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脂多糖对大鼠肺微血管内皮细胞血管性血友病因子血管性血友病因子裂解蛋白酶表达影响及维生素 D 的干预作用

中国急救医学 2016年第11期36卷 1036-1040,1058页

作者：徐俊杨家来陈剑罗庆礼孟令毅俞凤张泓安徽医科大学第三附属医院合肥市第一人民医院急诊科安徽合肥230001 安徽医科大学第一附属医院急诊科安徽合肥230032 安徽省立医院南区重症医学科安徽合肥230036 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部共建重点实验室/安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室安徽合肥230032

目的：观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells，PMVEC）内血管性血友病因子（von willebrand factor， VWF）、血管性血友病因子裂解蛋白酶（A disintegrin-like andmetalloproteinase with thrombospond in type-1 domain 13，ADAMTS13）表达的影响，以及维生素 D（vitamin D，Vit D）的干预作用。方法体外原代培养大鼠 PMVEC，随机分为6组：NC 组、LPS 组（给予100μg/mL LPS）、骨化三醇（Calcitriol，Cal）组（给予100 nmol/L Cal）及LPS＋Cal 1、2、3组（分别给予100μg/mL LPS 和5 nmol/L、20 nmol/L、100 nmol/L Cal），分别检测细胞裂解液中VWF、ADAMTS13 mRNA和蛋白表达情况。结果 LPS 组和 Cal 组 VWF、ADAMTS13 mRNA 和蛋白表达均无显著变化，LPS 组和 LPS＋ Cal 各组VWF mRNA、蛋白表达较NC组显著增高，LPS＋ Cal各组VWF mRNA、蛋白表达较LPS组显著降低， LPS 组和 LPS＋ Cal 各组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 NC 组显著降低，LPS＋Cal 三组 ADAMTS13 mRNA、蛋白表达较 LPS 组显著增高。结论 Vit D 在生理状态下并不能改变 PMVEC 中 VWF 和ADAMTS13的表达，但在受到LPS刺激后可使已增高的VWF表达降低，已降低的ADAMTS13表达增加，在脓毒症或急性肺损伤（acute lung injury，ALI）发病过程中，补充 Vit D 可能通过对 PMVEC中VWF、ADAMTS13表达的影响对疾病的转归起作用。

关键词：脂多糖(LPS) 肺微血管内皮细胞(PMVEC) 血管性血友病因子(VWF) 血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13) 维生素D(Vit D)

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脓毒症患者血清VEGF-A与sFLT-1水平变化的临床意义

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安徽医药 2012年第7期16卷 930-933页

作者：张启迪张泓徐俊周圆圆罗庆礼沈继龙安徽医科大学第一附属医院急诊医学科安徽合肥230022 安徽医科大学第三附属医院急诊医学科安徽合肥230061 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室安徽合肥230032

目的观察脓毒症患者血清中VEGF-A、sFLT-1水平变化,以及VEGF-A活性指数(VEGF-A/sFLT-1)变化,探讨其对脓毒症患者的病情评估和预后的预测价值。方法研究对象脓毒症组为2010年1月-2011年6月期间入住安徽医科大学第一附属医院急诊医学科符... 详细信息

目的观察脓毒症患者血清中VEGF-A、sFLT-1水平变化,以及VEGF-A活性指数(VEGF-A/sFLT-1)变化,探讨其对脓毒症患者的病情评估和预后的预测价值。方法研究对象脓毒症组为2010年1月-2011年6月期间入住安徽医科大学第一附属医院急诊医学科符合脓毒症诊断标准的59例患者,根据28 d存活情况分为脓毒症存活和死亡组;对照组为20例健康者。采用酶联免疫吸附法测定脓毒症患者和对照组血清中VEGF-A及sFLT-1水平,计算VEGF-A活性指数,分别进行三者与APACHEⅡ评分、脓毒症预后的相关性分析。结果脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平均明显高于对照组(P<0.05);脓毒症死亡组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数均明显高于存活组(P<0.05);脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数与APACHEⅡ评分均呈正相关性(r=0.754,P=0;r=0.655,P=0;r=0.497,P=0);使用ROC曲线分析血清VEGF-A、sFLT-1浓度和VEGF-A活性指数对脓毒症发生的预测价值,其曲线下面积分别为76.3%、76.4%和58.1%;评估血清VEGF-A、sFLT-1浓度和VEGF-A活性指数对脓毒症预后的预测价值,其ROC曲线下面积分别为91.2%、86.2%和85.5%。结论脓毒症组血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数均明显升高,且与病情严重程度以及不良预后呈正相关;血清VEGF-A、sFLT-1水平及VEGF-A活性指数对临床预测脓毒症发生及预后有一定价值。

