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西南大学学报（自然科学版） 2019年第8期41卷 14-19页

作者：吴燕燕唐运林顾偌铖李恬恬包佳玲李田李春峰韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料... 详细信息

我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料,采用多种培养基,分离获得了3株虫生真菌菌株,分别为来自蝽蟓的NB-1,PW-1菌株和来自家蚕的JCY菌株,形态学观察结果表明,各菌株的培养特征与白僵菌属菌株较为一致;分子生物学鉴定表明,各菌株rDNA ITS序列与GenBank中白僵菌属球孢白僵菌多个菌株同源性高达99%,因此将菌株NB-1,PW-1和JCY均鉴定为球孢白僵菌( Beauveria bassiana );生物学特性观察发现不同菌株间分生孢子产生量存在显著差异,分离自蝽蟓僵虫的球孢白僵菌PW-1,NB-1分生孢子产量分别为(7.55±0.15)×10^7个/mL,(6.30±0.40)×10^7个/mL,均高于家蚕分离株JCY,其产孢量仅为(3.02±0.22)×10^7个/mL.结论为后续研发针对包括草地贪夜蛾在内的农林害虫生物杀虫剂奠定了菌种基础.

关键词：球孢白僵菌虫生真菌鉴定蝽蟓家蚕

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10份不同地理来源桑种质资源冬桑叶中的营养与活性成分含量测定

10份不同地理来源桑种质资源冬桑叶中的营养与活性成分含量测定

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第十二届家（柞）蚕遗传育种暨良种繁育学术研讨会

作者：敬成俊代方银杜木英韩彦慧余茂德西南大学生物技术学院家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室西南大学食品科学学院

采用凯氏定氮法、索氏提取法等对来自亚洲、大洋洲部分国家和地区的10份桑种质资源冬桑叶中的营养及活性物质含量进行测定分析,评估不同地理及生态环境来源桑种质资源桑叶的饲料与药食用途开发利用价值。10份桑种质资源冬桑叶干物质中... 详细信息

采用凯氏定氮法、索氏提取法等对来自亚洲、大洋洲部分国家和地区的10份桑种质资源冬桑叶中的营养及活性物质含量进行测定分析,评估不同地理及生态环境来源桑种质资源桑叶的饲料与药食用途开发利用价值。10份桑种质资源冬桑叶干物质中的蛋白质质量比在54.30-77.40mg/g之间,脂肪质量比在17.20-80.30mg/g之间,多糖质量比在5.75-25.00mg/g之间,黄酮质量比在3.03-7.60mg/g之间,多酚质量比在1.38-4.72 mg/g之间,γ-氨基丁酸质量比在0.84-1.0mg/g之间。供试材料中的营养成分含量与活性成分含量间不具有相关性。西庆8号、永胜1号和柬埔寨桑3份来自亚洲的桑种质资源的冬桑叶中的蛋白质含量较高,质量比在73.90-77.40mg/g之间,具有较高的饲料利用价值;来自大洋洲的桑种质资源澳大利亚桑冬桑叶中的多糖、黄酮和多酚含量最高,质量比分别为25.00、7.60、4.72mg/g,具有较高的药食用途开发利用价值。

关键词：桑种质资源冬桑叶营养成分活性物质

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云南地区草地贪夜蛾肠道细菌的分离及鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2020年第1期42卷 1-8页

作者：李青晏唐运林蒋睿轩张永红朱峰白兴荣顾偌铖吴燕燕吴玉娇陈洁李田李春峰韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所云南蒙自661101 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)自2019年1月入侵中国以来,现已蔓延至全国25个省份.为了解草地贪夜蛾的肠道微生物的组成,近期该课题组在云南蒙自地区的玉米地采集了草地贪夜蛾幼虫及成虫,通过分离培养结合16S rDNA测序鉴定其肠道细... 详细信息

