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作者：袁延庆李有全刘志杰杨吉飞陈泽关贵全罗建勋殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

为研究我国南方四省区羊泰勒虫病的流行情况,分别采用血涂片镜检和PCR方法对采自我国广西壮族自治区、贵州省、广东省和重庆市部分地区的180份份羊血液样品进行检测,并对部分阳性样品进行测序分析.PCR检测结果显示,在贵州省、广东省和... 详细信息

为研究我国南方四省区羊泰勒虫病的流行情况,分别采用血涂片镜检和PCR方法对采自我国广西壮族自治区、贵州省、广东省和重庆市部分地区的180份份羊血液样品进行检测,并对部分阳性样品进行测序分析.PCR检测结果显示,在贵州省、广东省和重庆市的样品中均有羊泰勒虫感染,其中吕氏泰勒虫平均阳性率分别为46.8％(29/62)、90.9％(30/33)和12.7(7/55),绵羊泰勒虫和尤氏泰勒虫均为阴性;广西壮族自治区样品中没有检测到羊泰勒虫感染.18S rRNA基因序列分析表明,检测到的泰勒虫与我国流行的吕氏泰勒虫亲缘关系最近,同源性均高于99.5％.以上结果为进一步了解我国羊泰勒虫病的流行现状及优势虫株的分布提供了重要的参考依据.

关键词：羊泰勒虫病流行病学聚合酶链反应血涂片镜检法序列分析

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梨形虫及其宿主硬蜱的协同进化分析

梨形虫及其宿主硬蜱的协同进化分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：苟惠天罗建勋关贵全刘爱红刘志杰李有全任巧云陈泽杨吉飞殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

为了探讨宿主-寄生虫之间的协同进化关系,基于COI基因使用系统进化分析方法以及计算分子钟的方法来进行研究.结果,共收集到14种梨形虫(8种巴贝斯虫和6种泰勒虫)的COI序列,序列长度为950bp;收集到31种硬蜱(5种血蜱,3种革蜱,7种璃眼蜱,3... 详细信息

为了探讨宿主-寄生虫之间的协同进化关系,基于COI基因使用系统进化分析方法以及计算分子钟的方法来进行研究.结果,共收集到14种梨形虫(8种巴贝斯虫和6种泰勒虫)的COI序列,序列长度为950bp;收集到31种硬蜱(5种血蜱,3种革蜱,7种璃眼蜱,3种花蜱,7种扇头蜱,6种硬蜱)的COI序列,序列长度为586bp.用BEAST估算到梨形虫的分化时间在古新世,约为56.48 Mya,泰勒虫的分化时间约为23.38Mya,巴贝斯虫的分化时间约为25.74Mya.巴贝斯虫形成的时间略早于泰勒虫,但二者均发生在始新世晚期.同时,估算到硬蜱科的分化时间在白垩纪),约为86 Mya.硬蜱属、血蜱属、革蜱属、璃眼蜱属、花蜱属、扇头蜱属的分化时间分别为46.71Mya,46.58 Mya,35.72 Mya,35.42Mya,34.85Mya,37.72 Mya.硬蜱科各属的分化时间均发生在古新世(Palaeoceno)晚期:始新世(Eocene)早期.将二者的分子钟进行比较,梨形虫的分化时间晚于其宿主硬蜱.这种寄生虫宿主进化时间上的不一致性说明梨形虫早期的多样性形成过程,并非由硬蜱伴随而发生.宿主转移事件导致了主要梨形虫谱系的快速分化.另外,从系统进化关系上分析梨形虫和其相应宿主的一致性,某些硬蜱可以传播两种或者以上的梨形虫,有些梨形虫也可被多种硬蜱传播.这说明梨形虫的形成过程并不受宿主的影响,而是独立于宿主单独进行.

关键词：硬蜱梨形虫协同进化计算分子钟

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微小牛蜱饱血雌蜱高毒力真菌菌株的筛选

微小牛蜱饱血雌蜱高毒力真菌菌株的筛选

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：任巧云杨吉飞殷宏罗建勋刘志杰关贵全孙明马米玲牛庆丽李有全刘爱红刘军龙家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

国外学者做了许多有关用昆虫病原真菌防治蜱的试验,结果表明,其对多种蜱的各个生长阶段均有一定程度的杀伤作用,甚至会影响蜱后代的生长发育;国内对昆虫病原真菌的应用研究多集中在对林业害虫的防治,对蜱类的防治研究还未见报道.本实验... 详细信息

