检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2011年第4期41卷 375-379页

作者：赵金国刘爱红殷宏罗建勋天水市动物疫病预防控制中心甘肃天水741000 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目... 详细信息

为进行抗小亚璃眼蜱疫苗的研究,采用PCR方法从重组质粒pGEM-T-pHyaa4D8中克隆了pHyaa4D8分子的基因片段,构建了真核融合表达载体pPIC9K-pHyaa4D8,在毕赤酵母中进行表达,并对重组酵母菌的发酵条件进行了优化。结果表明,表达出约19ku的目的蛋白,诱导表达的最佳时间是72h。Western-blot分析结果显示,表达产物能被半饱血小亚璃眼蜱雌性成蜱唾液腺抗原免疫兔血清识别,在19ku左右出现目的条带,说明表达的目的蛋白具有反应活性。

关键词：小亚璃眼蜱 4D8基因片段真核表达毕赤酵母

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基于Hsp70基因的马梨形虫分类学定位分析

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中国农业科学 2011年第17期44卷 3694-3700页

作者：罗金刘光远田占成谢俊仁张萍沈辉党根生中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫原病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室/农业部草食动物疫病重点开放实验室西安市长安区动物疾病预防控制中心

【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列(AB248743.1),设计引物TeHsp70F,TeHsp70R,以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增,获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBan... 详细信息

【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列(AB248743.1),设计引物TeHsp70F,TeHsp70R,以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增,获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBank中23种已知虫种的相应序列进行分析比较。【结果】该片段编码639个氨基酸,其疏水性氨基酸达到208个,极性氨基酸167个。同一性分析显示,该基因片段与报道的马巴贝斯虫Hsp70基因(*** BAF02625.1)亲缘关系最近,其次是小泰勒虫(*** XP764717.1)和环形泰勒虫(*** AAA30130.1),而与感染马属动物的另一个虫种驽巴贝斯虫(*** BAF02619.1)亲缘关系较远。【结论】马泰勒虫Hsp70基因的克隆及系统发育分析显示,之前被定名为马巴贝斯虫(***)的虫种隶属于泰勒虫虫种。本试验为马巴贝斯虫正确更名为马泰勒虫(***)的分类地位提供了又一佐证。

关键词：马泰勒虫努巴贝斯虫热休克蛋白(Hsp70) 分类学定位

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非洲猪瘟病毒环介导恒温扩增快速检测技术的建立及应用

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中国动物传染病学报 2011年第4期19卷 7-12页

作者：杨吉飞关贵全刘志杰汪月凤李有全马米玲刘爱红任巧云苟惠天杜鹏飞罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室兰州730046

本研究基于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)vp72基因设计引物,建立了能够快速检测非洲猪瘟病毒的环介导恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。将LAMP与OIE参考的PCR检测方法进行比较,并且应用LAMP对非洲猪瘟参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组以及国内收集的50份猪的基因组、30份蜱的基因组进行检测。结果显示,本研究设计的引物具有良好的特异性和敏感性,所建立的LAMP能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组,而野外收集的猪和蜱的基因组检测均为阴性。因此,本研究所建立的方法能够用于非洲猪瘟的快速诊断以及防控。

关键词：环介导恒温扩增技术聚合酶链式反应非洲猪瘟诊断

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驽巴贝斯虫病PCR检测方法的建立和应用

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中国畜牧兽医 2011年第7期38卷 193-195页

作者：罗金刘光远谢俊仁田占成沈辉王芳芳孙晓林陈荣贵王海军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 新疆伊犁州动物疾病控制与诊断中心新疆伊犁735000 新疆新源县畜牧兽医站新疆新源830000

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6... 详细信息

根据驽巴贝斯虫(Babesia caballi)18S rRNA基因序列设计1对特异性引物,扩增出452 bp核苷酸片段,建立了检测驽巴贝斯虫病的PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法最低能检出0.01 fg/μL驽巴贝斯虫DNA模板。特异性试验结果显示,在被检测的6个巴贝斯虫株中,仅驽巴贝斯虫株能扩增出特异性片段,马泰勒虫、双芽巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫、大巴贝斯虫的扩增结果均为阴性。对45份马属动物血样进行检测,本研究建立的PCR方法测得驽巴贝斯虫病的阳性率为26.67%(12/45),与显微镜检测方法进行了比较,结果显示PCR检测方法可显著提高驽巴贝斯虫的检出率。

