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中国微侵袭神经外科杂志 2011年第4期16卷 180-183页

作者：张俊牛朝诗韩暄梅加明汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科合肥230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室合肥230001

目的探讨槲皮素对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的诱导分化作用。方法 MTT法检测神经生长因子(NGF)、不同浓度槲皮素(5、12.5、25、50μmol/L)对PC12细胞增殖活性的影响。分别以NGF、不同浓度的槲皮素(5、12.5、25μmol/L)诱导PC12细胞... 详细信息

目的探讨槲皮素对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的诱导分化作用。方法 MTT法检测神经生长因子(NGF)、不同浓度槲皮素(5、12.5、25、50μmol/L)对PC12细胞增殖活性的影响。分别以NGF、不同浓度的槲皮素(5、12.5、25μmol/L)诱导PC12细胞分化,以PBS作为对照组,诱导3 d后,显微镜下观察并记录PC12细胞分化情况,统计分析细胞分化率(轴索长度≥细胞直径的细胞百分数)、具有轴索的细胞数、细胞平均轴索数、梭形细胞比例等细胞分化的形态学参数。结果 MTT检测发现:50μmol/L槲皮素可明显抑制PC12细胞增殖(P<0.05)。与对照组比较,NGF组、槲皮素组(5、12.5、25μmol/L)的细胞均表现出显著分化特征(均P<0.05)。不同浓度槲皮素组(5、12.5、25μmol/L)诱导PC12细胞分化能力没有明显统计学差异。结论槲皮素可诱导PC12细胞分化,但没有明显剂量依赖性。

关键词：槲皮素肾上腺嗜铬细胞瘤大鼠分化神经生长因子

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预热激对6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞神经毒性损伤的保护作用

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中华神经外科疾病研究杂志 2011年第1期10卷 12-15页

作者：张俊牛朝诗梅加明汤深凤安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽合肥230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学及神经再生修复研究室安徽合肥230001

目的探讨预热激对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)神经毒性损伤的保护作用及其机制。方法对实验组SH-SY5Y细胞进行预热激(42±0.5)℃处理,再通过6-OHDA对其进行神经毒性诱导,未行预热激处理细胞作为对照组。逆... 详细信息

目的探讨预热激对6-羟多巴胺(6-OHDA)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)神经毒性损伤的保护作用及其机制。方法对实验组SH-SY5Y细胞进行预热激(42±0.5)℃处理,再通过6-OHDA对其进行神经毒性诱导,未行预热激处理细胞作为对照组。逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同热激时间(15 min、30 min、60 min)SH-SY5Y细胞内葡萄糖调节蛋白(GRP78、GRP94)的表达水平;显微镜下观察细胞形态学变化,并用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测SH-SY5Y细胞活性情况。结果 6-OHDA对SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤呈剂量依赖性及时间依赖性关系,实验组SH-SY5Y细胞较对照组所受的神经毒性损伤轻(P<0.05),且实验组间差异也具有统计学意义(P<0.05);SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94 mRNA表达水平与热应激时间正相关(P<0.05)。结论预热激可降低6-OHDA诱导SH-SY5Y细胞的神经毒性损伤作用,且热激过程中SH-SY5Y细胞中GRP78和GRP94表达上调。

关键词：葡萄糖调节蛋白78 葡萄糖调节蛋白94 SH-SY5Y 神经毒性 6-羟多巴胺

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应用bac—to—bac杆状病毒表达系统在sf9昆虫细胞中重组表达CDNF蛋白

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中华实验外科杂志 2011年第2期28卷 314-314页

作者：张俊牛朝诗梅加明汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科合肥230001 神经分子生物学与神经再生修复研究室

我们通过bac—to—bac杆状病毒表达系统，在st9昆虫细胞中诱导表达出重组CDNF蛋白，现报道如下。

关键词：杆状病毒表达系统 sf9昆虫细胞重组表达 bac F蛋白 CDN 应用诱导表达

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应用bac—to—bac杆状病毒表达系统在sf9昆虫细胞中重组表达保守性多巴胺能神经营养因子蛋白

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中华实验外科杂志 2011年第7期28卷 1186-1186页

作者：张俊牛朝诗梅加明汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科合肥230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室合肥230001

保守性多巴胺能神经营养因子（CDNF）是一类新型神经营养因子，可能对帕金森病（PD）具有一定的治疗作用。我们通过bac—to—bac杆状病毒表达系统，在sf9昆虫细胞中成功诱导表达出重组CDNF蛋白。

关键词：杆状病毒表达系统 sf9昆虫细胞神经营养因子多巴胺能重组表达 bac 保守性 F蛋白

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保守性多巴胺能神经营养因子重组杆状病毒转移载体的构建及鉴定

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中华神经医学杂志 2010年第8期9卷 772-776页

作者：张俊牛朝诗高歌梅加明汤深凤安徽医科大学附属省立医院神经外科.安徽省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室合肥230001

目的构建并鉴定小鼠保守性多巴胺能神经营养因子（mCDNF）重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF. 方法应用Trizol法提取小鼠组织总RNA,反转成cDNA,经PCR扩增得到带有预定酶切位点（BamH Ⅰ、Xho Ⅰ）的mCDNF基因全长（564 bp）,回... 详细信息

目的构建并鉴定小鼠保守性多巴胺能神经营养因子（mCDNF）重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF. 方法应用Trizol法提取小鼠组织总RNA,反转成cDNA,经PCR扩增得到带有预定酶切位点（BamH Ⅰ、Xho Ⅰ）的mCDNF基因全长（564 bp）,回收片段并克隆至pGEM-T载体,测序验证PCR结果的准确性.将mCDNF定向克隆到pFastBacHTb载体,构建含有mCDNF基因的重组质粒pFastBacHTb-mCDNF,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,摇菌抽取质粒进行测序和双酶切鉴定. 结果 RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示得到预定大小的目的条带（564 bp）,mCDNF的T-A克隆经蓝白斑抗性筛选获得阳性克隆,PCR及测序均提示pGEM-T-CDNF载体成功构建.重组质粒pGEM-T-mCDNF和pFastBacHTb载体进行BamH Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶酶切后再连接,得到pFastBacHTb-mCDNF重组质粒,并经PCR、酶切及测序验证无误. 结论本实验成功构建了mCDNF重组杆状病毒转移载体pFastBacHTb-mCDNF,为该营养因子的进一步研究奠定了一定基础.

