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安徽医科大学学报 2018年第2期53卷 171-175页

作者：陈晴晴束军谢庆书沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响。方法用梯度浓度(0、0.5、1、2、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用MTT法检测MFB对A549细胞增... 详细信息

目的研究不同浓度的二甲双胍丁酸盐(MFB)作用不同时间后对人肺腺癌细胞A549增殖、凋亡与迁移能力的影响。方法用梯度浓度(0、0.5、1、2、4、8 mmol/L)的MFB对离体培养的A549细胞进行处理,在作用24、48 h后,用MTT法检测MFB对A549细胞增殖的抑制率;干预24、48 h后用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率。用划痕实验分析MFB对A549细胞株迁移能力的影响。结果 MTT实验表明,MFB对A549细胞的增殖具有抑制作用,并且在一定浓度范围内呈现出浓度和时间依赖性(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示:实验组细胞凋亡率大于对照组(P<0.05),具有一定的时间和浓度依赖性(P<0.05)。划痕实验结果显示实验组细胞迁移率小于对照组,高浓度用药组细胞迁移率小于低浓度用药组(P<0.05),且药物作用48 h后细胞迁移率<24 h(P<0.05)。结论 MFB在体外能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,其强度可能与其浓度和作用时间有关。

关键词：二甲双胍丁酸盐肺腺癌增殖凋亡迁移

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丙戊酸钠对肺腺癌细胞的增殖、迁移能力的影响

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安徽医科大学学报 2020年第5期55卷 702-706页

作者：代丽丽束军朱宁张梅沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的探讨不同浓度丙戊酸钠(VPA)对肺腺癌PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养PC9细胞,实验分为对照组(无VPA处理组)和实验组(VPA处理组,浓度分别为2、4、8、16 mmol/L),检测不同浓度VPA在不同作用时间条件下对PC9... 详细信息

目的探讨不同浓度丙戊酸钠(VPA)对肺腺癌PC9细胞增殖、迁移能力的影响及其可能的机制。方法体外培养PC9细胞,实验分为对照组(无VPA处理组)和实验组(VPA处理组,浓度分别为2、4、8、16 mmol/L),检测不同浓度VPA在不同作用时间条件下对PC9细胞增殖、迁移能力的影响分别使用CCK-8、划痕实验;检测不同浓度VPA对乳酸脱氢酶(LDH)活性、乳酸(LD)生成量的影响分别使用(LDH)活性检测试剂盒、LD定量试剂盒,检测VPA干预PC9细胞后上清液及细胞内的E-钙黏蛋白(E-cad)及波形蛋白(VIM)的表达水平用ELISA法。结果CCK-8结果表明,VPA可以抑制PC9细胞的增殖,并且呈现出浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05)。划痕实验结果表明,实验组细胞迁移距离小于对照组(P<0.05),划痕宽度比对照组窄。VPA浓度越高,迁移距离越短(P<0.05),划痕宽度越窄。LDH活性和LD检测结果表明,实验组LDH活性和LD生成量较对照组显著降低(P<0.05),随着VPA浓度的增加,LDH活性和LD生成量逐渐降低(P<0.05)。ELISA结果显示,实验组细胞内外E-cad蛋白浓度与对照组相比均显著增高,并且随着VPA浓度增加,E-cad浓度逐渐增高(P<0.05);实验组细胞内外VIM蛋白浓度与对照组相比均显著降低,并且随着VPA浓度增加,VIM蛋白浓度逐渐降低(P<0.05)。结论VPA在体外能够抑制PC9细胞的增殖、迁移,且有可能是通过抑制有氧糖酵解和上皮间质转化途径。

关键词：丙戊酸钠肺腺癌增殖迁移

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高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及VEGF、MMP-2表达的影响

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 363-368页

作者：李晓峰束军程宇徐胜沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室、安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室合肥230032

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖... 详细信息

目的观察高浓度葡萄糖对肺腺癌A549细胞生长及血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法根据处理条件不同,将A549细胞分为:对照组(无干预)、甘露醇组(25 mmol/L甘露醇)、葡萄糖组(10、20、30、40 mmol/L葡萄糖)、顺铂组(5、10、20、40μmol/L顺铂)和联合组(30 mmol/L葡萄糖联合5、10、20、40μmol/L顺铂),分别处理48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖率,比较不同组别间细胞增殖率的差异;对照组、葡萄糖组、甘露醇组处理24 h和48 h后,采用半定量RT-PCR法检测细胞中VEGF、MMP-2的mRNA水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF、MMP-2的蛋白浓度,比较不同组别间VEGF、MMP-2的表达水平差异。结果除10 mmol/L葡萄糖组外,葡萄糖组的细胞增殖率均高于对照组(P<0.05);相同顺铂浓度下,联合组的细胞增殖率高于顺铂组(P<0.05);与对照组比较,葡萄糖组VEGF、MMP-2表达明显增强(P<0.05),且对葡萄糖浓度有一定依赖性,葡萄糖浓度为30 mmol/L时VEGF mRNA、MMP-2的mRNA和蛋白水平达最高值,40 mmol/L时VEGF蛋白浓度最高;相同干预条件,48 h细胞的VEGF、MMP-2表达水平高于24 h(P<0.05)。结论高浓度葡萄糖能促进肺腺癌A549细胞的增殖,增强对顺铂的耐受力及VEGF、MMP-2的表达。

