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华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会

作者：邱凌陈良华钟雪明艳林童庆宣陈清西厦门大学生命科学学院教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室厦门华侨亚热带植物引种园

生物体中黑色素的生成与酪氨酸酶、酪氨酸和分子氧的浓度密切相关。黑色素形成中的关键酶酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一种含铜的氧化还原金属酶,广泛存在于微生物、植物、动物中,具有独特的双重催化功能。它能催化酪氨酸羟化产生L-多巴,... 详细信息

生物体中黑色素的生成与酪氨酸酶、酪氨酸和分子氧的浓度密切相关。黑色素形成中的关键酶酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一种含铜的氧化还原金属酶,广泛存在于微生物、植物、动物中,具有独特的双重催化功能。它能催化酪氨酸羟化产生L-多巴,再将多巴氧化成多巴醌,进而继续反应生成一系列引起褐变的色素类物质。黑色素体的进行性减少或消失而引起的局限性或泛发性脱色素病变是导致白癜风的直接原因。根本原因在于多因素刺激引起的皮肤和毛囊中黑色素细胞的酪氨酸酶活性减低或消失。因此,寻找对酪氨酸酶具有激活作用的效应物,进行药效学研究,是治疗白癜风病症的关键因素。从天然植物中提取的酪氨酸酶激活剂,比化学合成的激活剂有着更广泛安全的应用前景,特别是应用在美容养颜、疾病防治等领域。本文从多种亚热带植物中筛选出10种对酪氨酸酶具有激活作用的亚热带植物的提取物:毛麝香、千里光、翅柄马兰、使君子、冬青、倒地铃、大青、扭序花、白面风、斑鸠菊等。结果表明,所得的提取物在浓度低于0.4 mg/mL时能使蘑菇酪氨酸酶的活力提高1.3～5.0倍。其中白面风的乙醇提取物对酪氨酸酶的激活调控最为明显。提取物对酪氨酸酶的激活动力学的分析和研究对寻找白癜风的有效药物具有理论指导意义。固定提取物的浓度,改变底物浓度,用Lineweaver-Burk双倒数作图求出激活剂作用下的表观米氏常数(Km app)和表观最大反应速度(Vm app),与不加效应物时原始的Km和Vm进行比较,以判定激活剂作用于底物和酪氨酸酶的方式。大多数植物激活剂表现出一种混合性的激活作用,Km值变小,Vm增大,表明提取物在酶促反应体系中,既通过影响底物与酶的结合,又改变酶的空间构型,使酶与底物的亲和力增强,从而提高反应速度。大青乙醇提取物、倒地铃正丁醇提取物、扭序花正丁醇提取物对酪氨酸酶的激活作用表现为Km值减小,Vm值不变。说明这些激活剂激活酪氨酸酶的方式不是提高酶促反应的速率,而是提高酶与底物的亲和力来完成的。

关键词：亚热带植物酪氨酸酶激活作用动力学

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枇杷叶三萜酸的抗炎作用

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安徽医科大学学报 2007年第2期42卷 174-178,214页

作者：葛金芳李俊姚宏伟胡成穆彭磊金涌吕雄文张磊余世春安徽医科大学药学院合肥230032 浙江大学医学院国家食品药品监督管理局浙江呼吸药物研究实验室杭州310031 安徽省安泰医药生物技术有限责任公司合肥230032

目的研究枇杷叶三萜酸(TAL)对急、慢性炎症的抑制作用。方法采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型,观察... 详细信息

目的研究枇杷叶三萜酸(TAL)对急、慢性炎症的抑制作用。方法采用二甲苯诱导的小鼠耳肿胀、冰醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性实验、角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和福氏完全佐剂诱导的大鼠佐剂性关节炎模型,观察TAL的抗炎作用。结果TAL(75、225、675mg/kg)ig给药对二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和冰醋酸引起的腹腔毛细血管渗出有明显的抑制作用;TAL(50、150、450mg/kg)ig给药可明显减轻角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀、棉球诱导的大鼠肉芽肿和AA大鼠的原发性、继发性炎症病变。进一步研究表明,TAL(0.05、0.5、5、50mg/L)体外给药可增加ConA、LPS诱导的AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生,同时抑制AA大鼠PMФ产生过高的IL-1。结论TAL具有良好的抗炎作用。

关键词：三萜类/药理学炎症/中药疗法枇杷叶/药理学枇杷叶/化学三萜酸

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白细胞介素-10信号转导机制对C57BL/6和MRL/lpr^-小鼠脾细胞功能及活性影响的比较

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中华风湿病学杂志 2008年第9期12卷 654-654页

作者：张婧刁骋崔华东李莉祁赞梅姜奕中国医科大学附属第一医院中心实验室沈阳243031 中国医科大学基础医学院免疫教研室安徽省芜湖第二人民医院肾脏科 241000

我们以C57BL／6和MRL/lpr^-小鼠的脾细胞为研究对象，进一步研究白细胞介素（IL）-10受体的信号转导机制及其在系统性红斑狼疮（SLE）发病过程中所起的作用。

