检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2024年第3期54卷 330-336页

作者：戴银杨雪童雨芹吴希陈瑝儿仲月怡胡晓苗王洁茹殷冬冬尹磊沈学怀潘孝成赵瑞宏安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病研究中心安徽合肥230031 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

禽流感病毒 H9 亚型(AIV-H9)、鹅圆环病毒(GoCV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)是水禽常见病原,常发生混合感染且易导致水禽的免疫抑制性疾病。本研究针对 AIV-H9、GoCV 和 MDRV 的基因序列,分别设计特异性引物,通过优化多重 PCR 的反应条件,... 详细信息

禽流感病毒 H9 亚型(AIV-H9)、鹅圆环病毒(GoCV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)是水禽常见病原,常发生混合感染且易导致水禽的免疫抑制性疾病。本研究针对 AIV-H9、GoCV 和 MDRV 的基因序列,分别设计特异性引物,通过优化多重 PCR 的反应条件,建立了这 3 种病毒的多重 PCR 检测方法,并进行特异性、灵敏度和可重复性验证。结果显示,建立的三重 PCR 检测方法能特异性扩增 AIV-H9、GoCV 和 MDRV的目的片段,与新型鹅星状病毒、鸭瘟病毒、鹅细小病毒、禽腺病毒 4 型无交叉反应;最低检出浓度分别为2.93×10^(4)copies/ μL、2.5×10^(2)copies/ μL、3.0×10^(6)copies/ μL;利用该方法对 30 份临床样品进行检测,MDRV检出率为 6.7%,GoCV 和 AIV-H9 的检出率较高,分别为 36.7%和 26.7%。三重 PCR 与单重 PCR 的符合率为 100%。结果表明,该三重 PCR 检测方法特异、灵敏、稳定性好,能够用于这 3 种病毒的流行病学调查和临床检测。

关键词：禽流感病毒H9亚型鹅圆环病毒番鸭呼肠孤病毒三重PCR

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猪流行性腹泻病毒N蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

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华北农学报 2024年第6期39卷 224-230页

作者：殷冬冬丁祥兰梦蝶姬凯元王洁茹尹磊沈学怀戴银赵瑞宏候宏艳胡晓苗潘孝成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心安徽合肥230001 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230001 安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 宁国市动物卫生监督所安徽宁国242300

由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础,通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体(Nb)。利用前期制备的N... 详细信息

由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础,通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体(Nb)。利用前期制备的N蛋白免疫羊驼,采集其外周血并分离淋巴细胞,提取细胞总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增重链抗体重链可变区(VHH),插入pCANTAB5E-ccdb载体,电转化至ER2738感受态细胞,构建VHH噬菌体展示文库;随后,以PEDV N蛋白作为靶向蛋白,对文库进行4轮淘选获得阳性噬菌体,将其克隆至pET-30a载体,表达纯化后通过间接ELISA、Western Blot鉴定Nb的结合力和特异性。结果显示,羊驼经5次免疫后,抗体效价达到1∶25600。构建的噬菌体展示文库库容为4.72×10^(8),丰度为4.3×10^(10 )cfu/mL,阳性率为93.75%。经过4轮筛选,获得16株氨基酸序列不同的Nb,随后验证了Nb45与PEDV N蛋白具有良好特异性和结合能力。研究筛选获得了PEDV N蛋白特异性Nb,为PEDV检测方法的建立和基础研究提供生物材料。

关键词：猪流行性腹泻病毒 N蛋白噬菌体展示纳米抗体特性鉴定

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基于蛋白质组学技术分析初乳和常乳摄入对初生犊牛肝脏蛋白表达的影响

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中国畜牧兽医 2023年第1期50卷 37-45页

作者：吴涛齐云霞刘伟朱洪龙黄冬维丁海生赵辉玲程广龙赵小伟安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230031 安徽省固镇县动物疫病预防与控制中心蚌埠233700

【目的】试验旨在对犊牛肝脏蛋白进行蛋白质组学分析,筛选与初乳、常乳摄入相关的蛋白。【方法】以经产荷斯坦母牛分娩的9头公犊牛为研究对象,随机分为初乳组(CI)、常乳组(M)和对照组(CT),每组3头。初乳组和常乳组犊牛分别饲喂初乳和常... 详细信息