关键词：葡萄糖肺腺癌生长血管内皮生长因子基质金属蛋白酶-2

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早老素在日本血吸虫生殖发育中的作用

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安徽医科大学学报 2021年第10期56卷 1590-1594页

作者：杨旭晗杨菲沈际佳刘淼安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室病原生物学安徽省重点实验室人畜共患病安徽高校省级重点实验室合肥230032

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。... 详细信息

目的探讨早老素在日本血吸虫生殖发育及产卵中的作用。方法分别收集日本血吸虫尾蚴感染小鼠后16、18、24 d后虫体,首先通过荧光定量PCR分析早老素在上述3个阶段表达;从感染后28 d雌虫中分离卵巢,荧光定量PCR分析早老素在卵巢的表达量。体外培养28 d雌雄合抱的成虫,应用siRNA对早老素进行干扰,10 d后,观察早老素被敲降后对血吸虫产卵量,雌雄合抱及生殖系统的影响。结果荧光定量PCR结果显示,早老素在24 d雌虫表达量明显上调,同时证实该基因在卵巢组织高表达。当早老素被敲降后,雌雄合抱率和雌虫的产卵量也有明显下降。激光共聚焦结果显示相对于对照组和Mock组,RNA干扰组的生殖细胞减少,生殖系统形态出现异常。结论早老素在日本血吸虫生殖发育和产卵中起重要调控作用。

关键词：日本血吸虫早老素 RNA干扰生殖

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TXNIP和CEA联合检测对良恶性胸腔积液的诊断价值

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安徽医科大学学报 2015年第3期50卷 341-344页

作者：袁杰清束军王丹平沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230022 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNI... 详细信息

目的探讨硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、癌胚抗原(CEA)联合检测在良、恶性胸腔积液鉴别诊断中价值。方法收集57例胸腔积液患者(良性32例,恶性25例)的临床资料,采用ELISA法测定血清和胸腔积液中TXNIP和CEA浓度水平。结果恶性胸腔积液中TXNIP浓度明显低于良性胸腔积液中的含量;良恶性胸腔积液患者的血清中TXNIP浓度水平差异无统计学意义。TXNIP浓度89.57μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度76%,特异度87.5%,符合率86.96%;CEA浓度5.285μg/L为最佳临界值,恶性胸腔积液的诊断灵敏度88%,特异度90.6%,符合率91.23%。联合试验,并联诊断的灵敏度为97.12%,特异度为79.28%;串联诊断灵敏度为66.88%,特异度98.83%。结论 TXNIP对恶性胸腔积液的诊断具有一定价值,与CEA联合检测可以提高诊断灵敏度与特异度。但是TXNIP对恶性胸腔积液的诊断价值并不优于CEA。

关键词：硫氧还蛋白结合蛋白癌胚抗原胸腔积液诊断

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3-溴丙酮酸对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白表达水平的影响

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安徽医科大学学报 2019年第8期54卷 1174-1178页

作者：张梅束军朱宁沈继龙安徽医科大学第四附属医院呼吸内科合肥230032 安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽重点实验室(安徽医科大学基础医学院病原生物学教研室) 合肥230032

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A54... 详细信息

目的观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对肺腺癌A549细胞迁移、侵袭能力及转移相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白-9(MMP-9)表达能力的影响。方法划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移、侵袭能力;己糖激酶-2(HK2)活性试剂盒检测A549细胞内的HK2活性;ELISA检测试剂盒检测不同浓度3-BrPA对A549细胞培养上清液中和细胞内MMP-9、Vimentin表达水平的影响。结果划痕实验和Transwell结果显示,3-BrPA干预组的A549细胞迁移距离、迁移细胞数和侵袭细胞数均显著低于阴性对照组(P<0.05);HK2活性结果显示,3-BrPA干预组A549细胞内HK2活性明显低于阴性对照组(P<0.05);ELISA实验结果显示,3-BrPA干预组MMP-9、Vimentin表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论 3-BrPA能显著抑制人肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,能显著抑制肿瘤转移相关蛋白MMP-9和Vimentin的表达水平。