关键词：白细胞介素-10 信号转导机制 C57BL/6 脾细胞细胞功能小鼠 C57BL/6 系统性红斑狼疮

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白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2亚型的影响

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哈尔滨医科大学学报 2007年第1期41卷 4-7页

作者：鲍岩岩刘艳唐晓波刘秉义武正华朱大岭哈尔滨医科大学药学院哈尔滨医科大学第二临床医学院临床药物研究所黑龙江哈尔滨150081 黑龙江省生物医药工程重点实验室

目的观察白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2亚型(CYP 1A2)的影响。方法实验组(高、中、低剂量组)大鼠分别给予白花蛇舌草水提取物5．84g/kg、8．26g／kg、11．68g/kg,对照组给予生理盐水,用蛋白印迹方法测定大鼠CYP 1A2的蛋白... 详细信息

目的观察白花蛇舌草水提取物对大鼠细胞色素P450 1A2亚型(CYP 1A2)的影响。方法实验组(高、中、低剂量组)大鼠分别给予白花蛇舌草水提取物5．84g/kg、8．26g／kg、11．68g/kg,对照组给予生理盐水,用蛋白印迹方法测定大鼠CYP 1A2的蛋白表达。通过高效液相色谱(HPLC)法测定全血中咖啡因的代谢率,研究白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2的影响;用HPLC法测定非那西丁的代谢率,确定白花蛇舌草水提取物对大鼠肝微粒体CYP 1A2活性的影响。结果蛋白印迹分析结果表明,白花蛇舌草水提取物对CYP 1A2蛋白表达没有影响。给予高、中、低剂量白花蛇草水提物的大鼠咖啡因代谢率分别为(33．62±5．08)％、(32．19±4．87)％、(31．05±4．93)％;对照组大鼠咖啡因代谢率为(30．73±5．40)％,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0．05)。肝微粒体体外温孵实验中,实验各剂量组和对照组非那西丁代谢率分别为(3．76±0．83)％、(3．61±0．79)％、(3．84±0．86)％、(3．81±0．82)％,实验组间及与对照组比较均无显著性差异(P>0．05)。结论体内、体外实验结果均表明,白花蛇舌草水提取物对大鼠肝脏CYP 1A2没有抑制作用。

关键词：白花蛇舌草细胞色素P450 肝微粒体高效液相色谱

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野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡

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解剖学报 2007年第5期38卷 569-571页

作者：陈晓宇李俊解雪峰姜辉韩卉安徽医科大学药学院安徽医科大学解剖学教研室合肥230032

目的研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理。方法SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细... 详细信息

目的研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理。方法SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片。结果MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体。结论TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用。

关键词：野菊花总黄酮佐剂性关节炎滑膜细胞细胞凋亡 MTT法 DNA琼脂糖凝胶电泳大鼠

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5种黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

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中国地方病学杂志 2007年第6期26卷 624-626页

作者：甘春丽刘凤芝姜仕先曹圣吉董乃维哈尔滨医科大学药学院药物化学与天然药物教研室 150081

目的研究山萘酚(Kaempferol,KA)、杨梅素(Myricetin,MY)、二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)、槲皮素(Quercetin,QU)、二氢槲皮素(Dihydroquercetin,DQU)5种黄酮醇类化合物对大鼠心肌细胞内游离钙离子([Ca^(2+)]i)的影响。方法采用Fluo-3/AM同时加入Pluronic F-127作为细胞内游离钙离子的荧光探针,负载H9C2心肌细胞系,应用激光扫描共聚焦显微技术,测定5种黄酮醇类化合物(50μmol/L)在静息状态和加入60 mmoL/L氯化钾(KCI)时心肌细胞胞浆内游离钙离子的荧光强度(FI)。结果静息状态下,KA和QU能够明显降低心肌细胞内[Ca^(2+)]i(P<0.05),MY能够短暂而明显升高[Ca^(2+)]i(P<0.05),而DMY和DQU对心肌细胞内[Ca^(2+)]i无明显影响(P>0.05);KA、MY、DMY、QU和DQU对KCI介导的高钙有抑制作用(P<0.05)。结论5种黄酮醇类化合物对电压依赖性钙通道(VDC)有明显抑制作用,这可能是产生药理活性机制之一,有利于进一步研究其对心肌的保护作用和探讨其构效关系。

关键词：黄酮醇类化合物心肌细胞钙离子激光打描共聚焦显微镜电压依赖性钙通道

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离子对-反相高效液相色谱法测定人胎盘和羊水中利凡诺

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药物分析杂志 2007年第3期27卷 457-459页

作者：郭智勇魏丹毅储成顶尹耕心贺明莉吴建力傅克勤宁波大学材料科学与化学工程学院宁波市新型功能材料及其制备科学实验室-省部共建国家重点实验室培育基地宁波315211 安徽医科大学公共卫生学院合肥230032 安徽省计划生育研究所合肥230031

目的:运用离子对-反相高效液相色谱法测定人胎盘和羊水中利凡诺的含量。方法:采用 Spherisorb C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇-乙腈-0.05%十二烷基磺酸钠溶液(35:35:30,pH=3);流速:1.0 mL·min^(-1);... 详细信息