草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)自2019年1月入侵中国以来,现已蔓延至全国25个省份.为了解草地贪夜蛾的肠道微生物的组成,近期该课题组在云南蒙自地区的玉米地采集了草地贪夜蛾幼虫及成虫,通过分离培养结合16S rDNA测序鉴定其肠道细菌分离株的种属.在幼虫肠道中分离到32个细菌分离株,通过16S rDNA序列同源聚类可归为4个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠球菌属(Enterococcus)、沙雷氏菌属(Serratia)和摩根菌属(Morganella),其中克雷伯氏菌属(Klebsiella)丰度最高,为53.1%;在成虫肠道中分离到16个细菌分离株归为5个属,分别为不动杆菌属(Acinetobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、微球菌属(Micrococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)和肠杆菌属(Enterobacter),其中不动杆菌丰度最高,为56.0%.该研究首次对入侵中国的草地贪夜蛾成虫肠道细菌进行分离鉴定,为后续研究草地贪夜蛾生物学适应性等重要问题奠定了基础.

关键词：草地贪夜蛾肠道细菌成虫云南地区生物适应性

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家蚕肠粘蛋白基因的鉴定

家蚕肠粘蛋白基因的鉴定

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中国蚕学会第八届青年学术研讨会

作者：夏丹丹韩民锦陈艳萍沈以红家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室西南大学重庆大学生命科学学院

围食膜是昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,具有促进食物消化、保护消化道免受微生物入侵等作用。肠粘蛋白是围食膜的重要成分之一,也是害虫生物防治的一个重要靶标,但目前关于肠粘蛋白的研究还十分有限。本研究... 详细信息

围食膜是昆虫中肠内的一种无脊椎动物特有的几丁质—蛋白复合结构,具有促进食物消化、保护消化道免受微生物入侵等作用。肠粘蛋白是围食膜的重要成分之一,也是害虫生物防治的一个重要靶标,但目前关于肠粘蛋白的研究还十分有限。本研究利用生物信息学分析方法,对家蚕的预测蛋白质数据库中ST含量较高以及氨基酸序列至少重复2次,且含有CBD结构域的蛋白质即肠粘蛋白进行了预测,获得4个IIM-like蛋白基因。结合分子生物学实验,我们发现预测的肠粘蛋白基因在家蚕生活史各个时期均有表达,其中3个基因主要在中肠表达,最终我们鉴定了4个肠粘蛋白基因。比较基因组学分析发现肠粘蛋白的结构具有物种特异性。本结果为后续研究家蚕肠粘蛋白基因的功能奠定了基础,也可为研究其他有基因组数据的昆虫的肠粘蛋白提供借鉴。

关键词：家蚕几丁质结合结构域粘蛋白结构域肠粘蛋白基因

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家蚕脂肪酸去饱和酶基因鉴定及表达分析

家蚕脂肪酸去饱和酶基因鉴定及表达分析

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中国蚕学会第八届青年学术研讨会

作者：于新波张洪燕韩民锦黄先智家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室西南大学重庆大学生命科学学院

脂肪酸去饱和酶是机体合成不饱和脂肪酸的关键酶,广泛存在于生物体内。在昆虫中,脂肪酸去饱和酶承担参与脂类代谢、性信息素合成、抗寒以及细胞膜稳定维持等功能。本研究利用家蚕全基因组数据,基因芯片表达数据及EST数据对家蚕脂肪酸去... 详细信息

