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生物多样性 2022年第4期30卷 151-167页

作者：袁智勇陈进民吴云鹤李先琦车静西南大学生命科学学院淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室重庆400715 西南林业大学云南省高校极小种群野生动物保育重点实验室昆明650224 安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用研究安徽省省级重点实验室安徽芜湖241000 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室&云南省高黎贡山生物多样性与生态安全重点实验室昆明650223

云南省是我国两栖类多样性最丰富的地区,近年来受威胁的两栖类物种数显著增加,亟需对两栖类的名录进行更新和完善。本文在《云南两栖爬行动物》的基础上,通过收集近十余年的研究资料,结合近年国内外最新研究结果,确定物种有效性和分类归... 详细信息

云南省是我国两栖类多样性最丰富的地区,近年来受威胁的两栖类物种数显著增加,亟需对两栖类的名录进行更新和完善。本文在《云南两栖爬行动物》的基础上,通过收集近十余年的研究资料,结合近年国内外最新研究结果,确定物种有效性和分类归属,并结合本团队野外考察数据,对云南两栖类的物种名录和分布进行系统的整理与修订。修订后的名录共记录云南省两栖类191种,隶属3目12科49属,占全国两栖类种数的32.5%。自2008年以来,云南省新增两栖类1科23属70种,本名录修订3科31属47种;共发现34个新种、15个中国新纪录和10个省级新纪录种,主要集中在云南的边境地区。云南省记录45种受威胁物种,占云南省两栖类种数的23.6%,占全国受威胁两栖类物种数的25.6%。其中,2种被列为极危(CR),9种被列为濒危(EN),34种被列为易危(VU)。名录共记录15种国家II级重点保护野生动物,占受国家保护两栖类种数的16.0%。此外,列入CITES附录I和附录II的分别有1种和8种,被列为云南省极小种群物种而作为重点保护野生动物的有5种。在新名录的基础上,本文讨论了云南省两栖类多样性与分类研究不足的类群、考察薄弱的地区、物种丰富度的格局分布以及受威胁情况,以期对云南省未来两栖类的研究和保护工作提供依据和参考。

关键词：野生动物名录分类修订野生动物保护极小种群云南边境

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大乳头水螅增殖细胞核抗原基因的克隆及再生进程中的表达分析

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水生生物学报 2020年第4期44卷 790-798页

作者：吴香恒程秀珍王茹梦段丽丽潘红春安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室芜湖241000

研究以增殖细胞标记物-增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白为切入点,采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了大乳头水螅(Hydra magnipapillata)PCNA基因的cDNA序列。该cDNA序列包含1240 bp,其中837 bp为编码区,编码的蛋白质预测分子量为30.93 kD。把PCNA基因ORF中的部分序列克隆到原核表达质粒pET-28b(+)中,重组质粒转化*** BL21(DE3)菌株,IPTG诱导后成功表达重组PCNA蛋白,再用该重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于PCNA蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay,WB)。采用实时定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)及WB方法检测水螅头部再生进程中其PCNA表达水平的动态变化,结果表明在再生进程的中后期阶段水螅PCNA表达量呈现一定程度的上调。结果暗示水螅头部再生进程的中后期阶段其伤口及附近区域可能存在细胞分裂活动。

关键词：大乳头水螅增殖细胞核抗原再生实时定量PCR 免疫印迹分析

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中国绿水螅抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆、抗体制备及表达分析

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水生生物学报 2019年第2期43卷 305-314页

作者：张行田晓晓董文芳王茹梦潘红春安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室芜湖241000

为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放... 详细信息

为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放阅读框(Open reading frame,ORF) 1104 bp,共编码367个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.79 kD。BLAST结果表明中国绿水螅APX蛋白同源序列绝大部分来自植物界;通过最大似然法(Maximum-likelihood)和贝叶斯分析(Bayesian inference)进行的系统发生分析显示植物界及动物界物种的APX序列各自形成单系群。把APX基因ORF全长序列克隆到原核表达质粒pET-GST中,重组质粒转化***21 (DE3)菌株,IPTG诱导后成功表达重组融合蛋白GST-APX,再使用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于APX蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照时长梯度(光强度2000 lx,每天分别光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培养中国绿水螅30d,实时定量PCR (Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB检测结果均表明光照时间较长时(每天光照12h以上)绿水螅APX表达呈现一定程度的上调。在长时间光辐射下水螅体内共生绿藻连续进行光合作用所累积的大量活性氧能够扩散到水螅细胞内,此时水螅体内表达上调的APX可能参与清除其细胞内的活性氧。

