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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：刘在新陈应理谢宝霞曹轶梅王永录罗建勋刘湘涛张永光谢庆阁卢曾军李平花白兴文殷宏李冬孙普包慧芳付元芳中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

口蹄疫是严重危害中国畜牧业发展的重大动物疫病,疫苗免疫和精准区分免疫和自然感染动物,筛查并淘汰染毒家畜,是预防和控制口蹄疫的关键措施,也是中国口蹄疫防控的主要策略.针对目前广泛使用的传统口蹄疫灭活疫苗,因纯化不完全,免疫后,... 详细信息

口蹄疫是严重危害中国畜牧业发展的重大动物疫病,疫苗免疫和精准区分免疫和自然感染动物,筛查并淘汰染毒家畜,是预防和控制口蹄疫的关键措施,也是中国口蹄疫防控的主要策略.针对目前广泛使用的传统口蹄疫灭活疫苗,因纯化不完全,免疫后,以检测病毒非结构蛋白抗体为金标准的鉴别技术,难以精准区别免疫和感染动物,既使使用先进的纯化技术,也不能完全清除与灭活病毒大小相同的非结构蛋白复合物,多次免疫后,仍能检测到病毒非结构蛋白抗体,给精准区别免疫动物和感染动物带来了困难,严重阻碍口蹄疫流行病学监测和疫源净化,已成为全球口蹄疫控制计划实施的技术障碍,引起了世界动物卫生组织和口蹄疫控制机构的关注.鉴于此,能精准区别免疫动物和感染动物的标记疫苗成为了研究热点.采用反向遗传学技术,构建带有口蹄疫病毒非结构蛋白优势表位缺失的标记病毒,是研制口蹄疫标记疫苗的最优途径.

关键词：口蹄疫疫苗研制分子标记表位缺失反向遗传学

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转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

转录介导的扩增技术及其在诊断中的应用

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第二届中国生物产业大会

作者：高闪电常惠芸独军政丛国正邵军军林彤中国农业科学院兰州兽医研究所国家口蹄疫参考实验室家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州 730046

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成... 详细信息

转录介导的扩增技术(TMA)是一种利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温反应条件下来扩增RNA或DNA的系统,其原理是带有T7 RNA聚合酶识别的启动子序列的启动子引物与模板退火经反转录形成RNA-DNA杂交分子,被反转录酶的RNase H活性水解形成单链DNA,然后与引物2退火,通过反转录合成双链DNA,在T7 RNA聚合酶的作用下转录,由一分子DNA模板可得到100～1000拷贝转录本,在15～30min内可将靶序列扩增1010左右.TINA是比较敏感的核酸扩增技术，其检测比较简便，适合高通量筛选，在人类白细胞抗原等位基因分型、细菌和病毒的快速检测中发挥了重要作用。本文就转录介导的扩增技术在诊断中的应用进行论述.

关键词：转录介导扩增技术 RNA聚合酶逆转录酶快速检测

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A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

A型口蹄疫病毒空衣壳抗原的表达及其产物免疫原性分析

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中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会（第三届中国兽药大会学术论坛）

作者：李志勇易咏竹殷相平张韵刘明张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C-与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P... 详细信息

将口蹄疫病毒A/WH株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C-与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天用同源强毒攻击,其PD值达到4.33PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

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猪源冠状病毒ORF3和ORF7的克隆及特性分析

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甘肃农业大学学报 2007年第6期42卷 1-7页

作者：李建强柳纪省程杰兰喜胡永浩吴润殷相平李宝玉中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸... 详细信息

参照GenBank中Purdue株全序列对TGEV(猪传染性胃肠炎病毒)TS株的ORF3和ORF7各设计1对特异性引物,经RT-PCR扩增分别获得了1 487 bp和516 bp大小的两个片段,与预期结果大小相符.TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3a核苷酸序列同源性分别为99.1%、93.0%、95.9%、94.4%,相应的氨基酸同源性分别为97.3%、87.8%、93.2%、91.8%,TS株与CHV株、Puedue株、BW021898B株和KT2株的ORF3b核苷酸序列同源性分别为99.5%、98.5%、97.0%、97.8%,相应氨基酸的同源性分别为98.4%、96.3%、94.3%、95.8%,而TS株与PRCVIA1894株的ORF3b核苷酸和氨基酸同源性分别为96.6%和93.9%.TS株ORF7没有发生缺失且和其他毒株有很高的同源性.结果表明:TGEV非结构蛋白高变区在ORF3a第192个碱基至终止密码子之间,TGEV和PRCV在编码ORF3b氨基酸的数量和RNA酶结合位点上有一定的差异.