【目的】试验旨在对犊牛肝脏蛋白进行蛋白质组学分析,筛选与初乳、常乳摄入相关的蛋白。【方法】以经产荷斯坦母牛分娩的9头公犊牛为研究对象,随机分为初乳组(CI)、常乳组(M)和对照组(CT),每组3头。初乳组和常乳组犊牛分别饲喂初乳和常乳,于出生后24 h屠宰;对照组未饲喂初乳或常乳,于出生后2 h屠宰。采用Label-free蛋白组学技术对3组犊牛肝脏的蛋白表达谱进行分析,以Q<0.05为阈值筛选各组间的差异表达蛋白,并进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】在犊牛肝脏中共鉴定到3901个蛋白,其中在初乳组、常乳组和对照组中分别鉴定到3521、3646和3548个蛋白,有3202个蛋白在3组中共表达。对差异表达蛋白进行分析显示,初乳组和常乳组犊牛肝脏中共筛选出287个差异表达蛋白,主要参与细胞代谢、应激反应、生长发育和氧化还原等生物过程,显著富集通路为内吞作用、氨基酸代谢和氧化磷酸化;初乳组和对照组犊牛肝脏中共筛选出154个差异表达蛋白,主要参与细胞代谢、单组织过程和肌酸合成等生物过程,显著富集通路为氨基酸代谢、黏着斑和内吞作用等。【结论】饲喂初乳的犊牛肝脏中差异表达蛋白主要参与分解代谢、氧化还原等生物过程,为犊牛摄入初乳后肝脏的蛋白响应机制提供了新的见解。

关键词：初乳常乳新生犊牛肝脏蛋白质组学

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1例土鸡禽白血病病毒与马立克病病毒混合感染诊断与分析

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安徽农业科学 2024年第18期52卷 58-60,66页

作者：胡晓苗殷冬冬沈学怀潘孝成戴银赵瑞宏周学利侯宏艳尹磊刘亚云安徽省农业科学院畜牧兽医研究所/安徽省畜禽疫病研究中心/畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

[目的]对安徽某土鸡场送检的疑似肿瘤病的病料进行鉴定。[方法]采集病死鸡的肝脏,提取病毒DNA,根据Genbank已登录的基因序列设计引物,通过PCR检测,对扩增出的ALV env与MDV meq基因序列进行测序和序列分析。[结果]检测到禽白血病和马立... 详细信息

[目的]对安徽某土鸡场送检的疑似肿瘤病的病料进行鉴定。[方法]采集病死鸡的肝脏,提取病毒DNA,根据Genbank已登录的基因序列设计引物,通过PCR检测,对扩增出的ALV env与MDV meq基因序列进行测序和序列分析。[结果]检测到禽白血病和马立克目的条带,序列比对结果发现,禽白血病病毒为J亚群,马立克为野毒强毒株。[结论]研究结果为了解该地区禽白血病和马立克混合感染情况提供了参考数据。

关键词：禽白血病马立克 PCR 序列分析

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CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测

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中国草食动物科学 2024年第2期44卷 27-31页

作者：万苗苗阳倩陈吉璐陈丹丹毛林班谦陈胜惠文巧安徽大学生命科学学院干细胞及转化医学研究中心合肥230601 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230031

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除

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1株新型鹅星状病毒的全基因序列分析

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安徽农业科学 2024年第16期52卷 87-90页

作者：赵瑞宏胡晓苗侯宏艳周学利潘孝成戴银安徽省农业科学院畜牧兽医研究所/安徽省畜禽疫病研究中心安徽合肥230031 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031

为研究新型鹅星状病毒(Novel goose astroviruses,N-GAstV)的遗传进化特征,获得了鹅星状病毒安徽分离株AstV/AHHX的全长基因,为7251 nt。测序分析显示:AstV/AHHX具有典型的新型鹅星状病毒基因组特征。AstV/AHHX与分离株GDZJ37以及山东... 详细信息

为研究新型鹅星状病毒(Novel goose astroviruses,N-GAstV)的遗传进化特征,获得了鹅星状病毒安徽分离株AstV/AHHX的全长基因,为7251 nt。测序分析显示:AstV/AHHX具有典型的新型鹅星状病毒基因组特征。AstV/AHHX与分离株GDZJ37以及山东分离株G538和G576的遗传距离较近;同时与毒株GDZJ37、G538和G576的ORF2氨基酸序列同源性达100%,ORF1a和ORF1b的同源性也有99.6%以上,推测它们由同一毒株演化而来。ORF2氨基酸序列位点分析显示有12高变异位点,分别是第36(Y/S/H)、60(V/I)、224(T/A)、228(A/S/T)、229(P/Q)、289(T/A)、376(T/A)、456(D/E)、540(Q/L)、608(S/T)、610(E/D/G)、614(N/A/T)位氨基酸。其中第224、228、229、608、614位的氨基酸突变可能导致病毒蛋白质的构象及功能发生变化,进而改变病毒的致病能力。