目的:运用离子对-反相高效液相色谱法测定人胎盘和羊水中利凡诺的含量。方法:采用 Spherisorb C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇-乙腈-0.05%十二烷基磺酸钠溶液(35:35:30,pH=3);流速:1.0 mL·min^(-1);荧光检测器:激发波长360 nm,发射波长505 nm。结果:人胎盘、羊水样品分别在10 ng·g^(-1)～1μg·g^(-1)、10 ng·mL^(-1)～1μg·mL^(-1)浓度范围内,均呈现良好线性,检测限分别为3 ng·g^(-1)、3 ng·mL^(-1),准确度和精密度好。结论:本方法操作简便,结果准确可靠。

关键词：反相高效液相色谱法离子对利凡诺胎盘羊水

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2005年安徽省细菌耐药性监测

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中国抗生素杂志 2007年第7期32卷 426-430页

作者：王迎迎程君李慧李家斌安徽医科大学第一附属医院合肥230022

目的了解安徽地区临床分离菌株的耐药状况。方法采用国际标准平皿琼脂对倍稀释法,对2005年9月份从安徽35家医院分离的1954株临床分离的非重复的各种细菌进行体外药敏实验,测定细菌的最低抑菌浓度(MIC),并按照美国临床实验室标准化研究所... 详细信息

目的了解安徽地区临床分离菌株的耐药状况。方法采用国际标准平皿琼脂对倍稀释法,对2005年9月份从安徽35家医院分离的1954株临床分离的非重复的各种细菌进行体外药敏实验,测定细菌的最低抑菌浓度(MIC),并按照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)2005年版标准,计算细菌对抗菌药物的敏感率、中介率和耐药率。结果1954株临床分离株中,革兰阳性菌占22.5%(439/1954),革兰阴性菌占77.5%(1515/1954)。在革兰阳性细菌中,耐甲氧西林金葡菌(MRSA)检出率为45.3%(62/137),耐甲氧西林表葡菌(MRSE)检出率为87%(107/123),未发现耐糖肽类抗菌药物的葡萄球菌;未发现耐万古霉素肠球菌(VRE)。革兰阴性菌中,大肠埃希菌和克雷伯菌分别占26.9%(407/1515)和16.4%(248/1515),对头孢哌酮/舒巴坦和哌拉西林/三唑巴坦的敏感率明显高于其他头孢类抗菌药物;碳青霉烯类抗菌药物对革兰阴性菌的抗菌活性最强。结论临床上应合理应用抗菌药物,并应加强细菌耐药性监测,以防止细菌耐药性的蔓延。

关键词：监测细菌耐药性抗菌药物

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野菊花总黄酮体外对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

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安徽医科大学学报 2007年第4期42卷 409-411页

作者：张骏艳李俊张磊金涌程文明彭磊安徽医科大学药理教研室合肥230032 安徽医科大学药学院合肥230032

目的探讨野菊花总黄酮(TFC)体外对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响。方法采用AA大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外给药培养,并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果TFC能提高AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2水平... 详细信息

目的探讨野菊花总黄酮(TFC)体外对佐剂性关节炎(AA)大鼠免疫功能的影响。方法采用AA大鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞体外给药培养,并检测一些免疫指标(ConA增殖反应、IL-1、IL-2)。结果TFC能提高AA大鼠过低的脾淋巴细胞增殖反应和IL-2水平,对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL-1水平具有抑制作用。结论TFC对AA大鼠免疫功能具有明显的调节作用。

关键词：关节炎,试验性/药物疗法黄酮类/药理学

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黄酮醇类化合物对心肌细胞凋亡过程caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达影响

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中国药学杂志 2007年第10期42卷 749-753页

作者：王丽伟刘凤芝陆景坤刘有昌杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药化与天然药化教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院物理化学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院药理学教研室哈尔滨150081

目的研究槲皮素、杨梅素、桑色素和芦丁对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入30μmol.L-1的4种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外... 详细信息

目的研究槲皮素、杨梅素、桑色素和芦丁对大鼠心肌细胞凋亡的保护作用。方法体外培养Wistar乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞凋亡模型;随机分组:正常组,损伤组和用药组。用药组分别加入30μmol.L-1的4种黄酮醇类化合物,孵育1h后,除正常组之外,加入H2O2诱导细胞凋亡。加入不同浓度的药物后,采用MTT法观察细胞存活情况,来进行药物有效浓度的筛选。采用TUNEL、流式细胞仪法检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化法检测caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果MTT结果显示,4种黄酮醇类在5和30μmol.L-1时对细胞没有毒性。4种黄酮醇类化合物与损伤组比较,槲皮素、杨梅素、桑色素的心肌细胞凋亡率降低、Bcl-2/Bax比值增大、抑制caspase-3蛋白的活化。结论槲皮素、杨梅素和桑色素对心肌细胞凋亡有保护作用,可以通过抑制caspase-3蛋白的活化、上调Bcl-2蛋白的表达或是降低Bax的表达来发挥作用,槲皮素表现出较强的抗凋亡活性。

关键词：心肌细胞黄酮醇类凋亡

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