关键词：中国绿水螅抗坏血酸过氧化物酶多克隆抗体实时定量PCR 免疫印迹分析

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1株高产纤维素酶菌株的筛选鉴定及对稻秆降解的研究

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华南农业大学学报 2019年第1期40卷 84-91页

作者：程鹏刘姗姗王玉卢存龙刘爱民安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室/重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖241000 中国科学技术大学生命科学学院安徽合肥230026

【目的】筛选高效纤维素降解菌,用于稻秆原位还田菌剂的开发。【方法】通过稻秆粉培养基和刚果红-纤维素选择性培养基,从芜湖地区腐殖土中筛选分离出高效纤维素降解菌CX1,测定不同底物条件和不同反应温度下的纤维素酶活性。通过滤纸条... 详细信息

【目的】筛选高效纤维素降解菌,用于稻秆原位还田菌剂的开发。【方法】通过稻秆粉培养基和刚果红-纤维素选择性培养基,从芜湖地区腐殖土中筛选分离出高效纤维素降解菌CX1,测定不同底物条件和不同反应温度下的纤维素酶活性。通过滤纸条崩解试验、土培降解试验、菌株与化学物质协同降解稻秆试验、发酵液对小麦幼苗生长的影响试验,探究菌株CX1腐解稻秆的特性。【结果】通过菌株形态学特征及16S rDNA序列相似性(99%)比对,确定CX1为高温嗜热芽孢杆菌Thermophilic Bacillus sp.。以稻秆粉为底物,50℃条件下菌株CX1纤维素酶活力达13.87 U·mL^(–1),65℃时酶活力仍能达到9.73 U·mL^(–1)。添加菌株CX1培养4 d后滤纸条完全崩解,到15 d时,稻秆纤维素降解率达到52.55%,土培40 d时稻秆相对降解率达到25.38%。预先用质量浓度为0.05 g·mL^(–1)的NaOH溶液浸泡处理的稻秆更利于菌株CX1对稻秆的降解,腐解14 d时稻秆失重率比对照组增加了6.69%。添加经菌株CX1降解稻秆后的发酵液可使小麦的各项生长指标有明显提高,小麦的出苗率、苗高、根鲜质量和苗鲜质量分别提高了9.66%、55.55%、59.71%和118.84%。【结论】菌株CX1对高温具有耐受性,能高效降解纤维素,可在农业生产中促进稻秆原位还田方面发挥积极的作用。

关键词：稻秆降解纤维素酶高温嗜热芽孢杆菌腐解特性

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菌藻混合发酵对豆渣中B族维生素含量和风味成分的影响

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现代食品科技 2018年第1期34卷 75-82页

作者：王静刘宇马银花卢存龙董德武刘爱民安徽师范大学生命科学学院生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖241000

黄豆豆渣的营养价值较高,往往被直接丢弃,小球藻富含单细胞蛋白,具有很大的开发和利用价值,将酵母菌和小球藻混合发酵豆渣是很好的资源利用方式。本试验以新鲜豆渣为原料,接入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘红酵母(Rhodotorula... 详细信息

黄豆豆渣的营养价值较高,往往被直接丢弃,小球藻富含单细胞蛋白,具有很大的开发和利用价值,将酵母菌和小球藻混合发酵豆渣是很好的资源利用方式。本试验以新鲜豆渣为原料,接入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)(按1:1:1)和小球藻,在25℃进行厌氧半固态发酵5 d。采用高效液相色谱(HPLC)测定豆渣发酵前后维生素B_2(VB_2)和维生素B_(12)(VB_(12))含量,采用液液萃取法结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术对豆渣发酵前后风味成分进行分析。结果表明,豆渣经发酵后,VB2和VB12含量分别增长约0.5倍和5.9倍;经GC-MS分析,共鉴定出47种风味物质,醇类(8.26%)、酯类(4.84%)、醛类(19.24%)和酮类(3.01%)相对含量较高,是豆渣发酵产物的特征性风味成分。

关键词：豆渣混合发酵维生素风味成分

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不同栽培年限蓝莓根际土壤微生物群落多样性分析

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西北农业学报 2018年第7期27卷 1041-1048页

作者：董德武刘宇卢存龙王丽雪刘爱民安徽师范大学生命科学学院生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖241000