关键词：新型鹅星状病毒全基因序列分析组织分布

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安徽部分地区鸡场鸡毒支原体与鸡滑液囊支原体感染与垂直传播调查

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中国家禽 2024年第2期46卷 76-81页

作者：沈学怀侯宏艳赵瑞宏尹磊张丹俊戴银殷冬冬王洁茹胡晓苗潘孝成王红燕安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031 安徽省农业科学院先进研究院畜禽疫病防控技术研发中心安徽合肥230031 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 宣城市动物防疫站安徽宣城242000

为了解安徽部分地区规模鸡场鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)流行感染情况,试验采集21家鸡场鸡血液样品进行血清学调查,并对3家种鸡场的种鸡群及其后代雏鸡进行MG和MS的病原检测,分... 详细信息

为了解安徽部分地区规模鸡场鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)和鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)流行感染情况,试验采集21家鸡场鸡血液样品进行血清学调查,并对3家种鸡场的种鸡群及其后代雏鸡进行MG和MS的病原检测,分析种鸡及其后代雏鸡的感染情况。结果显示,MG和MS的鸡场血清阳性率分别为95.24%和90.48%,鸡群平均血清阳性率分别为75.08%和77.01%;商品蛋鸡和种鸡的MG和MS血清阳性率高于育雏育成鸡;鸡群日龄越大,MG和MS的血清阳性率越高,其中300日龄以上鸡群的血清阳性率均为100%。病原检测发现,种鸡场存在不同程度的MG和MS感染,其中MS感染率高于MG;种鸡感染率与其后代雏鸡的垂直感染存在显著正相关,并且在垂直感染的雏鸡关节组织检测出MS病原。结果表明,MG和MS在安徽鸡场中的感染较为严重,垂直传播是雏鸡早期感染的重要途径,并且MS在雏鸡垂直感染的早期即可侵入关节组织。

关键词：安徽规模鸡场鸡毒支原体鸡滑液囊支原体血清学调查垂直传播

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重组酶辅助扩增结合CRISPR/Cas13a检测禽腺病毒4型方法的建立

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云南农业大学学报（自然科学版） 2023年第5期38卷 803-807页

作者：殷冬冬郭浩兰梦蝶尹磊王洁茹沈学怀戴银潘孝成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心安徽合肥230001 畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230001 肥西县农业农村局动物卫生监督所安徽合肥231200 宁国市动物卫生监督所安徽宁国242300

【目的】建立高效、灵敏、特异的禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)检测方法。【方法】将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein 13a,CRISPR-Cas13a)技术相结合,针对FAdV-4 Hexon基因保守区设计RAA引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以qPCR为对照方法,评价所建立方法的灵敏度、特异性以及与qPCR法的一致性。【结果】本研究所建立的方法反应过程均在37℃恒温条件下完成,反应体系可检测的最低扩增拷贝数为101 copies/μL,灵敏度高,且与FAdV-1、FAdV-7、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感H9亚型疫苗和新城疫病毒等禽病原核酸检测无交叉反应。该方法检测30份临床样本与qPCR检测的阳性检出率一致。【结论】建立的RAA-Cas13a方法检测FAdV-4具有简便、灵敏、特异等特点,可用于FAdV-4的快速检测和流行病学监测。

关键词：禽腺病毒4型 CRISPR/Cas13a 重组酶辅助扩增检测

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安徽地区新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因序列分析

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中国预防兽医学报 2024年第8期46卷 805-811页

作者：胡晓苗李薇李婷许夏澎薄宗义郭梦娇张小荣吴艳涛戴银张成成安徽省农业科学院畜牧兽医研究所/安徽省畜禽疫病研究中心/畜禽产品安全工程安徽省重点实验室安徽合肥230031 扬州市职业大学江苏扬州225009 扬州大学兽医学院/江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 河北省定州市农业农村局河北定州073000