关键词：猪源冠状病毒传染性胃肠炎病毒 ORF3 ORF7 克隆

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Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

Asia I/JQ株空衣壳疫苗对AsiaⅠ型FMDV两株不同毒株免疫效果的测定

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首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛

作者：李志勇殷相平易咏竹张志芳柳纪省中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室中国农业科学院生物技术研究所

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rB... 详细信息

将口蹄疫病毒AsiaⅠ/JQ株P1-2A、3C基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pVL1393中,构建重组家蚕杆状病毒转移质粒pVL-P12A3C。pVL-P12A3C与线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6 DNA共转染家蚕细胞,经空斑筛选后成功获得了携带有目的基因的重组病毒rBm（P12A3C）。将获得的重组病毒rBm（P12A3C）感染家蚕蚕蛹,通过双抗体夹心ELISA法证明目的基因在蚕体中获得极高水平表达。用蚕表达产物作抗原制备成疫苗免疫牛,免疫动物均产生了特异性抗体。免疫后21天分别用AsiaⅠ/AKT/03和AsiaⅠ/JSL/06攻击,其PD50值达到6.54 PD/头份、5.20 PD/头份。

关键词： FMDV 家蚕杆状病毒载体疫苗

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绵羊CD58基因的克隆与原核表达

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甘肃农业大学学报 2010年第5期45卷 11-14,28页

作者：芦晓立颜新敏吴国华叶奕优李健朱海霞王建科赵志荀崔力凡朱彩珠张强甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心广东深圳518001

通过对猪、绵羊CD58mRNA序列比对,设计出绵羊CD58的特异性引物,应用反转录PCR技术从绵羊淋巴细胞mRNA中扩增出绵羊CD58基因,将该基因克隆到原核表达载体pGEX4-1中进行原核表达.结果表明:克隆出的绵羊CD58cDNA长807bp,其中包含了开放式... 详细信息

通过对猪、绵羊CD58mRNA序列比对,设计出绵羊CD58的特异性引物,应用反转录PCR技术从绵羊淋巴细胞mRNA中扩增出绵羊CD58基因,将该基因克隆到原核表达载体pGEX4-1中进行原核表达.结果表明:克隆出的绵羊CD58cDNA长807bp,其中包含了开放式阅读框;该基因在大肠杆菌中进行表达,SDS-PAGE电泳在53ku处能观察到特异表达的融合蛋白,产物通过Western-blot检测证实,可以被CD58单克隆抗体识别.

关键词：绵羊 CD58基因基因克隆原核表达

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不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控

不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控

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2010年全国养羊生产与学术研讨会

作者：张克山尚佑军刘湘涛中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046

我国养羊区域分布有农区、牧区、半农半牧区，饲养方式有散养(放养)、半舍饲和舍饲3种。本文就肉羊3种不同饲养模式疫病特点及综合防控分别做以概述，以期对业内同行有所帮助。

关键词：饲养模式肉羊疫病特点综合防控区域分布

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传染性海绵状脑病分子生物学及免疫学诊断技术研究进展

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陕西农业科学 2009年第2期55卷 100-105页

作者：杨生海殷宏张杰刘永生陈豪泰马丽娜马艳平丁耀忠中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

传染性海绵状脑病(TSE)也称为朊毒体病,是一种致死性神经退化性疾病,其主要的病理特点是:神经元变性、消解,形成脑实质多孔性泡化,细胞的朊蛋白(PrPC)转变成朊毒体(PrPSC)是TSE的一个基本特征。本文就TSE的分子生物学特点及免疫学诊断... 详细信息

传染性海绵状脑病(TSE)也称为朊毒体病,是一种致死性神经退化性疾病,其主要的病理特点是:神经元变性、消解,形成脑实质多孔性泡化,细胞的朊蛋白(PrPC)转变成朊毒体(PrPSC)是TSE的一个基本特征。本文就TSE的分子生物学特点及免疫学诊断方面作一概述。

关键词：传染性海绵状脑病朊蛋白朊毒体诊断

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羊传染病四季发病特点及其防制

羊传染病四季发病特点及其防制

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中国畜牧兽医学会养羊学分会2012全国养羊生产与学术研讨会议

作者：张克山尚佑军逯忠新刘湘涛家畜疫病病原生物学国家重点实验室，中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室，国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046

本文首先阐述了一年四季羊发生传染病的特点，简要介绍了四季常见的传染病的种类，并根据不同季节的发病状态从疫苗免疫、用药方面提出了相应的防控措施。

关键词：羊传染病发病特点防控对策

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山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建及表达

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新疆农业大学学报 2008年第3期31卷 1-4页

作者：谢芳张强颜新敏吴国华李健朱海霞郭爱疆韩若婵施程洪鞠厚斌朱彩珠岳城才学鹏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室兰州730046 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染... 详细信息

从重组克隆载体pMD18-P32中扩增出山羊痘病毒P32基因,与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-P32。重组质粒pPIC9K-P32用SalⅠ线性化后,与毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115混合后电转化,使重组表达载体与酵母染色体发生同源重组。采用G418抗性梯度筛选法得到高拷贝重组菌株,甲醇诱导目的基因表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析结果表明,用酵母成功表达出了31 kD的重组蛋白,该蛋白具有生物学活性,能被山羊痘阳性血清识别。

关键词：山羊痘病毒 P32基因毕赤酵母诱导表达

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