采用磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记法分析树龄5a、6a、9a蓝莓根际土壤微生物的多样性,结果表明,不同栽培年限蓝莓根际土壤的PLFA标记存在差异,呈现不同的变化趋势;与9a植株相比,6a植株多1个16∶1w9细菌类群,5a植株多a15∶0和16∶1w9 2个细... 详细信息

采用磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记法分析树龄5a、6a、9a蓝莓根际土壤微生物的多样性,结果表明,不同栽培年限蓝莓根际土壤的PLFA标记存在差异,呈现不同的变化趋势;与9a植株相比,6a植株多1个16∶1w9细菌类群,5a植株多a15∶0和16∶1w9 2个细菌类群,5a植株蓝莓根际土壤PLFA总量最大;与非种植区土壤相比,蓝莓根际特有a17∶0、i17∶1w5、7cy17∶0、9cy19∶0 4个细菌类群,且总量与树龄高度相关,可与a15∶0和16∶1w9的细菌总量联合推测栽培年龄。相关分析结果表明,速效钾的质量分数与树龄呈负相关,且栽培区土壤均低于非种植区土壤。蓝莓根际土壤微生物总量、假单胞杆菌、AM真菌和腐生真菌等与根际土壤有效磷、速效钾质量分数呈正相关。蓝莓根际微生物群落主要由细菌和真菌构成,对蓝莓生长具有重要影响。

关键词：蓝莓根际土壤微生物群落磷脂脂肪酸标记

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基于核及叶绿体基因序列探讨中国绿水螅共生单细胞绿藻系统发生地位

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水生生物学报 2017年第6期41卷 1265-1272页

作者：陈磊磊刘俊红李全发董文芳张行潘红春安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室芜湖241000

研究对中国绿水螅共生绿藻的核18S r RNA基因全长序列及其叶绿体9个基因(atp A、chl B、chl N、pet A、psa B、psb A、psb C、psb D及rbc L)片段序列进行了克隆和测序,并基于18S r RNA基因序列及叶绿体9个基因序列的整合数据分别通过最... 详细信息

研究对中国绿水螅共生绿藻的核18S r RNA基因全长序列及其叶绿体9个基因(atp A、chl B、chl N、pet A、psa B、psb A、psb C、psb D及rbc L)片段序列进行了克隆和测序,并基于18S r RNA基因序列及叶绿体9个基因序列的整合数据分别通过最大似然法(Maximum-likelihood)和贝叶斯分析(Bayesian inference)对中国绿水螅(Hydra sinensis)共生单细胞绿藻的系统发生地位进行了探讨。系统发生表明:(1)中国绿水螅共生绿藻属于共球藻纲(Trebouxiophyceae)小球藻目(Chlorellales),但不属于其中的小球藻属(Chlorella);(2)来源于草履虫、水螅、地衣及银杏的共生绿藻均在共球藻纲支系,而来源于蛙类和蝾螈的共生绿藻属于绿藻纲(Chlorophyceae)支系。无论在共球藻纲支系还是在绿藻纲支系,不同来源的共生藻并没有排他性地聚为单系群而在系统树中与其他自由生活的绿藻混杂排列,来自不同宿主的共生绿藻没有共同起源。

关键词：中国绿水螅共生单细胞绿藻系统发生核18S r RNA基因叶绿体基因

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高效稻秆降解菌的分离鉴定

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广东农业科学 2017年第5期44卷 72-77,F0002页

作者：陈亚玲陈立志程鹏李晓磊刘爱民安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室/重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖241000

为实现稻秆快速降解、原位还田,利用秸秆粉平板和刚果红-纤维素平板从土壤中初步筛选出4株降解稻秆能力较强的细菌,进行菌落特征和菌体形态观察;运用DNS法测定4种细菌的纤维素酶活变化曲线,分析稻秆失重率及残渣含量发现其中两株细菌降... 详细信息

为实现稻秆快速降解、原位还田,利用秸秆粉平板和刚果红-纤维素平板从土壤中初步筛选出4株降解稻秆能力较强的细菌,进行菌落特征和菌体形态观察;运用DNS法测定4种细菌的纤维素酶活变化曲线,分析稻秆失重率及残渣含量发现其中两株细菌降解效果更优;利用16Sr DNA序列分析鉴定菌属,随后将4株细菌建立复合菌系降解稻秆。结果表明,35℃、180r/min摇床培养15d后发现菌XJ1、XJ2、XJ8、XJ9处理的稻秆降解率分别达到78.04%、72.68%、68.48%和76.58%。菌XJ1为地衣芽胞杆菌属,菌XJ9为高温芽孢杆菌属。37℃、180r/min摇床培养3d后复合菌系稻秆降解率达50.16%,培养7d时稻秆降解率达58.32%。