国外学者做了许多有关用昆虫病原真菌防治蜱的试验,结果表明,其对多种蜱的各个生长阶段均有一定程度的杀伤作用,甚至会影响蜱后代的生长发育;国内对昆虫病原真菌的应用研究多集中在对林业害虫的防治,对蜱类的防治研究还未见报道.本实验通过浸渍法进行了二十株真菌菌株(13株白僵菌和7株绿僵菌)对微小牛蜱饱血雌蜱的毒力测定,从中筛选出3株白僵菌和一株绿僵菌,此四株菌在孢子浓度为108 conidia mL-1时对蜱的致死率均达到100％.Gindin报道绿僵菌Ma-7菌株在孢子浓度为108 conidia mL-1时对具环牛蜱的致死率为100％.另外,其他四株白僵菌和两株绿僵菌对蜱的致死率也达到了80％.为昆虫病原真菌杀蜱制剂的研究及生产应用提供了参考依据.

关键词：兽医学微小牛蜱生物防控高毒力真菌菌株筛选

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梨形虫条形码基因的筛选

梨形虫条形码基因的筛选

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

本研究对包括18S rRNA、28S rRNA、ITS、COI的全长,以及它们的部分序列(18SD、28SD、ITS1、ITS2)在内的8段DAN区域的484条序列,按照国际条形码联盟推荐的方法对几个候选基因分别从扩增效率、种内距离、种间距离、物种鉴定效率几个方面... 详细信息

本研究对包括18S rRNA、28S rRNA、ITS、COI的全长,以及它们的部分序列(18SD、28SD、ITS1、ITS2)在内的8段DAN区域的484条序列,按照国际条形码联盟推荐的方法对几个候选基因分别从扩增效率、种内距离、种间距离、物种鉴定效率几个方面进行了比较.结果对本实验室25株梨形虫扩增后,18S rRNA、28S rRNA、ITS的扩增效率为100％;而COI在使用了数十对引物后最后的扩增效率仍为84％.通过分析种间变异/种内变异分布频率,除了28SD以外,其余7个片段在种间和种内变异之间都没有明显的gap.虽然两者之间有重叠,但ITS2的重叠部分最小.用三种不同的方法(建树法、最小距离法、本地BLAST法)分别对每条序列作为条形码对物种在种、属水平的鉴定效率进行评价,结果在种一级水平上,28S和28SD具有最高的平均正确鉴定率(98％),其次是COI(95％),最低的为18SD(84％).在属一级水平上,ITS1和CO1的鉴定成功率都为100％,最低的为ITS(91％).虽然18S和18SD在属一级上具有很高的鉴定率,分别为(99％)和(98％),但在种一级上却比较低,仅为(87％)和(81％).总之,通过从扩增效率、序列质量、覆盖度及物种区分能力,综合考虑几个候选序列,得出ITS2是梨形虫现有数据情况下最适的条形码基因.

关键词：兽医学梨形虫条形码基因分子标记序列分析

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基于28S rRNA在巴贝斯虫上的进化分析

基于28S rRNA在巴贝斯虫上的进化分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

本研究使用大亚基核糖体RNA(28S rRNA)基因序列,以及联合序列(28S+18S)对分离自中国的11株巴贝斯虫进行系统进化分析.结果从11株巴贝斯虫基因组中都能顺利的扩增到目的序列,扩增到的基因大小为2,878bp-3,017bp,通过与18S rRNA的序列比较... 详细信息

本研究使用大亚基核糖体RNA(28S rRNA)基因序列,以及联合序列(28S+18S)对分离自中国的11株巴贝斯虫进行系统进化分析.结果从11株巴贝斯虫基因组中都能顺利的扩增到目的序列,扩增到的基因大小为2,878bp-3,017bp,通过与18S rRNA的序列比较,28S rRNA比18S rRNA含有较多的序列信息.应用最大简约法(MP)和贝叶斯法(BI)分别针对18S rRNA、28S rRNA和28S+18S构建系统发育树,通过比较这三棵树,发现他们的拓扑结构也比较相似,只存在细微差异.28S+18S树的自展值和后验概率均要高于其它两棵树.28S能够较好的阐明莫氏巴贝斯虫,大巴贝斯虫和牛巴贝斯虫的遗传关系.总之,与之前基于18S rRNA和其它基因的研究结果比较,28S rRNA在巴贝斯虫上的进化分析可以帮助更好的解释巴贝斯虫种之间的进化关系.甚至在整个梨形虫的研究上,都可以考虑将28S rRNA作为一个新的候选标记基因.另外,将18S rRNA和28S rRNA两个基因连接到一起进行系统发育分析,并得到理想的结果,这也不失为在巴贝斯虫进化分析中的新尝试.