脂肪酸去饱和酶是机体合成不饱和脂肪酸的关键酶,广泛存在于生物体内。在昆虫中,脂肪酸去饱和酶承担参与脂类代谢、性信息素合成、抗寒以及细胞膜稳定维持等功能。本研究利用家蚕全基因组数据,基因芯片表达数据及EST数据对家蚕脂肪酸去饱和酶基因家族进行鉴定,共鉴定出家蚕21个脂肪酸去饱和酶基因,命名为Bm Fads1-24。运用同样的方法,我们鉴定了15个已测序昆虫中脂肪酸去饱和酶基因,包括诗神袖蝶(Heliconius Melpomene)13个,烟草天蛾(Manduca sexta)10个,小菜蛾(Plutella xylostella)16个,帝王蝶(Danaus plexippus)18个,黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)15个,冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)19个,埃及伊蚊(Aedes aegypti)16个,致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)12个,意大利蜂(Apis mellifera)8个,弓背蚁(Camponotus floridanus)16个,印度跳蚁(Harpegnathos saltator)14个,蝇蛹金小蜂(Nasonia vitripennis)18个,赤拟谷盗(Tribolium castaneum)16个,豌豆蚜虫(Acyrthosiphon pisum)13个。与其他昆虫相比,家蚕拥有数量最多的脂肪酸去饱和酶基因。芯片表达数据分析发现,预测基因具有明显的组织和时期表达特异性和多样性,显示其广泛参与蚕体多种生理代谢。基因的系统发生分析将家蚕脂肪酸去饱和酶分为5个大类,包括Δ9(16>18),Δ9(18>16),Δ9(14-26),Δ14和Δ10,11去饱和酶,与已报道的其他昆虫脂肪酸去饱和酶分类一致。在家蚕Δ14脂肪酸去饱和酶基因中存在物种特异扩增的分支,结合其组织和发育时期的表达特征,推测其与性信息素的合成相关。对Δ14去饱和酶家族的一个成员Bm Fads5进行全长cDNA克隆,组织原位杂交结果将其定位于雌蛾性信息腺的角质层毛区域,表明其很可能在调节性信息素合成中有功能。

关键词：家蚕脂肪酸去饱和酶基因鉴定原位杂交

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家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验

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中国蚕学会第十四届暨国家蚕桑产业技术体系家（柞）蚕遗传育种学术研讨会

作者：胡志刚董战旗蒋亚明董非凡潘敏慧家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室西南大学生物技术学院

杆状病毒(baculovirus)多角体蛋白(polyhedrin)是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)多角体蛋白基因polh,... 详细信息

杆状病毒(baculovirus)多角体蛋白(polyhedrin)是晚期高水平表达的蛋白质,对于维持病毒粒子在自然环境下的稳定性和在宿主之间的传播至关重要。PCR扩增家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)多角体蛋白基因polh,亚克隆到原核表达载体p ET32,获得重组质粒pET32-polh,并转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21(DE3)表达菌株进行原核表达,诱导表达的融合蛋白带His标签,经镍柱纯化后用于免疫新西兰大白兔,制备抗多角体蛋白的多克隆抗体。Western blot检测该多克隆抗体能够特异识别BmNPV的多角体蛋白。利用该多克隆抗体进行免疫荧光和Western blot分析多角体蛋白的亚细胞定位及表达时相,结果显示多角体蛋白定位于细胞质,且在病毒感染后48 h才可以被检测到。该多克隆抗体可以应用于Bm NPV多角体蛋白的功能研究。

关键词：家蚕核型多角体病毒多角体蛋白多克隆抗体亚细胞定位表达时相

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10份不同地理来源桑种质资源冬桑叶中的营养与活性成分含量测定

10份不同地理来源桑种质资源冬桑叶中的营养与活性成分含量测定

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中国蚕学会第十二届家柞蚕遗传育种与良种繁育学术研讨会

作者：敬成俊代方银杜木英韩彦慧余茂德西南大学生物技术学院家蚕基因组生物学国家重点实验室农业部蚕桑功能基因组与生物技术重点实验室重庆 400716 西南大学食品科学学院重庆 400716

采用凯氏定氮法、索氏提取法等对来自亚洲、大洋洲部分国家和地区的10份桑种质资源冬桑叶中的营养及活性物质含量进行测定分析，评估不同地理及生态环境来源桑种质资源桑叶的饲料与药食用途开发利用价值。

关键词：

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昆虫启动子的研究及应用

昆虫启动子的研究及应用

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中国蚕学会第十四届暨国家蚕桑产业技术体系家（柞）蚕遗传育种学术研讨会

作者：童晓玲石津盖停停方春燕代方银西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法... 详细信息

启动子(promotor)作为基因时空表达调控的重要元件,与RNA聚合酶结合形成转录起始复合体,控制着基因表达的起始时间和表达水平。对启动子的研究可以更好地阐明基因表达调控的机制,为解析基因调控网络奠定基础。本文对昆虫启动子研究方法进行综述,主要阐述昆虫启动子及其特定元件的鉴定方法,以及昆虫启动子的应用。

