检索结果-内蒙古大学图书馆

临床输血与检验 2009年第2期11卷 107-112页

作者：郑辉吴赟余轶婧钟政荣罗庆礼沈继龙安徽医科大学人畜共患病安徽省重点实验室重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院检验科

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图... 详细信息

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest8.0双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,鉴别特异性抗原。结果血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝G250染色,电泳图谱显示约152个主要蛋白斑点。分子量(Mr)分布约为14～114kD;等电点(pI)主要集中在4.9～9.5。进一步的Western blotting鉴定结果显示:实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约57个,对照组为0。结论双向电泳联合免疫印迹技术是成功分析蛋白质组学的技术关键,该技术为寻找日本血吸虫特异性抗原开辟了新途径。

关键词：日本血吸虫蛋白质组学成虫特异性抗原双向电泳免疫印迹

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脂多糖诱导肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的研究

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中国危重病急救医学 2008年第2期20卷 65-68页

作者：李惠孙耕耘费黎明沈继龙安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室人畜共患病安徽省重点实验室

目的研究脂多糖（LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）mRNA表达的影响，以及甲泼尼龙对其的干预作用。方法体外培养大鼠PMVEC，根据与LPS孵育时间和LPS剂量不同随机分组，并用逆转录-聚合... 详细信息

目的研究脂多糖（LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKS）mRNA表达的影响，以及甲泼尼龙对其的干预作用。方法体外培养大鼠PMVEC，根据与LPS孵育时间和LPS剂量不同随机分组，并用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化。结果正常情况下，PMVEC中SSeCKS mRNA低表达。LPS在体外可诱导SSeCKS mRNA的表达明显增高，表达水平变化与LPS呈剂量和时间依赖关系：LPS孵育1h后，PMVEC中SSeCKS mRNA的表达量随LPS剂量增加而逐渐增高（正常对照组为0．263±0．033；LPS0．1mg／L时为0．529±0．066，1mg／L时为1．391±0．048，10mg／L时为2．339±0．055，100mg／L时为2．861±0．069），组间比较差异有统计学意义（F=639．096，P〈0．05）；10mg／L的LPS与PMVEC共用孵育，0．5hSSeCKS mRNA表达开始增高，1h时达峰值，之后逐渐降低，12h表达仍高于正常水平（正常对照组为0．301±0．022；LPS0．5h为1．617±0．018，1h为2．378±0．031，3h为2．148±0．056，6h为1．322±0．042，12h为0．772±0．044），组间比较差异有统计学意义（F=726．346，P〈0．05）。甲泼尼龙干预后可显著抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高（2．664±0．104比1．759±0．151，F=156．000，P〈0．05）。结论①LPS可诱导大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA表达上调，并呈剂量和时间的依赖关系，提示SSeCKS与LPS诱导的大鼠PMVEC损伤有关。②甲泼尼龙参与可抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高。

关键词：脂多糖血管内皮细胞炎症 Src抑制的蛋白激酶C底物大鼠

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传播结膜吸吮线虫的果蝇[Amiota(Phortica)okadai]生态习性研究

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 548-550页

作者：罗庆礼周银娣闻慧琴王增贤沈继龙安徽省人畜共患病重点实验室(安徽医科大学) 教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学)合肥230032

目的为进一步了解结膜吸吮线虫不同地区媒介果蝇某些生态习性差异。方法用实验室饲养的媒介果蝇在食物上产卵,以产卵数代表对食物的亲疏的关系;观察和捕获现场媒介果蝇绕眼次数及侵袭人眼的数量,测定侵袭眼的频率和强度;初冬季节用结膜... 详细信息

目的为进一步了解结膜吸吮线虫不同地区媒介果蝇某些生态习性差异。方法用实验室饲养的媒介果蝇在食物上产卵,以产卵数代表对食物的亲疏的关系;观察和捕获现场媒介果蝇绕眼次数及侵袭人眼的数量,测定侵袭眼的频率和强度;初冬季节用结膜吸吮线虫初产蚴,喂饲感染媒介果蝇,经越冬(150d)后剖检,获得感染期幼虫感染家兔,观察其感染力。结果实验表明媒介果蝇嗜食水果类如苹果、梨、香蕉、油桃等和瓜蔬类如冬瓜、胡萝卜等。厌恶大蒜、韭菜等芳香蔬菜和鸡肠、鱼肠等动物内脏。各地区媒介果蝇绕眼、袭眼特性不同:山区果蝇袭眼更频繁;媒介果蝇感染结膜吸吮线虫后能越冬,其寿命长达150 d,幼虫在蝇体内能保持完好的感染力。结论各地区的媒介果蝇食性近似;山区的果蝇绕眼、袭眼能力较强;果蝇感染结膜吸吮线虫后能够越冬至次年仍保持传病能力。本文还讨论了亚欧果蝇的属种名问题。