关键词：脓毒症血管内皮细胞生长因子可溶性血管内皮生长因子受体活性指数

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AngⅡ及其受体拮抗剂调节大鼠肺微血管内皮细胞ACE2蛋白表达的体外实验

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中国急救医学 2010年第9期30卷 809-813,866页

作者：徐俊程立顺宋志友罗庆礼张泓安徽医科大学第三附属医院/合肥市第一人民医院急诊科合肥230001 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部共建重点实验室/安徽大学人兽共患病安徽重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230032

目的观察血管紧张肽（angiotensin,Ang ）Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC）内血管紧张肽转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）2表达的影响.方法体外... 详细信息

目的观察血管紧张肽（angiotensin,Ang ）Ⅱ及其受体拮抗剂对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells, PMVEC）内血管紧张肽转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）2表达的影响.方法体外培养大鼠PMVEC,随机分为4组.正常对照组;AngⅡ组：以浓度为10-7 mol/L的AngⅡ与之分别孵育3 h、6 h、12 h和24 h;脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组：给予10-2 mg/mL的LPS刺激细胞24 h;AngⅡ1型受体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R）拮抗剂[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ干预组：使用[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ预处理细胞30 min后再给予10-7 mol/L Ang Ⅱ或10-2 mg/mL LPS刺激24 h;采用RT-PCR、Western blot方法检测ACE2表达的变化情况.结果与正常对照组相比,AngⅡ刺激组于不同时相点ACE2表达均显著降低（P〈0.05）,ACE2表达与AngⅡ刺激的时间呈负相关;LPS组ACE2蛋白表达亦显著降低（P〈0.05）.[Sar1,Ile8]-Ang Ⅱ干预组ACE2蛋白表达较LPS/Ang Ⅱ组显著增加（P〈0.05）.结论 AngⅡ可以降低体外培养PMVEC中ACE2的表达,并与Ang Ⅱ刺激时间呈负相关;LPS亦可以显著降低ACE2蛋白表达;AT1R拮抗剂可以降低AngⅡ及脂多糖对ACE2蛋白表达的抑制作用,AngⅡ和ACE2相互作用可能与急性肺损伤（acute lung injury,ALI）时PMVEC损伤的发生、发展有关.

关键词：肺微血管内皮细胞急性肺损伤血管紧张肽Ⅱ 脂多糖血管紧张肽转化酶2

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ACE2及Ang 1-7对大鼠LPS性ALI的影响及机制

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安徽医科大学学报 2010年第3期45卷 315-319页

作者：宋志友张泓徐俊张启迪罗庆礼沈继龙安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230022 安徽医科大学第三附属医院-合肥市第一人民医院急诊科合肥230061 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的研究血管紧张素转化酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang1-7)对大鼠脂多糖(LPS)性急性肺损伤(ALI)的影响及其机制。方法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),分别予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或LPS刺激大鼠PMVEC单层,并予ACE2抑制剂或Ang1-7受... 详细信息

目的研究血管紧张素转化酶2(ACE2)及血管紧张素1-7(Ang1-7)对大鼠脂多糖(LPS)性急性肺损伤(ALI)的影响及其机制。方法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC),分别予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)或LPS刺激大鼠PMVEC单层,并予ACE2抑制剂或Ang1-7受体激动剂预干预,用滤器法检测大鼠PMVEC单层通透系数(Kf)的变化;予LPS建立大鼠ALI模型,分别予ACE2抑制剂、ACE2抑制剂+Ang1-7受体拮抗剂、Ang1-7受体激动剂干预,观测肺组织湿/干重比(W/D)及病理变化。结果 LPS、AngⅡ均增加大鼠PMVEC单层Kf(P<0.01),ACE2抑制剂加剧AngⅡ所致大鼠PMVEC单层Kf增高(P<0.01),Ang1-7受体激动剂则抑制单层Kf增高(P<0.01);在LPS诱导的大鼠ALI体内,ACE2抑制剂和/或Ang1-7受体拮抗剂均加剧LPS所致肺组织W/D增高(P<0.01)和ALI病理改变,Ang1-7受体激动剂则抑制LPS诱导的W/D增高(P<0.01)并改善其病理改变。结论 Ang1-7对LPS致大鼠ALI有直接及间接的保护作用;ACE2可通过促进Ang1-7的生成对大鼠LPS性ALI发挥保护作用。

关键词：脂多糖

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轮状病毒SA11衣壳蛋白VP7的毕赤酵母重组表达及IgY的制备

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中华预防医学杂志 2009年第6期43卷 526-530页

作者：张诗海罗庆礼周银娣李静徐元宏沈继龙安徽医科大学第一附属医院检验科合肥230022 安徽省人兽共患病重点实验室教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室