关键词：稻秆降解菌降解率鉴定复合菌系

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沼渣肥对蓝莓土壤微生物多样性的影响

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湖北农业科学 2017年第19期56卷 3630-3635页

作者：王丽雪董德武刘宇卢存龙刘爱民安徽师范大学生命科学学院/生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室/重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室安徽芜湖241000

采用磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记法分析研究了沼渣肥对蓝莓(Vaccinium spp.)根际土壤微生物多样性的影响。结果表明,用沼渣肥和草炭处理蓝莓土壤PLFA标记含量存在差异,其中用沼肥处理的蓝莓土壤的PLFA总量最大;与未做任何处理和用草炭处... 详细信息

采用磷脂脂肪酸(PLFA)生物标记法分析研究了沼渣肥对蓝莓(Vaccinium spp.)根际土壤微生物多样性的影响。结果表明,用沼渣肥和草炭处理蓝莓土壤PLFA标记含量存在差异,其中用沼肥处理的蓝莓土壤的PLFA总量最大;与未做任何处理和用草炭处理的相比,用沼渣肥处理的蓝莓土壤中多两个细菌类群,分别是i15∶0(好氧细菌)和a16∶0(革兰氏阳性细菌);通过对不同处理的蓝莓土壤养分含量进行分析发现,添加了沼渣肥的蓝莓土壤有机质、速效钾、有效磷、全氮的含量最高;通过相关性分析可知,蓝莓土壤中微生物生长需要有效磷、有机质、速效钾,特别是腐生真菌、AM真菌、18∶1ω7(假单胞杆菌)等对蓝莓生长有益的微生物更需要有效磷。

关键词：蓝莓(Vaccinium spp.) 根际土壤沼渣肥微生物群落磷脂脂肪酸标记(PLFA)

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光周期对中国水螅种群增长、无性出芽生殖及抗氧化酶活力的影响

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激光生物学报 2017年第2期26卷 132-137页

作者：陈磊磊刘敏张行董文芳潘红春安徽师范大学生命科学学院重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室生物环境与生态安全安徽省高校省级重点实验室安徽芜湖241000 蚌埠医学院公共课程部安徽蚌埠233030

单细胞真核绿藻在中国水螅(Hydra sinensis)内胚层皮肌细胞中共生是有较高科研价值的特殊生物学现象。水螅宿主细胞为共生藻提供CO2、氮源及矿物质,而共生藻通过光合作用可能为宿主提供碳水化合物等有机物营养,因此水螅与共生藻间代谢... 详细信息

单细胞真核绿藻在中国水螅(Hydra sinensis)内胚层皮肌细胞中共生是有较高科研价值的特殊生物学现象。水螅宿主细胞为共生藻提供CO2、氮源及矿物质,而共生藻通过光合作用可能为宿主提供碳水化合物等有机物营养,因此水螅与共生藻间代谢流是以共生藻光合作用为中心,但基于代谢流二者间的互作机制目前尚未阐明。水螅通过营养积累进行出芽生殖,从母体脱落的芽体数量间接反映水螅营养积累的相对量。而光暴露时长能影响共生绿藻光合作用,如果共生藻的确能向水螅细胞转移光合作用产物,那光暴露时长应该能间接影响水螅的营养积累、从而进一步影响水螅无性出芽生殖。为证实该假说,本研究应用种群累积培养法,观察了光周期对中国水螅种群增长、无性出芽生殖及抗氧化酶(SOD和CAT)活力的影响。结果显示,光周期对中国水螅种群增长具有明显的影响。培养15 d后,所有实验组水螅的种群密度均为正增长,其中8L∶16D(在一个24h周期内光暴露8 h、黑暗16 h)实验组种群密度最大、而0L∶24D(持续黑暗)实验组种群密度最小。另外,随着光暴露时长的增加,中国水螅SOD及CAT活力整体均呈下降趋势。结果表明,从光周期对中国水螅无性出芽生殖及两种抗氧化酶活力的影响来看,中国水螅对光周期的生理学响应较为敏感,这个现象可能源于共生绿藻能通过向宿主细胞转移光合作用产物的方式为水螅提供营养补充。

关键词：中国水螅共生绿藻光周期无性出芽生殖抗氧化酶

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