关键词：昆虫启动子特异序列鉴定应用害虫防治

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CRISPR/Cas9系统在昆虫中的应用

CRISPR/Cas9系统在昆虫中的应用

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中国蚕学会第十四届暨国家蚕桑产业技术体系家（柞）蚕遗传育种学术研讨会

作者：童晓玲方春燕盖停停石津鲁成代方银西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室

CRISPR/Cas9(clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat/CRISPR associated)技术是一种RNA引导的基因组靶向编辑技术,能对基因组序列进行精确编辑,在探究基因功能、修复受损基因、沉默有害基因、改良品质性状等方面... 详细信息

CRISPR/Cas9(clustered, regularly interspaced, short palindromic repeat/CRISPR associated)技术是一种RNA引导的基因组靶向编辑技术,能对基因组序列进行精确编辑,在探究基因功能、修复受损基因、沉默有害基因、改良品质性状等方面具有广阔的应用前景。近年来,随着对CRISPR/Cas9系统研究的不断深入和改造,该系统以其操作简易、省时、高效等优点在生物学研究的众多领域中得以推广和应用。特别是在果蝇(Drosophila)、家蚕(Silkworm)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)和蝴蝶(Butterfly)等多种昆虫中。本文概述了CRISPR/Cas9的结构、作用原理及发展优化,总结了CRISPR/Cas9导入昆虫的策略和在昆虫中的应用,以及对CRISPR/Cas9系统产生脱靶的应对策略,以期对经济昆虫和有益昆虫的分子育种、害虫的生物技术防控等研究提供参考。

关键词： CRISPR/Cas9 基因组编辑昆虫应用

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重庆地区取食高粱的草地贪夜蛾肠道细菌新分离株的鉴定

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西南大学学报（自然科学版） 2019年第9期41卷 9-16页

作者：郭志斌蒋睿轩唐运林顾偌铖李青晏行甜向丽吴燕燕胡源刘秀雷云飞韦俊宏潘国庆周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学生物技术学院重庆400715 西南大学农业部蚕桑生物学与遗传育种重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 重庆江津农业科技有限公司重庆江津402289 重庆市江津区农业技术推广中心重庆江津402260 重庆师范大学生命科学学院重庆401331

为充分认识入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)的肠道微生物,2019年7月该课题组再次在重庆江津地区高粱地采集了草地贪夜蛾幼虫,通过分离培养结合16SrDNA测序鉴定,从江津草地贪夜蛾幼虫肠道中共分离得到38个细菌分离株,归为... 详细信息

为充分认识入侵重庆地区草地贪夜蛾(Spodopterafrugiperda)的肠道微生物,2019年7月该课题组再次在重庆江津地区高粱地采集了草地贪夜蛾幼虫,通过分离培养结合16SrDNA测序鉴定,从江津草地贪夜蛾幼虫肠道中共分离得到38个细菌分离株,归为9个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、肠球菌属(Enterococcus)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium).在课题组前期研究的基础上,新分离到了6个属,分别为克雷伯氏菌属(Klebsiella)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium).同时还对入侵重庆地区采食高粱和玉米的草地贪夜蛾幼虫肠道细菌分离株进行了比较分析,只在采食高粱的草地贪夜蛾幼虫肠道中发现了欧文氏菌属(Erwinia)、微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)的菌株,而气单胞菌属(Aeromonas)、短波单胞菌属(Brevundimonas)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和类香味菌属(Myroides)则只在采食玉米的草地贪夜蛾幼虫肠道中分离得到.通过对同一片江津高粱地的草地贪夜蛾和玉米黏虫(Mythimnaseparata)的肠道细菌分离株进行比较分析,只在草地贪夜蛾肠道中发现了微球菌属(Micrococcus)、欧文氏菌属(Erwinia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)和鞘脂杆菌属(Sphingobacterium),而金黄杆菌属(Chryseobacterium)只发现于玉米黏虫肠道中.

关键词：重庆地区草地贪夜蛾肠道细菌高粱玉米

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