目的真核重组表达轮状病毒（rotavirus，RV）SA11株VP7衣壳蛋白并制备、纯化其卵黄抗体（IgY）。方法将SA11标准株在MA104细胞中增殖，收集病毒液。从病毒液中提取RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增获得SA11株衣壳蛋白VP7的长... 详细信息

目的真核重组表达轮状病毒（rotavirus，RV）SA11株VP7衣壳蛋白并制备、纯化其卵黄抗体（IgY）。方法将SA11标准株在MA104细胞中增殖，收集病毒液。从病毒液中提取RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增获得SA11株衣壳蛋白VP7的长度为978bp的编码基因，将PCR产物连接到pMD18-T载体上，进行测序。将重组体亚克隆到分泌表达载体pPICZαB中，再将重组体转化人大肠杆菌rop10中，用BstXI线性化酶切重组质粒后电转入毕赤酵母X-33中，进行测序。转染成功的菌落再用甲醇诱导表达，亲和层析法纯化重组蛋白抗原，十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白免疫印迹（Western blotting）鉴定，用重组蛋白免疫罗曼母鸡，收集鸡蛋，Western blotting鉴定、纯化IgY。结果细胞增殖液中提取的RNA银染可见11个条带，成功构建了含pPICZαB—SAllVP7的毕赤酵母X-35，毕赤酵母X-33分泌的融合蛋白被收集、纯化。毕赤酵母X-33表达的SA11VP7的衣壳蛋白经Western blotting验证与预测蛋白相对分子质量40200相符。从鸡蛋中提取的鸡的IgV验证为抗Vfy7的抗体。纯度可达到95％，1个鸡蛋能产10．2mg的IgY。结论抗重组RVSA11衣壳蛋白VP7和IgY的成功制备为疫苗和诊断试剂的开发奠定了基础。

关键词：轮状病毒属衣壳蛋白质类卵黄免疫球蛋白

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TH1／TH2免疫应答与血吸虫性纤维化

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中国人兽共患病学报 2009年第2期25卷 179-182,F0003页

作者：李小月沈继龙重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室(安徽医科大学)、人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)和抗炎免疫药理学安徽省重点实验室(安徽医科大学) 合肥230032

血吸虫病是人类六大主要热带病之一,血吸虫病主要死于肝虫卵肉芽肿及继发性的肝纤维化,在肝纤维化的发病过程中,由于血吸虫卵抗原的持续刺激,导致TH2反应持续存在,从而引起肝星状细胞活化增殖,细胞外基质沉积,造成肝纤维化形成。肝纤维... 详细信息

血吸虫病是人类六大主要热带病之一,血吸虫病主要死于肝虫卵肉芽肿及继发性的肝纤维化,在肝纤维化的发病过程中,由于血吸虫卵抗原的持续刺激,导致TH2反应持续存在,从而引起肝星状细胞活化增殖,细胞外基质沉积,造成肝纤维化形成。肝纤维化过程可能与TH1/TH2失衡有关,TH1类细胞因子可以抑制肝星状细胞的增殖和胶原蛋白的合成;而TH2类细胞因子可促进肝星状细胞活化成肌样成纤维细胞,使胶原蛋白合成增加,[第一段]

关键词：血吸虫性纤维化 TH1/TH2免疫应答肝星状细胞活化肝纤维化形成 TH1/TH2失衡胶原蛋白合成 TH1类细胞因子 TH2类细胞因子

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脂多糖性急性肺损伤血管紧张素转换酶2表达变化及血管紧张素I受体拮抗剂的干预作用

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中华结核和呼吸杂志 2009年第3期32卷 223-224页

作者：徐俊张泓宋志友罗庆礼沈继龙安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230032 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室、安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室

血管紧张素转换酶2（angiotensin convening enzyme2，ACE2）于2000年被发现，是人体内近半个世纪发现的第一个ACE同源化合物，它是仅含有一个催化位点的羧肽酶，对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）的催化作用与ACE相反。研究发现... 详细信息

血管紧张素转换酶2（angiotensin convening enzyme2，ACE2）于2000年被发现，是人体内近半个世纪发现的第一个ACE同源化合物，它是仅含有一个催化位点的羧肽酶，对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）的催化作用与ACE相反。研究发现，酸吸入和脓毒症诱导大鼠急性肺损伤（acute lung injury，Au）模型中，ACE2对肺组织有显著保护作用；而肾素-血管紧张素系统中其他成员如ACE和AngⅡ却促进Au的发生、发展。本实验通过观察脂多糖对ALI大鼠肺组织局部ACE2表达的影响，

