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VDAC1激活PI3K/AKT/mTOR通路促进肺腺癌上皮-间充质转化和细胞增殖的研究

中华预防医学杂志 2025年第3期59卷 317-327页

作者：邢应如张莹苏忆欣刘亚锋周家伟赵沨安徽理工大学医学院淮南安徽理工大学工业粉尘深度净化与职业健康安全安徽省普通高校重点实验室淮南上海市浦东新区人民医院输血科上海安徽中科庚玖医院检验科合肥安徽理工大学第一附属医院甲乳外科淮南

目的探讨电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)对肺腺癌(LUAD)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法采用生物信息学与实验验证相结合的研究方法, 于2023年2月至2024年8月在安徽理工大学医学院中心实验室进行生物信息学分析和细胞学实验验证, ... 详细信息

目的探讨电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)对肺腺癌(LUAD)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法采用生物信息学与实验验证相结合的研究方法, 于2023年2月至2024年8月在安徽理工大学医学院中心实验室进行生物信息学分析和细胞学实验验证, 并利用免疫组化进行临床组织学标本验证, 回顾性分析南京医科大学附属淮安第一人民医院5例肺腺癌和癌旁样本。TCGA网络数据库分析了VDAC1在LUAD中的表达模式、预后价值和功能富集情况。通过慢病毒转染建立VDAC1敲低的A549和VDAC1过表达的H1650细胞模型。通过免疫组化法检测了LUAD组织和癌旁组织标本中VDAC1蛋白的表达差异。通过CCK8实验、划痕愈合实验和Transwell实验探讨VDAC1对LUAD增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)标志物蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶和PI3K/AKT/mTOR信号通路分子的活化水平。结果生物信息学分析揭示VDAC1在LUAD细胞中高表达(P<0.000 1), 是LUAD的独立危险因素(P<0.000 1)。功能富集分析显示PI3K/AKT/mTOR、G2M检查点、P53信号通路被显著富集(P<0. 001)。与癌旁对照组织相比, VDAC1蛋白在肺腺癌组织中的表达水平更高。过表达VDAC1能够促进H1650细胞增殖(P<0.000 1)、迁移和侵袭(P<0.01), 敲低VDAC1能够抑制A549细胞增殖(P<0.000 1)、迁移和侵袭(P<0.05)。Western Blot实验显示, 与对照组比较, 过表达VDAC1的H1650细胞中波形蛋白(1.10±0.11vs 2.39±0.15, P<0.001)、N-钙黏蛋白(0.94±0.12vs 2.72±0.06, P<0.001)、CDK1(0.93±0.04vs 1.53±0.03, P<0.000 1)、CDK2(1.04±0.13vs 2.29±0.06, P<0.001)、CDK4(0.90±0.03vs 2.00±0.11, P<0.01)、p-PI3K(1.08±0.13vs 1.85±0.12, P<0.01)、p-AKT(1.03±0.11vs 1.69±0.06, P<0.001)等表达增高, E-钙黏蛋白表达水平下降(2.18±0.14vs 0.997±0.11, P<0.001);而敲低VDAC1的A549细胞中波形蛋白(1.70±0.26vs 0.97±0.09, P<0.05)、N-钙黏蛋白(1.98±0.25vs 1.03±0.06, P<0.05)、CDK1(1.13±0.03vs 0.95±0.02, P<0.01)、CDK2(2.29±0.12vs 0.92±0.10, P<0.001)、CDK4(1.71±0.096vs 1.12±0.11, P<0.01)、p-PI3K(1.67±0.09vs 0.97±0.03, P<0.001)、p-AKT(1.53±0.04vs 1.02±0.03, P<0.000 1)等表达下降, E-钙黏蛋白表达水平升高(1.04±0.04vs 1.85±0.26, P<0.05)。结论 VDAC1可能通过PI3K/AKT/mTOR激活EMT和细胞周期蛋白依赖性激酶, 进而促进LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：肺腺癌电压依赖性阴离子通道1 上皮-间充质转化 PI3K/AKT/mTOR通路

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双腋动脉1例

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中国临床解剖学杂志 2025年第2期43卷 240-240页

作者：陶伟陈家瑞杨思瑶袁勇亮许欣欣安徽理工大学医学院形态学教研室安徽淮南232001 安徽理工大学安徽淮南232001

笔者在解剖一具老年女性尸体时发现其右侧腋动脉在胸小肌深面发出胸肩峰动脉和胸外侧动脉后,随后分为深、浅两支,管径大小接近的双腋动脉,浅支进入臂部后移行为肱动脉,走行与正常肱动脉无异,但在臂部无分支,在肘窝内分支形成桡动脉和尺... 详细信息