关键词：结膜吸吮线虫果蝇生态习性

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芍药苷对日本血吸虫感染小鼠肝组织免疫病理的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 10-15,20页

作者：储德勇李丛磊杨枫吴强李静丁向东罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室教育部省部共建和安徽省重要遗传病基因资源利用重点实验室人畜共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学病理学教研室合肥230032

目的观察芍药苷(paeoniflorin)对日本血吸虫病小鼠肝组织免疫病理的影响,探索芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用机制。方法日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠,制成肝虫卵肉芽肿和肝纤维化小鼠模型。然后随机分为4组:模型组(A组)... 详细信息

目的观察芍药苷(paeoniflorin)对日本血吸虫病小鼠肝组织免疫病理的影响,探索芍药苷预防血吸虫病肝虫卵肉芽肿和肝纤维化的作用机制。方法日本血吸虫尾蚴感染昆明小鼠,制成肝虫卵肉芽肿和肝纤维化小鼠模型。然后随机分为4组:模型组(A组)(15只),吡喹酮治疗前(B组)、治疗同时(C组)及治疗后(D组)给予芍药苷组(各45只)。其中后3组又各分为低剂量组[芍药苷30mg/(kg·d)×30d]、高剂量组[芍药苷120mg/(kg·d)×30d]及对照组(0.5%羧甲基纤维素钠溶剂2ml×30d)。B组感染后第12天起、C及D组分别于感染后第42及72天起,灌胃芍药苷或0.5%羧甲基纤维素钠溶剂。B、C和D等3组均于感染后第42天起灌胃吡喹酮[500mg/(kg·d)×2d]。感染后第102天处死取血及肝脏。用竞争放射免疫法检测血清透明质酸(HA)含量,苏木素-伊红(HE)及Masson胶原纤维染色观察肝虫卵肉芽肿面积及纤维化程度,用免疫组化技术评价α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达情况。结果B组HA水平,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=9.429,P值均<0.01);肉芽肿面积及肝纤维化程度,低剂量组及高剂量组均显著低于对照组(F=862.540、F=29.738,P值均<0.01);α-SMA阳性细胞表达强度(F=12.323,P值均<0.01)、TGF-β1表达强度(F=148.990,P值均<0.01)、ColⅠ含量(F=180.881,P值均<0.01),低剂量组和高剂量组均显著低于对照组。C组及D组各项检测数据与其相应的对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论吡喹酮治疗前给予芍药苷,能明显降低肝虫卵肉芽肿和肝纤维化程度,减少肝组织TGF-β1、α-SMA的表达。

关键词：芍药苷日本血吸虫肝纤维化 α平滑肌肌动蛋白转化生长因子β1

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芍药苷对小鼠巨噬细胞产生TGF-β1的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第2期26卷 81-85页

作者：储德勇李丛磊李静罗飞郑美娟吴强罗庆礼沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室教育部省部共建和安徽省重要遗传病基因资源利用重点实验室人畜共患病安徽省重点实验室合肥230032 安徽医科大学病理学教研室合肥230032

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT... 详细信息

目的探讨芍药苷(paeoniflorin,PAE)对血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)产生转化生长因子β1(TGF-β1)的影响。方法研磨法制备SEA,分别加入含有小鼠PMs的培养板、培养瓶及培养皿中,培养24h,ELISA法测定TGF-β1含量,RT-PCR检测PMs内TGF-β1基因的表达,Western blotting检测PMs内TGF-β1蛋白的表达;在含PMs的培养瓶和培养皿中分别加入10mg/LSEA5ml,培养12h,再分别加入不同浓度的PAE(0、7.5、15、30、60及120mg/L),继续培养12h和24h。RT-PCR与蛋白质印迹(Westernblotting)分别检测PAE对SEA刺激的PMs内TGF-β1基因与蛋白的表达。结果10mg/L的SEA可明显刺激PMs产生TGF-β1(235.86±3.43ng/L),PAE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1mRNA的表达(r=-0.827,P<0.01)和TGF-β1蛋白的表达(r=-0.952,P<0.01)。结论PAE能抑制SEA刺激的PMs产生TGF-β1。

关键词：芍药苷日本血吸虫虫卵可溶性抗原肝纤维化转化生长因子β1 巨噬细胞

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Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因的克隆、原核表达及初步鉴定

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安徽医科大学学报 2008年第5期43卷 493-496页

作者：高玉录马筱玲沈继龙戴媛媛付广林张义永鲁怀伟李华安徽医科大学附属省立医院检验科合肥230001 教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体... 详细信息