关键词：血管紧张素转换酶2 血管紧张素I受体拮抗剂急性肺损伤干预作用表达变化 angiotensinⅡ 肾素-血管紧张素系统 ACE2

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LPS对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞ACE2表达的影响

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安徽医科大学学报 2009年第5期44卷 546-550页

作者：徐俊张泓宋志友罗庆礼沈继龙安徽医科大学第一附属医院急诊科合肥230022 安徽医科大学重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室安徽医科大学人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的观察脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)血管紧张素转化酶2(ACE2)表达的影响。方法体外培养大鼠PMVEC,分别使用浓度为10-4、10-3、10-2、10-1mg/ml的LPS与之孵育24 h,观察量效关系;以浓度为10-2mg/ml的LPS与之分... 详细信息

目的观察脂多糖(LPS)对体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)血管紧张素转化酶2(ACE2)表达的影响。方法体外培养大鼠PMVEC,分别使用浓度为10-4、10-3、10-2、10-1mg/ml的LPS与之孵育24 h,观察量效关系;以浓度为10-2mg/ml的LPS与之分别孵育3、6、12和24h,观察时效关系,采用RT-PCR、Western blot方法检测ACE2表达的变化。结果与正常对照组相比,各浓度LPS刺激组ACE2表达均显著降低(P<0.05);除6 h时相点,LPS(10-2mg/ml)刺激组于不同时相点ACE2表达均显著降低(P<0.05);ACE2表达与LPS刺激的浓度呈负相关。结论LPS能使体外培养的大鼠PMVEC表达ACE2减少,并与LPS刺激的浓度间呈负相关;除6 h时相点,予10-2mg/ml浓度LPS刺激大鼠PMVEC,ACE2表达于3、12和24 h均显著降低。ACE2表达下降可能与急性肺损伤(ALI)中PMVEC损伤的发生、发展有关。

关键词：脂多糖类

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双向电泳联合免疫印迹技术分析日本血吸虫成虫可溶性抗原

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临床输血与检验 2009年第2期11卷 107-112页

作者：郑辉吴赟余轶婧钟政荣罗庆礼沈继龙安徽医科大学人畜共患病安徽省重点实验室重要遗传病基因资源利用教育部省部共建重点实验室安徽医科大学病原生物学教研室合肥230032 安徽医科大学附属省立医院检验科

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图... 详细信息

目的建立及优化日本血吸虫成虫的蛋白质组学分析方法,寻找可溶性蛋白组分中与免疫应答相关的特异性成虫抗原。方法纯化日本血吸虫成虫可溶性蛋白,应用双向电泳(2D-E)结合免疫印迹技术(Western blotting),获得相应的电泳图谱和免疫印迹图谱,应用PDQuest8.0双向电泳图像分析软件对图像进行分析比对,鉴别特异性抗原。结果血吸虫成虫可溶性蛋白经双向电泳后,考马斯亮蓝G250染色,电泳图谱显示约152个主要蛋白斑点。分子量(Mr)分布约为14～114kD;等电点(pI)主要集中在4.9～9.5。进一步的Western blotting鉴定结果显示:实验组图像可见的抗原抗体反应点数目约57个,对照组为0。结论双向电泳联合免疫印迹技术是成功分析蛋白质组学的技术关键,该技术为寻找日本血吸虫特异性抗原开辟了新途径。

关键词：日本血吸虫蛋白质组学成虫特异性抗原双向电泳免疫印迹

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基于IgY的EUSA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

基于IgY的EUSA用于日本血吸虫病循环抗原的检测

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：周银娣罗庆礼余轶婧张诗海李静沈继龙人兽共患病安徽省重点实验室教育部省部共建重要遗传病基因资源利用重点实验室(安徽医科大学)

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和兔抗SEA的多克隆IgG抗体:以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体... 详细信息

目的以鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)替代哺乳动物来源的IgG抗体,建立双抗体夹心ELISA用于日本血吸虫病的诊断。方法制备并纯化抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的卵黄抗体IgY和兔抗SEA的多克隆IgG抗体:以抗SEA的IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体的双抗体夹心ELISA诊断方法,共检测血清443份,其中急性血吸虫病患者血清68例,慢性血吸虫病患者180例,正常人100例,肺吸虫感染者20例,华支睾吸虫感染者48例和钩虫感染者血清27例。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系:检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为79.4%和64.4%,最低灵敏度为9.3ng/ml,;正常人血清的阴性率为92%;与肺吸虫、华支睾吸虫、钩虫感染者血清的交叉反应分别为20%,20.8%。14.8%。结论建立了基于IgY的双抗夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫SEA的检测具有高度特异性和较高的敏感性,可试用于日本血吸虫病的辅助诊断。

关键词： IgY 卵黄抗体 SEA

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