笔者在解剖一具老年女性尸体时发现其右侧腋动脉在胸小肌深面发出胸肩峰动脉和胸外侧动脉后,随后分为深、浅两支,管径大小接近的双腋动脉,浅支进入臂部后移行为肱动脉,走行与正常肱动脉无异,但在臂部无分支,在肘窝内分支形成桡动脉和尺动脉进入前臂(图1);而深支先发出共干的旋肱后动脉和肩胛下动脉,从肩胛下动脉再发出肱深动脉后,进入臂部形成的肱动脉,在臂下部发出尺侧上副动脉后移行为尺侧下副动脉而终(图2),此种变异罕见且其有显著的临床意义,现报道如下。

关键词：胸肩峰动脉胸外侧动脉双腋动脉

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基于CD161构建肺结核的临床诊断模型

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安徽医科大学学报 2025年第3期 515-523页

作者：张莹张志苏施自伦赵沨邢应如安徽理工大学医学院安徽理工大学附属肿瘤医院检验科安徽理工大学附属东方医院集团总医院检验科安徽理工大学第一附属医院甲乳外科上海市浦东新区人民医院输血科安徽理工大学工业粉尘深度净化与职业健康安全安徽省普通高校重点实验室

目的构建临床诊断模型区分肺结核与非结核性肺病。方法收集258例呼吸系统疾病的患者信息，通过R软件采用随机数种子的方式分为训练集152例，测试集106例，比例为6∶4,根据患者诊断是否为肺结核将训练集分为结核组95例和非结核组57例... 详细信息

目的构建临床诊断模型区分肺结核与非结核性肺病。方法收集258例呼吸系统疾病的患者信息，通过R软件采用随机数种子的方式分为训练集152例，测试集106例，比例为6∶4,根据患者诊断是否为肺结核将训练集分为结核组95例和非结核组57例，测试集分为结核组65例和非结核组41例。根据多因素Logistic回归分析确定肺结核影响因素并构建诊断模型，采用受试者工作特征（ROC）曲线、校准曲线及临床决策曲线（DCA）评估诊断模型的预测价值和临床实用性。结果 CD161+%（OR=0.768;95%CI 0.697～0.845;P<0.001）、AST（OR=0.961;95%CI 0.930～0.993;P=0.019）、吸烟史（OR=3.181;95%CI 1.149～8.804;P=0.026）是肺结核发生的独立影响因素。在训练集和测试集中，ROC曲线下面积（AUC）达到了0.870（95%CI 0.816～0.924）和0.887（95%CI 0.827～0.948）,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验结果显示，拟合度较好（训练集χ2=6.213,P=0.623;测试集χ2=6.197,P=0.625）。DCA表明该模型对肺结核发生概率诊断具有较好的参考意义。结论利用CD161+%、AST、吸烟史构建诊断模型具有一定的诊断性能，便于临床快速区别肺结核与非结核性肺病。

关键词：肺结核非结核性肺病 CD161+% 流式细胞术诊断模型列线图

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SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM和Rab7的相互作用

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第9期32卷 1178-1182页

作者：胡东王婉赵润鹏徐雪维邢应如倪升发徐从景铁保贤张荣波吴静安徽理工大学医学检验中心安徽理工大学医学院医学免疫学与检验教研室安徽理工大学附属肿瘤医院安徽淮南232001

目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测Sap... 详细信息

目的研究Rab7在结核分枝杆菌毒力因子分泌性酸性磷酸酶(SapM)诱导的自噬体-溶酶体融合阻断中的作用。方法采用Rab7小干扰RNA(si Rab7)转染Raw264.7细胞,Western blot法检测P62蛋白水平。m Cherry-SapM转染Raw264.7细胞后免疫荧光检测SapM与Rab7共定位情况,免疫共沉淀分析SapM与Rab7的关系。用3种SapM的突变体SapM△ARCA,SapM△FRED和SapM△CT转染Raw264.7细胞,分析SapM的不同突变体与Rab7的关系。结果 si Rab7处理后,细胞P62水平显著增高;免疫组织化学染色结果显示SapM与Rab7在胞内共定位;免疫共沉淀分析显示SapM与Rab7可相互沉淀;3种不同突变形式的SapM中,只有SapM△CT不能与Rab7相互作用。结论 SapM诱导的自噬体-溶酶体融合阻断依赖于SapM与Rab7的相互作用。

