检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：周继章中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗... 详细信息

灭活疫苗在预防动物传染病中起着巨大的作用,但是灭活疫苗所使用的灭活剂容易在动物源性食品中残留,容易污染环境,不利于健康。高压脉冲电场能使病原体快速死亡,并且不污染环境。若将高压脉冲电场用于动物传染病疫苗的灭活,将会对疫苗的灭活带来革新,有望为人类提供绿色动物源性食品,保护人类健康。

关键词：脉冲电场病原体灭活

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猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展

猪传染性胸膜肺炎疫苗的研究进展

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会

作者：贺英赵萍储岳峰高鹏程张建军逯忠新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病痛原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

猪传染性胸膜肺炎是猪高度接触性呼吸道疾病,直接造成养猪业的较大经济损失,故掌握猪传染性胸膜肺疫苗的研究进展为进一步有效预防和控制猪传染性胸膜肺炎疾病奠定基础。所以本文就其疫苗的研究进展作了综述。

关键词：猪传染性胸膜肺炎疫苗

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口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：杨彬兰喜殷相平李学瑞李宝玉方玉萍柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室／农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃兰州 730046

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及... 详细信息

用RT-PCR法获得了针对口蹄疫病毒(FMDV)基因组5'非编码区内包含病毒复制起始元件的基因片段ASCN及其结构蛋白VP1基因，将其分别克隆至双顺反子表达载体pIRES中，构建成了双表达质粒pASCN-IR-VP1经酶切、PCR及DNA测序分析表明ASCN及VP1基因已正确地插入到pIRES中，编码序列及插入方向均正确。用脂质体介导法将双效表达质粒导入BHK-21细胞后，经RT-PCR、实时荧光定量PCR检测表明双效表达质粒中的ASCN在细胞中得到了有效转录，mRNA的表达量达到了1.27x106个拷贝/μL。;经夹心ELISA及间接免疫荧光标记等试验表明VP1结构蛋白基因在BHK-21细胞中得到了表达，具有良好的生物学活性。双效质粒pASCN-IR-VPI转染IBRS-2细胞24h后，按100TCID50/0.1mL的量接FMDVOMⅢ毒，结果该质粒能够明显地抑制FMDV的复制，使病变时间推迟约16～18h，接毒48h时的抑制率达到60％以上，蚀斑减少试验也证实了该双效质粒的病毒抑制作用。研究结果表明成功构建了FMDV双效表达载体，为进一步研究双效疫苗免疫效力提供了前期基础。

关键词：口蹄疫病毒反义RNA pIRES 双效疫苗载体疫苗免疫效力实时荧光定量PCR检测

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成... 详细信息

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

关键词：转录介导扩增技术 RNA聚合酶逆转录酶快速检测

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Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rB... 详细信息

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天分别用AsiaⅠ/AKT/03和AsiaⅠ/JSL/06攻击,其PD50值达到6.54 PD/头份、5.20 PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

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山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

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新疆农业大学学报 2008年第3期31卷 1-4页

作者：谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染... 详细信息

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。

关键词：山羊痘病毒 P32基因毕赤酵母诱导表达

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提高核酸疫苗免疫效果的策略

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动物医学进展 2008年第12期29卷 100-105页

作者：张继乐张杰刘永生高云英孙德惠陈豪泰中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100

核酸疫苗因能诱导机体产生保护性免疫,且具有安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视,如何提高核酸疫苗的免疫效果一直是核酸疫苗研究的热点和难点问题。文章主要从优化方法着手,就核酸疫苗研制中质粒载体的构建、抗原加工分子的联... 详细信息

核酸疫苗因能诱导机体产生保护性免疫,且具有安全、热稳定性、价廉等优点而受到高度重视,如何提高核酸疫苗的免疫效果一直是核酸疫苗研究的热点和难点问题。文章主要从优化方法着手,就核酸疫苗研制中质粒载体的构建、抗原加工分子的联合应用、接种途径和剂量以及核酸疫苗在禽病上的应用做一综述。

关键词：核酸疫苗质粒构建接种途径家禽

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AsiaⅠ/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

AsiaⅠ/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

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首届中国兽药大会暨中国畜牧兽医学会动物药品学分会2008年学术年会

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室，兰州 730046 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081

本文利用家蚕杆状病毒表达系统表达了与FMDV空衣壳形成相关的P1-2A, 3C基因，并将获得的空衣壳抗原制备成空衣壳疫苗。在此基础上，按照OIE指定的半量保护率(PD50)测定方法进行疫苗的免疫效力实验，为空衣壳疫苗的最终应用提供依据。

关键词： FMDV空衣壳家蚕杆状病毒载体表达系统疫苗免疫免疫效力实验

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连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

连环恒温扩增技术及其在临床诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室子兰州 730046

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即... 详细信息

连环恒温扩增技术(LAMP)利用针对靶基因的6个区域设计4条特异引物：正向内侧引物(FIP)、正向外侧引物(F3)、反向内侧引物(BIP)、反向外侧引物(B3),利用一种链置换活性DNA聚合酶、底物(dNTP)及反应缓冲液,在恒温65℃左右保温几十min,即可完成核酸扩增反应.如果再设计两条环状引物Loop F和Loop B,可加速扩增反应.该方法既可对DNA进行扩增,也可对RNA进行扩增.作为一种简便、快速、高的特异的基因扩增法，LAMP法在食品卫生质量检验、动物胚胎早期鉴定、临床疾病诊断等领域展现了广阔的应用前景.本文就连环恒温扩增技术在临床诊断中的应用进行论述.

关键词：连环恒温扩增技术临床诊断 DNA聚合酶特异引物

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H9N2亚型禽流感病毒NA基因的原核表达及其免疫反应性分析

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甘肃农业大学学报 2008年第3期43卷 29-32页

作者：易华山侯顺利独军政胡永浩包世俊常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

采用PCR方法扩增H9N2亚型禽流感病毒A/Ck/GS/2/99株NA基因(1 400 bp),克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组原核表达载体pET-NA,转化***21(DE3)感受态细胞,以终浓度0.8 mmol/L的IPTG诱导表达8 h.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:... 详细信息

关键词：禽流感血凝素原核表达 H9N2 免疫反应性

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