目的:研究2例中国汉族人结节性硬化症TSC1和TSC2基因的突变情况。方法:采用聚合酶链反应扩增2例结节性硬化症患者、患者家族中的正常人及100名健康对照者的TSC1和TSC2基因的全部外显子,并进行DNA测序分析。结果:家系I发现一个无义突变(nonsense mutation):TSC2基因第1372位碱基由胞嘧啶(C)突变为胸腺嘧啶(T),导致第458位氨基酸(精氨酸)处提前出现终止密码子。散发患者II发生了一处移码突变(frame shift mutation):TSC2基因第5238位与5255位碱基之间缺失CATCAAGCGGCTCCGCCA18个碱基,其后密码子发生移位。结论:无义突变c.1372C>T(p.R458X)和移码突变5238-5255 del 18 bp CATCAAGCGGCTCCGCCA1746 del HIKRLR可能是导致这2例患者临床发病的主要原因。
建立了一种新型的寡核苷酸芯片,用于线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS)和肌阵挛性癫痫伴发不规整红纤维(myoclonic epilepsy with ragged...
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建立了一种新型的寡核苷酸芯片,用于线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS)和肌阵挛性癫痫伴发不规整红纤维(myoclonic epilepsy with ragged red fibers, MERRF)线粒体 DNA 所有已知突变位点的集成检测。将31对 allele 位点特异性的寡核苷酸探针包被在醛基修饰的载玻片表面,以多重不对称 PCR 方法制备 Cy5荧光标记靶基因。利用此芯片对5例 MELAS 患者、5例 MERRF 患者及20例健康对照进行筛查,结果发现,MELAS 患者均为 MT-T1基因 A3243G 突变;在 MERRF 患者组,MT-TK 基因 A8344G 突变4例,T8356C 突变1 例;健康对照组均未发现31种相关 mtDNA 突变。芯片检测与 DNA 测序结果完全一致。结果表明,这种寡核苷酸芯片可以对 MELAS 和 MERRF 综合征已知突变位点进行同步快速检测,具有较高的灵敏度和特异性。这一模式的基因芯片经过适当改装后也可用于其他人类线粒体疾病的基因诊断。
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