关键词：分泌性酸性磷酸酶(SapM) 自噬 Rab7 融合

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结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(SapM)抑制小鼠巨噬细胞自噬

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第6期32卷 726-729页

作者：胡东王婉赵润鹏徐雪维邢应如徐从景张荣波吴静安徽理工大学医学检验中心安徽理工大学医学院医学免疫学与检验教研室安徽理工大学附属肿瘤医院安徽淮南232001

目的研究结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(Sap M)对小鼠巨噬细胞自噬的影响。方法分别用Sap M、渥曼青霉素、饥饿处理GFP-LC3-Raw264.7细胞。荧光显微镜下观察自噬体的形成,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ水平;再用Sap M处... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(Sap M)对小鼠巨噬细胞自噬的影响。方法分别用Sap M、渥曼青霉素、饥饿处理GFP-LC3-Raw264.7细胞。荧光显微镜下观察自噬体的形成,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ水平;再用Sap M处理GFP-LC3-Raw264.7细胞后加氯喹,Western blot法检测LC3Ⅱ水平。结果 Sap M和饥饿均导致GFP-LC3斑点增多和LC3Ⅱ水平增高,在Sap M处理的细胞中加入氯喹并没有引起LC3Ⅱ的进一步升高。结论 Sap M可阻断自噬体与溶酶体的融合,从而抑制小鼠巨噬细胞自噬。

关键词：结核分枝杆菌分泌性酸性磷酸酶(SapM) 自噬融合 Raw264.7细胞微管蛋白相关轻链3(LC3)

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T-bet佐剂对Ag85B抗结核DNA疫苗的免疫调节

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细胞与分子免疫学杂志 2012年第7期28卷 680-683页

作者：陈丽萍张荣波胡东吴静张金凤吴汉霞李昕牛凯安徽理工大学医学院免疫与检验教研室安徽淮南232001 安徽理工大学免疫与感染研究所安徽淮南232001

目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法... 详细信息

目的:构建以Th1转录因子T-bet为基因佐剂的Ag85B新型DNA疫苗,并研究其免疫调控作用。方法:RT-PCR法扩增出Ag85B基因和T-bet基因,克隆入pcDNA3.1质粒构建T-bet和Ag85B真核表达质粒,脂质体法转染重组质粒至RAW264.7细胞系,Western blot法检测质粒蛋白表达情况。3次肌肉注射免疫BALB/c小鼠,末次免疫2周后,ELISA法检测血清中抗Ag85B抗体滴度。同时将脾脏淋巴细胞悬液于Ag85B刺激下培养,ELISA法检测培养液中细胞因子分泌情况。结果:质粒蛋白成功表达,并且质粒剂量与质粒蛋白表达水平呈正相关。此外,T-bet/Ag85B不仅诱导IgG2a滴度显著增高伴随IgG1显著降低,而且还刺激IL-2/IFN-γ(Th1类)分泌增加伴随IL-4/IL-10(Th2类)减少。结论:T-bet增强抗Ag85B特异性IgG2a抗体反应,并诱导显著的Th1细胞优势免疫。

关键词： T—bet Ag85B 疫苗结核免疫调节

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TAT-Ag85B蛋白疫苗的制备和抗结核分枝杆菌效果评价

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第1期31卷 49-53页

作者：张荣波王文洋胡东王婉邢应如何江戴京京吴静安徽理工大学医学院免疫与检验教研室安徽淮南232001 安徽理工大学免疫与感染研究所安徽淮南232001 安徽理工大学附属医院检验科安徽淮南232001

目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag... 详细信息

目的探讨利用HIV反向转导结构域(TAT-PTD)系统表达的转导性Ag85B蛋白疫苗的抗结核分枝杆菌效应。方法构建p ET28a-Ag85B、p ET28a-TAT-Ag85B质粒,原核表达纯化和鉴定后获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;将BALB/c小鼠随机分为3组:Ag85B组,TAT-Ag85B组,PBS组。重组蛋白经皮下免疫小鼠3次,末次免疫后1周处死部分小鼠,ELISA检测小鼠血清中Ag85B抗体滴度,以及脾细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;用流式细胞术检测巨噬细胞经Ag85B、TAT-Ag85B蛋白刺激后表面分子CD80、CD86变化情况;剩余小鼠经尾静脉感染H37Rv结核分枝杆菌,感染后第1、2、4、8周动态监测小鼠肺和脾内结核分枝杆菌载量,并在感染后8周取肺脏进行HE染色,观察肺组织病变情况。结果成功获得Ag85B、TAT-Ag85B蛋白;与Ag85B相比,TAT-Ag85B诱导小鼠表达高水平的Ig G和IFN-γ、IL-2,感染小鼠的脾、肺结核分枝杆菌载量明显减少,肺组织病变范围小、结核分枝杆菌数量少。另外,TAT-Ag85B增强巨噬细胞表面分子CD80/CD86的表达。结论 TAT-Ag85B蛋白疫苗增强巨噬细胞的抗原提呈能力,诱导小鼠产生强烈的Th1免疫应答,有一定的抗结核分枝杆菌保护作用。