为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR... 详细信息

为掌握新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的最新流行特征,本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品,利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行PCR检测及病毒纯净性鉴定;同时对NDRV分离株的全长σC基因进行克隆并测序,将测序所得的分离株σC基因序列与GenBank中登录的21株禽源呼肠孤病毒参考株的相应基因序列及推导氨基酸序列进行相似性比对分析,利用Mega 7.0软件构建分离株基于σC基因的系统进化树,并进行σC基因编码氨基酸序列的突变分析。将分离株接种Vero细胞观察其体外培养特性,感染雏鸭进行致病性试验。结果显示,25份病料样品中检出3份NDRV阳性样品,将阳性病料样品接种鸡胚3 d内,鸡胚全部死亡,并伴有水肿、严重充血等现象;病毒纯净性试验结果显示,病料样品仅NDRV呈阳性,其他病原如鸭甲型肝炎病毒(DHV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、H9亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)及禽腺病毒(FAdV)均为阴性。将3株分离株经测序分析,结果显示,其目的基因序列完全一致,为同一株病毒,并将其命名为NDRV AH株。对NDRV AH株σC基因进行序列相似性分析发现,NDRV AH株与其他NDRV参考株σC核苷酸序列的相似性为89.5%~99.0%,氨基酸序列的相似性为85.3%~98.9%。σC基因的遗传演化结果显示,NDRV AH株属于基因2型。σC氨基酸比对分析结果显示,与灭活疫苗TH11株(KC493571.1)相比,NDRV AH株aa67、aa93、aa100、aa132、aa151、aa158、aa212、aa253和aa298均发生了突变。将该分离株接种Vero细胞,可观察到细胞出现形态圆缩、细胞核聚集等细胞病变。致病性试验结果显示,感染雏鸭死亡率为40%,剖检发现雏鸭肾脏、肝脏出血,脾脏肿大,有轻微坏死灶或大面积坏死灶,有些脾脏质地较硬。可见大面积坏死灶。本研究揭示了NDRV在我国安徽地区的分子流行病学特征,为变异株疫苗研发奠定了基础,对NDRV感染的防治具有重要意义。

关键词：新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定 σC基因进化分析致病性试验

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茶多酚对围产后期奶牛生产性能、血清生化及抗氧化指标的影响

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中国畜牧兽医 2023年第10期50卷 4070-4076页

作者：齐云霞吴涛胡晓苗刘伟朱洪龙韩荣伟杨永新程广龙赵小伟安徽省农业科学院畜牧兽医研究所畜禽产品安全工程安徽省重点实验室合肥230031 固镇县动物疫病预防与控制中心蚌埠233700 青岛农业大学食品科学与工程学院青岛266109

【目的】研究饲粮添加茶多酚对围产后期奶牛生产性能、血清生化及抗氧化指标的影响。【方法】选取36头胎次、预产期相近(产前28 d)的中国荷斯坦奶牛,随机分为3组:对照组、茶多酚1组(TP1)、茶多酚2组(TP2),每组12头。对照组奶牛饲喂基础... 详细信息

【目的】研究饲粮添加茶多酚对围产后期奶牛生产性能、血清生化及抗氧化指标的影响。【方法】选取36头胎次、预产期相近(产前28 d)的中国荷斯坦奶牛,随机分为3组:对照组、茶多酚1组(TP1)、茶多酚2组(TP2),每组12头。对照组奶牛饲喂基础饲粮,TP1、TP2组分别在基础饲粮中每天添加15和30 g/头茶多酚,预试期7 d,正试期42 d。试验结束后采集奶牛的奶样和血样,测定乳成分和血清生化及抗氧化指标。【结果】与对照组相比,TP1、TP2组乳脂产量显著提高(P<0.05),TP2组乳脂率和总固形物含量显著升高(P<0.05);TP2组血清总抗氧化能力(T-AOC)显著提高,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(P<0.05)。此外,TP2组乳脂率和总固形物含量、T-AOC和GSH-Px、SOD、CAT活性均显著高于TP1组(P<0.05)。【结论】饲粮添加茶多酚能够提高围产后期奶牛产后乳脂产量、乳脂率和总固形物含量,血清T-AOC及SOD、CAT和GSH-Px活性升高。本试验中,添加30 g/头茶多酚效果最佳。

关键词：茶多酚围产后期生产性能生化指标抗氧化指标

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