关键词：兽医学巴贝斯虫系统进化标记基因

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中国部分地区羊泰勒虫病的流行病学调查及分类鉴定

中国部分地区羊泰勒虫病的流行病学调查及分类鉴定

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：李有全彭欲率刘志杰关贵全杨吉飞陈泽牛庆丽罗建勋殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

为了掌握近年来中国羊泰勒虫病的流行现状,并对其分离株进行分子分类学鉴定.对分离自2005-2011年间的羊血液基因组以及蜱基因组,依次用吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫特异引物进行PCR扩增.对阳性样品进行18S rRNA基因的特异扩增和... 详细信息

为了掌握近年来中国羊泰勒虫病的流行现状,并对其分离株进行分子分类学鉴定.对分离自2005-2011年间的羊血液基因组以及蜱基因组,依次用吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫和绵羊泰勒虫特异引物进行PCR扩增.对阳性样品进行18S rRNA基因的特异扩增和测序分析,并建立系统发育树.PCR扩增表明在中国所调查的4省9县市,羊泰勒虫病的流行存在明显差异.甘肃省羊泰勒虫病的发病率和感染率较高,主要呈吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫混合感染,现场调查危害比较严重.新疆喀什仅存在绵羊泰勒虫,调查没有见到临床发病病例.在湖北样品中检测到吕氏泰勒虫,但未发现临床上发病病例.在云南样品中没有检测到羊泰勒虫及其发病病例.羊泰勒虫病在中国上述区域呈现不同程度的发病率和感染率,该研究为这些区域羊泰勒虫病的综合防治提供了参考依据.

关键词：羊泰勒虫病流行病学分类鉴定基因测序

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野外青海血蜱体内梨形虫反向线状印迹杂交检测技术的建立

野外青海血蜱体内梨形虫反向线状印迹杂交检测技术的建立

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：牛庆丽殷宏关贵全刘志杰马米玲李有全刘爱红任巧云刘军龙罗建勋家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

本研究旨在建立蜱体内检测梨形虫的反向线状印迹技术.基于泰勒虫和巴贝斯虫的18s rRNA基因,应用一系列通用和特异性引物扩增18s rRNA基因变异区建立反向线状印迹杂交技术检测青海蜱体内感染的梨形虫类型;并在18s rRNA基因V4区域设计通... 详细信息

本研究旨在建立蜱体内检测梨形虫的反向线状印迹技术.基于泰勒虫和巴贝斯虫的18s rRNA基因,应用一系列通用和特异性引物扩增18s rRNA基因变异区建立反向线状印迹杂交技术检测青海蜱体内感染的梨形虫类型;并在18s rRNA基因V4区域设计通用和特异性探针.应用建立的反向线状印迹技术检测了采自甘肃省甘南藏族自治州临潭县的149只青海血蜱.结果显示青海血蜱体内共感染有三种泰勒虫和一种巴贝斯虫,该检测技术的敏感性在染虫率10:7～10:10之间.其中136只蜱应用之前报道的套式PCR方法进行检测,两种检测方法比较结果显示反向线状印迹技术的吕氏泰勒虫检出率高于尤氏泰勒虫,相反,套式PCR方法检测出尤氏泰勒虫的感染率高于吕氏泰勒虫.本研究显示,反向线状印迹杂交技术能够同时检测青海血蜱传播的四类梨形虫,因此可作为梨形虫病流行病学调查的有力工具.

关键词：兽医学梨形虫青海血蜱反向线状印迹杂交技术流行病学

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双芽巴贝斯虫Hsp20一新基因型的发现及生物学特性分析

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中国兽医科学 2019年第5期49卷 567-573页

作者：曲志强张亮罗金陈泽任巧云刘文阁倪军许肖枫吴泽功罗建勋殷宏孙晓林刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的1... 详细信息

为了鉴定分离自甘肃永靖的1株双芽巴贝斯虫Hsp20基因型为一新基因型,参考双芽巴贝斯虫Hsp20核苷酸序列,设计特异性引物。对其进行扩增,利用生物信息学方法对其进行比对分析。结果显示,扩增获得了700 bp的核苷酸片段。与GenBank中公布的18种不同物种的氨基酸序列构建遗传发育树,结果表明本实验获得的双芽巴贝斯虫与美国株和中国新疆株的亲缘关系最近。对其氨基酸序列进行比对分析,发现在第31～85位点存在冗余,与公布的Hsp20氨基酸序列存在明显的差异。通过同源建模分析,发现该冗余致使Hsp20蛋白在第7号位形成1个环形结构,从而引起了第3号位的拉伸。通过生物信息学分析得出,获得的双芽巴贝斯虫甘肃株的Hsp20基因是一新基因型。该基因型的存在为更加准确诊断双芽巴贝斯虫病提供了依据。