关键词： HIV反向转导结构域(TAT-PTD) Ag85B 结核疫苗免疫保护

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溶瘤病毒的抗肿瘤机制及其在临床应用中的研究进展

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肿瘤 2018年第5期38卷 513-518页

作者：钱云云张荣波吴静胡东安徽理工大学医学院免疫学教研室安徽淮南232001 安徽理工大学医学院生物化学教研室安徽淮南232001

溶瘤病毒疗法是指通过溶瘤病毒靶向肿瘤细胞,在细胞内大量复制病毒导致细胞裂解;裂解后释放的病毒分子及相关细胞因子刺激机体产生免疫反应进一步杀伤肿瘤细胞的一种肿瘤治疗手段。溶瘤病毒抗肿瘤的关键在于靶向肿瘤作用和杀伤肿瘤作用... 详细信息

溶瘤病毒疗法是指通过溶瘤病毒靶向肿瘤细胞,在细胞内大量复制病毒导致细胞裂解;裂解后释放的病毒分子及相关细胞因子刺激机体产生免疫反应进一步杀伤肿瘤细胞的一种肿瘤治疗手段。溶瘤病毒抗肿瘤的关键在于靶向肿瘤作用和杀伤肿瘤作用。近期,用分子生物技术对野生病毒株进行优化改造的研究旨在使其具有更强的溶瘤效应和更低的不良反应,作为抗肿瘤药物进入临床治疗。本文将就溶瘤病毒的研究发展、作用机制和临床应用等多个方面,对这一新的肿瘤治疗手段作一综述。

关键词：肿瘤溶瘤病毒疗法 DNA,重组分子靶向治疗

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pCMV-LC3-Ag85B重组质粒DNA疫苗对结核的免疫保护作用

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第11期30卷 1133-1136,1141页

作者：胡东杨小康王婉邢应如王文洋杜昭弘尤其章力陈丽萍吴静张荣波安徽理工大学医学院免疫与检验教研室安徽淮南232001 安徽理工大学免疫与感染研究所安徽淮南232001 安徽理工大学附属肿瘤医院检验科安徽淮南232001

目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、p... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Ag85B抗原基因与微管相关蛋白轻链3(LC3)基因融合的DNA疫苗,探究其抗结核分枝杆菌保护效应。方法构建pCMV-LC3-Ag85B重组质粒并转染RAW264.7细胞,Western blot法检测目的蛋白的表达水平。分别以pCMV、pCMV-Ag85B、pCMV-LC3-Ag85B质粒免疫BALB/c小鼠。末次免疫2周后,Ag85B刺激下培养各组小鼠脾脏淋巴细胞,ELISA检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌水平。末次免疫3个月后,用H37Rv标准株尾静脉注射感染小鼠,计数肺和脾脏结核分枝杆菌载量。结果 pCMV-LC3-Ag85B在RAW264.7细胞的表达水平与质粒浓度呈剂量依赖性。与pCMV-Ag85B免疫组相比,pCMV-LC3-Ag85B免疫组的IL-2、IFN-γ分泌显著增加,而肺和脾脏内结核分枝杆菌载量降低。结论 pCMV-LC3-Ag85B可显著增强Th1型免疫应答,并显示较好的抗结核分枝杆菌免疫保护效应。

关键词：自噬结核分枝杆菌 LC3 Ag85B 免疫保护

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蠕虫免疫调节分子的抗炎作用与机制

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第6期30卷 486-490页

作者：汪雪峰杜久伟安徽理工大学医学院医学检验教研室淮南232001

新近研究发现,一些蠕虫来源的免疫调节分子可预防或治疗小鼠模型中多种自身免疫性疾病和过敏性反应。本文综述了多种蠕虫来源的免疫调节分子及其在小鼠模型中的抗炎效应和作用机制。

关键词：蠕虫免疫调节分子抗炎作用

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