关键词： 3-溴丙酮酸肺腺癌迁移侵袭

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乙肝病毒携带产妇感染状态与新生儿发生宫内感染的相关性分析

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中华疾病控制杂志 2014年第5期18卷 391-393页

作者：王兰芳蔡娟何刘媛唐胜利王朝红朱建生沈继龙安徽医科大学病原微生物学教研室安徽病原生物学省级实验室安徽合肥230032 合肥市妇幼保健院安徽合肥230001

目的探讨孕妇乙肝感染状态与新生儿宫内感染的关系。方法将115例乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性的孕妇分为A组(乙肝HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性组)、B组(乙肝HBsAg,HBeAb,HBcAb阳性组)、C组(HBsAg,HBcAb阳性组)、D组(HBsAg,HBeAg阳性组)。对上述部分孕妇进行乙肝两对半及PCR-HBV-DNA值的检测,对其所生的新生儿在出生后24 h内进行乙肝两对半的检测。结果乙肝大三阳(HBsAg,HBeAg,HBcAb阳性)孕妇与乙肝小三阳(HBsAg,HBeAb,HBcAb阳性)孕妇比较,新生儿发生宫内感染差异无统计学意义(P=0.256),乙肝孕妇体内HBV-DNA值>105基因拷贝/ml时发生新生儿宫内感染高于体内HBV-DNA值<105基因拷贝/ml(P=0.001)。结论乙肝大三阳孕妇或体内HBV-DNA载量高是新生儿宫内感染的危险因素,应及时给予阻断,产后及时采取联合免疫措施,减少乙肝患儿的发生。

关键词：肝炎乙型疾病传播垂直婴儿新生流行病学

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弓形虫RH株ROP16Ⅰ/Ⅲ基因缺陷虫株感染BALB/c鼠的致病性研究

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中国人兽共患病学报 2019年第7期35卷 620-625页

作者：何佳丽陈守斌崔雯王聪罗庆礼沈继龙王维安徽医科大学基础医学院安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的旨在深入研究弓形虫棒状体效应分子ROP16与虫株毒力及致病性的关系。方法采用弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ基因敲除RH株(RHΔROP16)攻击感染BALB/c小鼠,在感染后不同时间点与野生株感染鼠比较,动态观察感染动物发病症状、存活时间;HE染色观察... 详细信息

目的旨在深入研究弓形虫棒状体效应分子ROP16与虫株毒力及致病性的关系。方法采用弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅲ基因敲除RH株(RHΔROP16)攻击感染BALB/c小鼠,在感染后不同时间点与野生株感染鼠比较,动态观察感染动物发病症状、存活时间;HE染色观察脑组织、肺组织病理学差异,qRT-PCR检测脾细胞炎性及抑炎细胞因子表达水平。结果两组小鼠的发病症状无明显差异;经HE染色显微镜下观察小鼠肺部及脑部病理学改变亦未见无明显差异;qRT-PCR检测并用Graphpad分析两组虫株感染小鼠的脾细胞Arg-1、IL-10、IL-12、TNF-α及IFN-γ等细胞因子表达水平。数据表明在感染相同时间ROP16缺陷株感染小鼠Arg-1的表达量明显低于野生型虫株(P<0.05);而IL-10、IL-12、TNF-α和IFN-γ的表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论Ⅰ型弓形虫RH株的ROP16Ⅰ/Ⅲ并非是决定急性感染期弓形虫毒力的唯一效应分子;ROP16Ⅰ/Ⅲ可诱导宿主Arg-1高表达,提示与巨噬细胞内虫体的增殖有关。

关键词：弓形虫 ROP16 基因敲除致病性

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金丝桃素体外抗刚地弓形虫速殖子效果的观察

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第3期34卷 203-207页

作者：杨小迪孙希萌王旗崔洁计永胜薛洪宝胡守锋苏胖胖李江艳孟令文乔继琛丁忆晗宋迪吴琦方强陈兴智蚌埠医学院病原生物学教研室、安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 首都医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室北京100069 安徽医科大学病原生物学教研室、安徽省人兽共患病重点实验室合肥230032 蚌埠医学院化学教研室蚌埠233030