关键词：驽巴贝斯虫 PCR诊断方法应用

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蜱的系统分类研究进展

蜱的系统分类研究进展

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中国奶业协会第26次繁殖学术年会暨国家肉牛牦牛/奶牛产业技术体系第3届全国牛病防治学术研讨会

作者：陈泽罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室

随着分子生物学技术在蜱类研究领域的广泛应用,人们逐渐从分子角度并结合形态学特征进行蜱的系统分类学研究。已对蜱类很多类群的分类地位及系统进化关系进行了修订,但仍有一些类群的分类地位存在争议。本文将从蜱的传统系统分类、现代... 详细信息

随着分子生物学技术在蜱类研究领域的广泛应用,人们逐渐从分子角度并结合形态学特征进行蜱的系统分类学研究。已对蜱类很多类群的分类地位及系统进化关系进行了修订,但仍有一些类群的分类地位存在争议。本文将从蜱的传统系统分类、现代系统分类及我国在该领域的研究概况进行综述,并分析了此领域现存的问题,以为蜱和蜱传病的有效防控及其他相关研究领域奠定基础。

关键词：蜱传统系统分类现代系统分类

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一种羊无浆体环介导恒温扩增方法的建立

一种羊无浆体环介导恒温扩增方法的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：马米玲刘志杰关贵全杨吉飞李有全刘爱红任巧云陈泽罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室

羊无浆体是寄生于小反刍兽红细胞内的一种立克次氏体病原。环介导恒温扩增(LAMP)是一种全新的核酸扩增方法,它能在等温条件下高效、快速、特异的扩增靶序列。本研究中,一种羊无浆体环介导恒温扩增方法被建立,引物设计基于它的主要表面蛋... 详细信息

羊无浆体是寄生于小反刍兽红细胞内的一种立克次氏体病原。环介导恒温扩增(LAMP)是一种全新的核酸扩增方法,它能在等温条件下高效、快速、特异的扩增靶序列。本研究中,一种羊无浆体环介导恒温扩增方法被建立,引物设计基于它的主要表面蛋白4(MSP4)基因。本方法可以在65℃,30分钟完成。用几株羊无浆体分离株、边缘无浆体卢氏株、支原体、衣原体、绵羊泰勒虫、吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫及羊巴贝斯虫新疆分离株做交叉反应,发现该方法除于几株羊无浆体分离株有反应外,其它均未反应,证明了该方法特异性良好,并进一步将LAMP产物通过用EcoRⅠ酶切验证。用该方法和常规PCR检测了227份田间样品。LAMP方法检测的敏感性是94.45%,总之,该LAMP方法是一种高效、快速、特异的诊断羊无浆体感染的方法。

关键词：羊无浆体环介导恒温扩增分离株

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一株白僵菌的分离鉴定及其对微小牛蜱的致病力试验

一株白僵菌的分离鉴定及其对微小牛蜱的致病力试验

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：任巧云关贵全李有全马米玲刘爱红刘军龙牛庆丽罗建勋殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室

为了得到用于防控微小牛蜱的高毒力菌株,本试验从野外微小牛蜱饱血雌蜱体表分离出一株白僵菌,通过形态学和分子生物学方法进行了鉴定,确认该分离株为球孢白僵菌。致病力研究表明,当孢子浓度达到108孢子/mL,该菌株对微小牛蜱饱血成蜱的... 详细信息

为了得到用于防控微小牛蜱的高毒力菌株,本试验从野外微小牛蜱饱血雌蜱体表分离出一株白僵菌,通过形态学和分子生物学方法进行了鉴定,确认该分离株为球孢白僵菌。致病力研究表明,当孢子浓度达到108孢子/mL,该菌株对微小牛蜱饱血成蜱的致死率即可达到100%,为微小牛蜱的生物防控试剂的研究及应用奠定了基础。