目的构建Panton-Valentine杀白细胞毒素(PVL)lukS-PV基因表达载体,并在大肠杆菌中表达相应蛋白。方法提取PVL阳性金黄色葡萄球菌的基因,PCR方法扩增lukS-PV,A-T克隆至pGEM-T载体上,经PCR、双酶切和测序鉴定后,亚克隆到pET28a(+)表达载体上,鉴定并转化至Rosetta(DE3)plys表达宿主菌中,用IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE电泳分析和Western blot鉴定。结果构建了lukS-PV-pGEM-T和lukS-PV-pET28a(+)重组质粒,经PCR扩增和限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切均得到939bp的目的片段,基因测序与GENEBANK中的PVL的序列一致,宿主菌表达带HIS标签的重组LukS-PV蛋白。结论成功克隆lukS-PV基因和构建重组表达质粒,并在宿主菌中成功表达重组LukS-PV蛋白,为PVL免疫学检测方法的建立奠定基础。

关键词：杀白细胞素类/遗传学基因表达克隆,分子

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弓形虫腺苷激酶基因的克隆、表达及多抗血清的制备

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中国人兽共患病学报 2008年第6期24卷 495-499页

作者：李霞余莉罗庆礼乔增培沈继龙安徽省人兽共患病重点实验室(安徽医科大学) 教育部重要遗传病基因资源利用重点实验室合肥230032 安徽中医学院第二附属医院合肥230061

目的克隆弓形虫RH株腺苷激酶(AK)基因,构建原核表达载体pET28a/AK,表达AK重组蛋白,利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制备多抗血清。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA。设计合成的引物并引入BamHI和XhoI酶切位点,应用RT-PCR扩增弓... 详细信息

目的克隆弓形虫RH株腺苷激酶(AK)基因,构建原核表达载体pET28a/AK,表达AK重组蛋白,利用此重组蛋白免疫新西兰白兔制备多抗血清。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA。设计合成的引物并引入BamHI和XhoI酶切位点,应用RT-PCR扩增弓形虫AK基因片段,目的基因插入克隆载体pGEM-T,提取重组质粒,BamHI和XhoI双酶切获得目的基因,插入原核表达质粒pET28a中,重组子双酶切、PCR和测序鉴定,转化大肠杆菌***21(DE3)并以IPTG诱导表达。亲和层析法纯化重组蛋白抗原,SDS-PAGE和Western blotting验证表达量和免疫活性,免疫新西兰白兔,收集多抗血清,ELISA测定多抗滴度,Western blotting鉴定免疫活性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出1 092bp的AK目标基因片段,并构建原核表达载体,诱导含pET28a/AK的宿主菌获得了高浓度、与预期分子量大小相符的表达产物,经Ni2+亲和层析法纯化获得了高纯度的rAK蛋白,Western blotting显示rAK能够被TORCH试剂盒中的Tox-IgG阳性控制血清识别,获得了纯化的重组蛋白。rAK蛋白免疫新西兰白兔,获得滴度为1∶106多价抗血清。结论成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了AK基因,构建了pET28a/AK重组质粒,并获得了高效表达,免疫新西兰白兔获得了高效价多克隆抗体,为弓形虫iRNA及弓形虫病的免疫诊断奠定了基础。

关键词：弓形虫腺苷激酶基因克隆表达多抗血清

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基于IgY的ELISA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

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安徽医科大学学报 2008年第4期43卷 372-376页

作者：周银娣罗庆礼余轶婧张诗海李静沈继龙安徽医科大学病原生物学教研室人畜共患病安徽省重点实验室重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室合肥230032

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体... 详细信息

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和抗SEA的兔多克隆IgG抗体;以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3μg/L;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%、20.8%、14.8%。结论建立了基于IgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有一定特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断。

关键词：血吸虫病日本/诊断

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基于IgY的EUSA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

基于IgY的EUSA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：周银娣罗庆礼余轶婧张诗海李静沈继龙人兽共患病安徽省重点实验室教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学)

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和兔抗SEA的多克隆IgG抗体:以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体... 详细信息

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和兔抗SEA的多克隆IgG抗体:以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系:检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3ng/ml,;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%,20.8%。14.8%。结论建立了基于IgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有高度特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断。

关键词： IgY 卵黄抗体 SEA

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人轮状病毒的主要标志物与疫苗研究

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热带病与寄生虫学 2008年第4期6卷 233-235页

作者：张诗海沈继龙安徽医科大学第一附医院检验科安徽省立儿童医院检验科安徽医科大学、安徽省人兽共患病重点实验室、教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室

已知许多病毒、细菌、寄生虫可引起感染性腹泻。轮状病毒(rotavirus,RV)被证实为发展中和发达国家儿童胃肠炎的一种重要病原体。在美国,1997～2000年间因腹泻而住院的5岁以下患者中,18%～19%是由RV引起的。亚洲监测网最新报

关键词：轮状病毒血清型血清变种标志物内质网衣壳蛋白疫苗菌苗婴幼儿中和抗体 VPS 病毒蛋白电泳型抗原性中和抗原

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