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×... 详细信息

目的观察金丝桃素对体外培养的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子的杀伤作用,探讨金丝桃素抗弓形虫的效果。方法将生理盐水(A组)和终浓度为5μg/ml(B组)、50μg/ml(C组)、500μg/ml(D组)的金丝桃素分别加入含弓形虫速殖子1×106个/孔的24孔培养板中,于2、4、6 h后收集虫体,台盼蓝染色检测速殖子着色率,吉氏染色观察速殖子形态和结构变化,透射电镜观察速殖子超微结构的变化,流式细胞仪检测相同处理的携带黄色荧光蛋白的弓形虫的存活情况。结果弓形虫速殖子经不同浓度金丝桃素作用2 h后,B组、C组和D组虫体的台盼蓝着色率分别为(11.0±3.6)%、(25.0±6.3)%和(40.0±2.7)%,D组着色率高于C组和B组(P<0.01),3组均高于A组(6.0±3.0)%,但B组和A组间差异无统计学意义(P>0.05)。作用4 h后,D组着色率为(97.0±2.0)%,高于C组(30.0±7.2)%、B组(20.0±3.0)%和A组(10.0±1.0)%(P<0.01);作用6 h后,D组着色率为(98.0±1.7)%,亦高于C组(42.7±5.5)%、B组(34.0±6.6)%和A组(19.3±4.9)%,两两比较,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。吉氏染色观察发现,随时间的延长和剂量的增高,虫体两端逐渐变圆、肿胀、坏死。透射电镜观察结果显示,随金丝桃素作用时间延长,虫体逐渐肿胀,胞膜与基质间出现明显空隙,虫体内空泡增多、变大,胞膜破裂,内部结构溶解。流式细胞仪检测结果表明,弓形虫速殖子存活率在金丝桃素作用后的各时间段内与对照组间差异有统计学意义(P<0.01);金丝桃素作用2 h后,D组无弓形虫存活,C组弓形虫存活率为(7.9±1.9)%,低于B组(38.1±5.5)%和A组(81.8±6.0)%(P<0.01);作用4 h后,C组无弓形虫存活;B组在作用4 h和6 h后,弓形虫存活率分别为(14.3±7.9)%和(1.4±1.8)%,均低于A组的(73.8±11.3)%和(64.1±14.4)%(P<0.01)。结论金丝桃素具有较强的体外抗弓形虫速殖子效果,且随剂量增高和作用时间延长抗虫效果更明显。

关键词：金丝桃素刚地弓形虫速殖子体外效果

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弓形虫Chinese 1基因型Wh6弱毒株感染小鼠抗强毒株致死性感染的免疫保护作用

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中国人兽共患病学报 2020年第2期36卷 87-93页

作者：陈守斌何佳丽崔雯王聪陶晴计永胜罗庆礼胡晓东沈继龙王维安徽医科大学基础医学院安徽病原生物学省级实验室和人兽共患病安徽省重点实验室合肥230032

目的研究我国流行的优势基因型Chinese 1弱毒Wh6株感染抗致死性强毒Wh3株攻击感染的保护力,探讨其潜在的制备减毒活疫苗的价值。方法将30只BALB/c雌性小鼠随机分为3组(I,II,III组),每组10只。取弱毒株弓形虫保种小鼠脑组织,分离包囊,计... 详细信息

目的研究我国流行的优势基因型Chinese 1弱毒Wh6株感染抗致死性强毒Wh3株攻击感染的保护力,探讨其潜在的制备减毒活疫苗的价值。方法将30只BALB/c雌性小鼠随机分为3组(I,II,III组),每组10只。取弱毒株弓形虫保种小鼠脑组织,分离包囊,计数。I组小鼠灌胃包囊25-35个;II组给与PBS对照;III组正常小鼠不予任何干预。35 d后,I组感染小鼠脑组织压片镜检,查见典型弓形虫包囊,表明慢性弓形虫感染BALB/c小鼠模型建立成功。分别取Wh3株速殖子(3000个),腹腔感染I组和II组小鼠,观察小鼠存活及腹腔虫荷;同时剖杀小鼠,收集脾细胞培养上清,采用流式细胞术、荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验等检测脾细胞中的Th1、Th2细胞因子水平。结果II组对照鼠在感染Wh3株弓形虫速殖子后第7 d内死亡5只,第8 d剩余5只全部死亡,随机取3只死亡小鼠对其腹腔进行计数,计数结果为(1.28±0.0351)×106/mL;而I组小鼠截止实验结束全部存活(P<0.01)。II组鼠脾细胞培养上清Th1细胞因子IFN-γ、IL-12和Th2细胞因子IL-10水平相比I组显著升高(P<0.001)。其中Th1细胞因子升高程度明显高于Th2细胞因子,巨噬细胞向Th1方向极化。结论用弱毒株Wh6包囊攻击感染BALB/c鼠,可诱导强力的抵抗Wh3强毒株致死性感染的免疫保护力。Chinese 1基因型Wh6株具有候选减毒活虫疫苗研究的潜在价值。

关键词：弓形虫疫苗 Chinese 1基因型免疫保护

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