关键词：微小牛蜱白僵菌分离鉴定

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用不同白僵菌中国分离株对青海血蜱饱血雌蜱进行生物防控

用不同白僵菌中国分离株对青海血蜱饱血雌蜱进行生物防控

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：任巧云孙明关贵全李有全刘志杰刘爱红马米玲牛庆丽刘军龙殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/农业部草食动物疫病重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室

采用浸渍法测定了七株白僵菌对青海血蜱饱血雌蜱的致死率。经过14天的观察,发现菌株***1,***5,and ***7在10～8孢子/mL时致死率达到100%。结果显示此三株菌对青海血蜱饱血雌蜱具高致病性,可作为青海血蜱生物防控的候选菌株。

关键词：青海血蜱中国分离株生物防控白僵菌

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羊泰勒clone88基因的克隆、表达及特性分析

羊泰勒clone88基因的克隆、表达及特性分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：汪月风刘志杰李有全陈泽杨吉飞殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室

我国泰勒虫病是由尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫感染绵羊和山羊引起的血液原虫病,它们的传播媒介为青海血蜱和长角血蜱。该病在我国西北地区广泛分布,危害严重。本研究从构建好的尤氏泰勒虫红细胞阶段裂殖子cDNA文库中筛选出具有潜在抗原性的... 详细信息

我国泰勒虫病是由尤氏泰勒虫和吕氏泰勒虫感染绵羊和山羊引起的血液原虫病,它们的传播媒介为青海血蜱和长角血蜱。该病在我国西北地区广泛分布,危害严重。本研究从构建好的尤氏泰勒虫红细胞阶段裂殖子cDNA文库中筛选出具有潜在抗原性的基因clone88为基础,利用生物信息学软件分析其功能结构域,并有目的性地对该基因进行重组表达,通过分子生物学和免疫学手段,验证其功能。发现clone88是一个潜在的抗原基因,具有信号肽,跨膜结构域,成功构建出原核表达载体在大肠杆菌中进行原核表达。通过镍柱获得纯度较高的重组蛋白,western blot分别检测其与感染尤氏泰勒虫羊的阳性血清及感染吕氏泰勒虫羊的阳性血清的反应性,结果显示前者有特异的反应条带,后者无反应性。即说明该基因具有良好的免疫原性,利用该重组蛋白作为抗原可检测羊尤氏泰勒虫的感染。

关键词：阳性血清吕氏泰勒虫 clone88 特性分析

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麻点璃眼蜱唾液腺中lipocalin的分子克隆与原核表达

麻点璃眼蜱唾液腺中lipocalin的分子克隆与原核表达

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会

作者：陈泽李有全刘志杰杨吉飞殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室

lipocalin是蜱唾液腺中抑制宿主免疫反应及凝血机制的主要蛋白家族之一。目前在蜱体内已发现300多种。该蛋白家族的氨基酸序列相似性很低(旁系同源为15-25%),仅三级结构保守,且功能多样。为此本研究从麻点璃眼蜱半饱血雌蜱的唾液腺中克... 详细信息

lipocalin是蜱唾液腺中抑制宿主免疫反应及凝血机制的主要蛋白家族之一。目前在蜱体内已发现300多种。该蛋白家族的氨基酸序列相似性很低(旁系同源为15-25%),仅三级结构保守,且功能多样。为此本研究从麻点璃眼蜱半饱血雌蜱的唾液腺中克隆出一种lipocalin蛋白(1ipruf)。该基因全长740bp,编码211个氨基酸,其中含有23个氨基酸组成的信号肽。成熟蛋白的分子量为21.1kDa,等电点为8.92。通过BLAST、同源建模及系统进化分析表明lipruf蛋白属于lipocalin家族,预测此蛋白可能具有结合组胺,抑制宿主免疫反应的功能。将lipruf基因通过原核表达载体pGEX-4T-1得到GST融合表达重组蛋白。该结果将为深入研究lipocalin蛋白家族及蜱的防控奠定基础。

关键词：麻点璃眼蜱分子克隆 lipocalin 原核表达唾液腺

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