关键词：双芽巴贝斯虫 Hsp20 基因型生物学特征

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甘肃省嗜吞噬细胞无形体的流行病学调查及分子分类研究

甘肃省嗜吞噬细胞无形体的流行病学调查及分子分类研究

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

作者：杨吉飞刘志杰关贵全李有全陈泽任巧云罗建勋殷宏家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省寄生虫学重点实验室农业部草食动物疫病重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州 730046

本研究以甘肃省甘南藏族自治州采集的4种反刍动物血液样品、黑线姬鼠及蜱为研究对象,基于嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因,应用套式PCR方法进行检测.结果显示,嗜吞噬细胞无形体在绵羊、山羊、牦牛和犏牛中的感染率分别为42.9％(21/49),38.... 详细信息

本研究以甘肃省甘南藏族自治州采集的4种反刍动物血液样品、黑线姬鼠及蜱为研究对象,基于嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因,应用套式PCR方法进行检测.结果显示,嗜吞噬细胞无形体在绵羊、山羊、牦牛和犏牛中的感染率分别为42.9％(21/49),38.5％(35/91),32.3％(51/158)和35.0％(7/20);在黑线姬鼠中的感染率为16.7％(2/12).在采集的青海血蜱中,嗜吞噬细胞无形体在幼蜱、若蜱中的感染率分别为:2.2％(1/46)和11.9％(7/59)1在成蜱中,雌性和雄性成蜱的感染率分别为:6.7％(40/598)和4.9％(26/528),嗜吞噬细胞无形体在雌蜱中的感染率高于雄蜱,但统计学差异不显著(P＞0.05).对部分阳性样品进行测序,结果显示该地区流行的嗜吞噬细胞无形体与之前国内外报道的菌株有很大差异.上述结果表明嗜吞噬细胞无形体病原在该地区广泛分布,在家养动物、啮齿动物和蜱体内均存在.本研究首次在甘肃省报道了嗜吞噬细胞无形体病原.

关键词：反刍动物嗜吞噬细胞无形体病流行病学分子分类

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基于28S rRNA在泰勒虫上的进化分析

基于28S rRNA在泰勒虫上的进化分析

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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会

本研究对国内感染牛和绵羊的13株泰勒虫的大亚基核糖体RNA序列(28S rRNA)进行了扩增、测序,序列长度在3,031bp-3,061bp之间.由于考虑到扩增28S rRNA基因的全长序列有难度,而且其内部的保守区在进化分析时不太重要,所以又选择其第二、第... 详细信息

本研究对国内感染牛和绵羊的13株泰勒虫的大亚基核糖体RNA序列(28S rRNA)进行了扩增、测序,序列长度在3,031bp-3,061bp之间.由于考虑到扩增28S rRNA基因的全长序列有难度,而且其内部的保守区在进化分析时不太重要,所以又选择其第二、第三变异区(D2-D3)与全长序列在系统进化分析方面进行比较.另外对变异区序列的二级结果进行预测,来评估其作为分子标记基因的可行性.结果:(i)28S rRNA在泰勒虫上作为一个新的分子标记基因,可用于其分子分类及系统进化分析.例如,瑟氏/水牛/东方泰勒虫和中华泰勒虫都感染牛,具有低致病性,显示出具有较近的亲缘关系.另外两种绵羊泰勒虫:吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫也被分在同一分枝中.(ii)D2-D3区作为一段短的分子片段,区分各种泰勒虫的能力与其全长一致,是一段很有潜力的条形码候选基因.(iii)尽管该区域在一级结构上显示出很强的可变性,但在二级结构上,除环形泰勒虫宁夏株外,其余虫株都显示出种内保守,种间变异的特征.这说明预测序列的二级结构,作为一种新方法也可以被利用到泰勒虫的分子分类和进化分析中.总之,本研究应用28SrRNA作为分子标记来研究在中国境内分离的泰勒虫间的进化关系.D2-D3区由于具有很高的变异性很适合作为理想的分类分子片段.而有关二级结构信息,为研究泰勒虫的一些争议种及未定种提供了新的思路.

关键词：兽医学泰勒虫分子标记系统进化

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