入至靶点位置,Western blotting分析结果未见RHΔrop16株有Rop16_(I/III)蛋白表达。吉姆萨染色后计数结果表明,RH株感染的细胞内每个纳虫泡内速殖子的平均数显著高于RHΔrop16虫株。毒力试验结果显示,RH株感染的小鼠在第7d即出现死亡,而rop16_(I/III)缺陷株在第9d出现死亡,但两种弓形虫株感染动物在第10d均全部死亡,两组间无统计学差异。结论利用CRISPR-Cas9技术成功构建了rop16_(I/III)缺陷的弓形虫RH虫株,rop16_(I/III)基因敲除对弓形虫RH株毒力无明显影响。

关键词：刚地弓形虫 rop16(I/III) CRISPR/Cas9 RH株基因缺陷

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弓形虫病的若干术语释义及实验室诊断的临床意义

弓形虫病的若干术语释义及实验室诊断的临床意义

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第九届北京热带医学与寄生虫学论坛

作者：沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室安徽省病原生物学实验室安徽省人兽共患病重点实验室

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JQ1对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化的抑制作用及机制

JQ1对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化的抑制作用及机制

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2017年全国医学寄生虫学学术研讨会

作者：丁晗刘淼沈际佳安徽医科大学病原生物学教研室安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室安徽合肥 230032

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弓形虫感染对中枢神经系统的损伤机制及其对宿主行为的影响

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中国人兽共患病学报 2016年第8期32卷 751-754页

作者：程正阳张贤苏蕊余莉安徽医科大学病原生物学教研室、人兽共患病安徽省重点实验室、安徽病原生物学省级实验室合肥230032

弓形虫是引起人畜共患弓形虫病的病原体,它的感染范围广泛,感染途径多样,对人类健康和畜牧业发展危害极大。弓形虫感染与人类神经系统疾病关系密切,感染者常常会表现出反应迟钝,性格缺失等行为异常,严重时还会出现精神分裂,情绪失控,自... 详细信息

弓形虫是引起人畜共患弓形虫病的病原体,它的感染范围广泛,感染途径多样,对人类健康和畜牧业发展危害极大。弓形虫感染与人类神经系统疾病关系密切,感染者常常会表现出反应迟钝,性格缺失等行为异常,严重时还会出现精神分裂,情绪失控,自主暴力等精神性问题。本文主要从弓形虫入侵中枢神经系统的机制,对中枢神经系统的影响和宿主行为学的变化3个方面进行综述。

关键词：弓形虫中枢神经系统宿主行为

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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 203-207页

作者：杨小迪孙希萌王旗崔洁计永胜薛洪宝胡守锋苏胖胖李江艳孟令文乔继琛丁忆晗宋迪吴琦方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069 安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 蚌埠医学院化学教研室蚌埠233030

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×... 详细信息

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×106个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。结果弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P<0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P>0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20.0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P<0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P<0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P<0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组的(73.8±11.3)%和(64.1±14.4)%(P<0.01)。结论金丝桃素具有较强的体外抗弓形虫速殖子效果,且随剂量增高和作用时间延长抗虫效果更明显。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫速殖子体外效果

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高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及VEGF、MMP-2表达的影响

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 363-368页

作者：李晓峰束军程宇徐胜沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖)、顺铂组(5、10、20、40μmol/L顺铂)和联合组(30 mmol/L葡萄糖联合5、10、20、40μmol/L顺铂),分别处理48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖率,比较不同组别间细胞增殖率的差异;对照组、葡萄糖组、甘露醇组处理24 h和48 h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞中VEGF、MMP-2的mRNA水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF、MMP-2的蛋白浓度,比较不同组别间VEGF、MMP-2的表达水平差异。结果除10 mmol/L葡萄糖组外,葡萄糖组的细胞增殖率均高于对照组(P<0.05);相同顺铂浓度下,联合组的细胞增殖率高于顺铂组(P<0.05);与对照组比较,葡萄糖组VEGF、MMP-2表达明显增强(P<0.05),且对葡萄糖浓度有一定依赖性,葡萄糖浓度为30 mmol/L时VEGF mRNA、MMP-2的mRNA和蛋白水平达最高值,40 mmol/L时VEGF蛋白浓度最高;相同干预条件,48 h细胞的VEGF、MMP-2表达水平高于24 h(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能促进肺腺癌A549细胞的增殖,增强对顺铂的耐受力及VEGF、MMP-2的表达。

关键词：葡萄糖肺腺癌生长血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-2

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徐州猫源弓形虫株基因型及其毒力研究

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安徽医科大学学报 2016年第10期51卷 1421-1425页

作者：朱长东程维晟罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室、安徽病原生物学省级实验室、人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽省庐江县人民医院检验科庐江231500

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico... 详细信息

目的了解猫源弓形虫株基因型和毒力,为研究其致病机制奠定基础。方法自江苏徐州诱捕采集40只流浪家猫,昆明小鼠腹腔接种分离弓形虫;采用PCR-RFLP法对10个基因分型位点（SAG1、SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358、PK1及Apico）进行PCR扩增,扩增产物用相应的限制性核酸内切酶水解后观察分析电泳图谱;将分离的虫株分别感染SPF级BALB/c小鼠和昆明鼠,观察其存活时间和存活率,分析毒力强弱。选取弓形虫的毒力相关效应分子ROP16和GRA15,PCR扩增出基因序列,比较其多态性。结果共获得6株猫源弓形虫虫株,基因分型结果显示,两株为Chinese 1型（即Toxo DB#9型）,4株为Toxo DB#205型;此6株弓形虫虫株对BALB/c小鼠和昆明鼠均有较强的毒性,两种小鼠分别在感染后5～7 d和9～12 d均100%死亡。毒力相关基因GRA15和ROP16的分析显示,Chinese 1型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅰ/Ⅲ型,Toxo DB#205型虫株为GRA15Ⅱ和ROP16Ⅱ型。结论徐州地区猫源弓形虫虫株具有有限遗传多态性,且均为强毒的虫株。Toxo DB#205型虫株的主要毒力效应分子ROP16Ⅱ不同于Chinese 1型虫株,这一毒力相关基因的多态性与其毒力的关系尚待深入研究。

关键词：弓形虫基因型毒力 GRA15 ROP16

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miRNA-16对肺腺癌A549细胞增殖和VEGF-A表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2016年第4期51卷 489-492页

作者：徐胜束军李晓峰程宇沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRN... 详细信息

目的探讨miRNA-16作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖的影响,以及对VEGF-A表达水平的影响。方法将50 nmol/L,的miRNA-16和阴性对照序列用Lipofectamine 2000转染进人肺腺癌A549细胞中,通过qRT-PCR法检测转染后A549细胞中miRNA-16的表达水平,MTT法检测转染miRNA-16后细胞的增殖抑制情况,ELISA法检测转染miRNA-16后细胞VEGF-A表达水平。结果转染培养24h后,测得转染组miRNA-16表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);转染组细胞VEGF-A表达水平较阴性对照组和空白对照组明显降低(P<0.05)。结论 miRNA-16能引起细胞增殖抑制,并且可能与下调VEGF-A的表达有关。

关键词：肺腺癌 VEGF-A miRNA-16 细胞增殖

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