关键词：保守性多巴胺能神经营养因子重组杆状病毒转移载体帕金森病

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应用神经营养因子治疗帕金森病的研究现状

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中国微侵袭神经外科杂志 2010年第12期15卷 570-573页

作者：张俊牛朝诗安徽医科大学附属省立医院神经外科神经分子生物学与神经再生修复研究室合肥230001

帕金森病的治疗方法一直处于探索中,近20年来,神经营养因子在帕金森病的研究中受到极大的关注。大量实验研究表明,神经营养因子对中脑多巴胺能神经元具有很好的保护作用,有望成为帕金森病的治疗靶点,本文就应用神经营养因子治疗帕金森... 详细信息

帕金森病的治疗方法一直处于探索中,近20年来,神经营养因子在帕金森病的研究中受到极大的关注。大量实验研究表明,神经营养因子对中脑多巴胺能神经元具有很好的保护作用,有望成为帕金森病的治疗靶点,本文就应用神经营养因子治疗帕金森病的研究作一综述。

关键词：帕金森病神经营养因子神经保护神经修复治疗靶点

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pDsRed-C1-CDNF真核表达载体在大鼠骨髓间质干细胞中的表达

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第14期14卷 2518-2522页

作者：张俊牛朝诗高歌汤深凤李静安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽省合肥市230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室安徽省合肥市230001

背景:骨髓间质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,目前,已有将其作为细胞载体对帕金森病进行治疗的相关报道。目的:构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并诱导其在大鼠骨髓间质干细胞中表达。方法:通过RT-PCR的方法从小鼠组织中扩... 详细信息

背景:骨髓间质干细胞是一类具有多向分化能力的成体干细胞,目前,已有将其作为细胞载体对帕金森病进行治疗的相关报道。目的:构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并诱导其在大鼠骨髓间质干细胞中表达。方法:通过RT-PCR的方法从小鼠组织中扩增出CDNF基因片段,并在其两端引入XhoI、BamHI限制性内切酶酶切位点,然后将其克隆至pDsRed-C1真核载体,构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体,并通过Lipofectin2000将其转染至大鼠骨髓间质干细胞中。结果与结论:pDsRed-C1-CDNF真核表达载体经双酶切、单酶切、PCR及测序验证正确,提示已成功构建pDsRed-C1-CDNF真核表达载体并已转染至大鼠骨髓间质干细胞中。

关键词：保守性多巴胺能神经营养因子帕金森病真核表达载体荧光蛋白骨髓间质干细胞

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胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

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中华医学会神经外科学分会第九次学术会议

作者：李冬雪牛朝诗费小瑞刘于海高歌李明武董永飞安徽省立医院神经外科安徽省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室安徽省脑立体定向神经外科研究所

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。

关键词：胶质瘤 Nanog 病理级别

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胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

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中国神经肿瘤杂志 2010年第1期8卷 9-13页

作者：李冬雪牛朝诗刘于海高歌费小瑞李明武董永飞安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室安徽省脑立体定向神经外科研究所安徽合肥230001

背景与目的:Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤中的研究甚少。本研究探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学染色法和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain... 详细信息

背景与目的:Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤中的研究甚少。本研究探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组织化学染色法和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果:Nanog蛋白在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、IV级的阳性率分别为(18.3±9.6)%、(37.9±19.0)%、(53.4±19.8)%,差异有统计学意义(F=14.918,P=0.000);Nanog mRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、IV级中分别为0.1824±0.0310、0.3730±0.0961、0.4594±0.0453,差异有统计学意义(F=65.901,P=0.000),Nanog蛋白和mRNA表达强度随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均未见表达。结论:Nanog在胶质瘤组织中高表达,其表达强度与病理级别密切相关,为进一步研究其与肿瘤干细胞关系及其在胶质瘤的生物学行为中所发挥的作用奠定了基础。

关键词：胶质瘤 Nanog 肿瘤干细胞表达

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胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

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中华神经外科疾病研究杂志 2010年第6期9卷 504-508页

作者：李冬雪牛朝诗刘于海高歌费小瑞李明武董永飞安徽医科大学附属省立医院神经外科安徽合肥230001 安徽医科大学附属省立医院神经分子生物学与神经再生修复研究室安徽合肥230001 安徽医科大学附属省立医院安徽省脑立体定向神经外科研究所安徽合肥230001

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法和逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果 Nanog蛋白在... 详细信息

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法和逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果 Nanog蛋白在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性细胞率分别为18.3%±9.6%、37.9%±19.0%、53.4%±19.8%,差异有统计学意义(F=14.918,P=0.000);NanogmRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级中分别为0.1824±0.0310、0.3730±0.0961、0.4594±0.0453,差异有统计学意义(F=65.901,P=0.000),Nanog蛋白和mRNA表达强度随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均未见表达。结论 Nanog在胶质瘤组织中高表达,其表达强度与病理级别密切相关,为进一步研究其与肿瘤干细胞关系及其在胶质瘤的生物学行为中所发挥的作用奠定基础。

关键词：胶质瘤 Nanog 脑肿瘤干细胞表达

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